Analyse olfactomètre à quatre sens : une méthode pour évaluer les réponses odorantes-cued à Drosophila

- Un olfactomètre à quatre sens est une chambre fermée avec des ports à sens unique à chaque coin, à travers lequel il peut fournir jusqu’à quatre odeurs, créant des quadrants avec des profils d’odeurs distincts. Commencez une expérience en transférant des mouches éveillées dans la chambre. Évitez l’anesthésie, car cela peut affecter leur comportement pendant l’expérience.

Exposer les mouches à l’air pur et observer leurs mouvements pour s’assurer qu’aucun odorant ne contamine l’olfactomètre et affecte le comportement de la mouche. Ensuite, préparez les odorants d’essai dans des flacons séparés et connectez-les à la chambre principale par les ports unilatus. Exposez les mouches aux odorants pendant une période prédéfinie, en supprimant le stimulus après la fin de l’essai.

Les mouches ont tendance à éviter les quadrants avec des odeurs répulsives tout en se déplaçant vers et en s’installant dans des quadrants avec des odeurs attrayantes. Mesurer les réponses comportementales des mouches odorant-cued en suivant leurs positions au fil du temps comme ils explorent l’olfactomètre.

Dans le protocole suivant, nous utiliserons un olfactomètre à quatre quadrants avec un système de livraison d’air pour analyser le comportement des mouches en réponse au propionate éthylique, un odorant répulsif et au vinaigre de cidre de pomme, ce qui est attrayant.

- Au moins cinq minutes à l’avance, allumez le contrôleur de température et réglez-le à 25 degrés Celsius. Puis, connectez les chambres odorantes à l’aréna par un tube en plastique. Vérifiez la vitesse de débit d’air dans chaque quadrant de l’arène à l’aide d’un débit électronique. Assurez-vous que le contrôle et l’odeur et les flux d’air sont tous deux fonctionnant à 100 millilitres par minute.

- Les mouches sont très sensibles au flux d’air, et il est essentiel que le flux d’air de chaque quadrant soit vérifié avant chaque expérience.

- Maintenant, nettoyez l’arène et les plaques de verre à l’aide de 70% d’éthanol. Essuyez toutes les pièces deux à trois fois et laissez-les sécher à l’air libre avant de procéder. Ensuite, serrez les plaques de verre à l’aréna. Ensuite, transférez les mouches dans l’arène sans anesthésie. En utilisant la gravité, laissez-les entrer par le trou dans l’une des plaques de verre, puis couvrez le trou d’une maille circulaire.

Maintenant, placez l’arène chargée à la mouche dans la chambre étanche à la lumière. Ensuite, connectez les quatre courants d’air de commande à chaque coin d’arène. Fermez la porte de la chambre et laissez les mouches s’acclimater au nouvel environnement pendant 10 à 15 minutes.

Après la période d’acclimation, exécutez une expérience de contrôle de 5 à 10 minutes au cours de laquelle les mouches sont exposées à quatre courants d’air de contrôle. Il est essentiel d’analyser les données immédiatement. Si les mouches ne sont pas réparties uniformément dans l’arène, l’arène doit être réinitialisée.

- Il est essentiel de tester le comportement des mouches de contrôle pour juste l’air pur. Ceci vérifiera rapidement que toutes les conditions de fond sont normales. La lumière de fuite, le déséquilibre de température, l’arène inclinée, ou une contamination d’odeur peuvent tous causer des problèmes.

- Si nécessaire, jetez les mouches et nettoyez l’arène à nouveau. Si une contamination par un odorant est suspectée, remplacez tous les tubes. Continuez à répéter le test de contrôle avec de nouvelles cohortes jusqu’à ce que les animaux ne montrent aucune préférence pour l’un des quatre quadrants. Ensuite, connectez la chambre d’odorant d’essai à la configuration à l’aide d’une valve à trois, ou reconnectez le tube et exécutez une expérience d’essai pendant 5 à 10 minutes. Pendant de plus longs enregistrements expérimentaux, arrêtez et redémarrez rapidement le programme de suivi toutes les 20 minutes, ou les fichiers de données seront trop grands.

Entre les essais, jetez les mouches, nettoyez l’aréna et les plaques de verre avec 70 % d’éthanol et remplacez les tubes du connecteur. Gardez le flux d’air sec qui va continuellement rincer le système. Pour plus d’efficacité, il est bon d’avoir deux arénas pour que le nettoyage puisse se faire pendant les courses.

- Si plusieurs expériences sont menées le même jour, payez des soins extrêmes pour s’assurer qu’aucune odeur n’est laissée dans le système à partir d’une course précédente. Ce n’est normalement pas un problème avec de faibles concentrations d’odorant ou de CO2. Mais pour les stimuli hautement concentrés, jusqu’à un écart de 24 heures entre les pistes d’expérience peut être nécessaire.