Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Drosophila 활동 모니터, 또는 DAM, 한쪽 끝에 플라이 푸드가 장착 된 중심 활동 튜브를 보유하고 다른 쪽은 공기 투과성 가까이. 이 설정은 며칠 또는 몇 주 지속되는 실험 중에 단일 파리를 수용합니다.
온도, 습도 및 광 사이클이 설정된 인큐베이터와 같은 제어된 환경에 DAM을 배치합니다.
운동 활동을 기록하려면 DAM의 검출기에서 판독값을 저장하는 컴퓨터 시스템에 장치를 연결합니다.
비행이 튜브 내부를 앞뒤로 걸을 때 적외선 빔을 교차합니다. 이러한 중단은 각 튜브에 대해 시간이 지남에 따라 DAM에 의해 계산되며 비행 활동의 척도로 작용합니다.
다음 프로토콜에서, 우리는 DROsophila 성인 남성의 circadian 리듬을 연구하기 위해 DAM 시스템을 사용합니다.
- 활동 튜브에 파리를 적재하기 전에 활동 모니터를 수용하는 데 사용되는 인큐베이터를 켜십시오. 인큐베이터 컨트롤을 사용하여 온도를 조정하고 원하는 실험 설계에 따라 DAM 시스템 조명 컨트롤러 또는 인큐베이터의 자체 광 제어 시스템을 사용하여 빛 /어두운 정권을 설정합니다.
다음으로, 이산화탄소로 파리를 마취. 그럼, 미세 한 페인트 브러시를 사용하여, 부드럽게 활동 튜브로 단일 비행을 전송. 미세 한 집게와 약 반 인치 원사의 중간을 잡고 개구부를 연결하고 실험 중에 비행이 탈출하는 것을 방지하기 위해 활동 튜브의 비 식품 끝에 원사를 삽입, 동시에 튜브로 공기 흐름을 허용하면서.
비행이 음식에 달라붙지 않도록 비행이 깨어나지 않도록 튜브를 측면에 놓아 두십시오.
마지막으로 활동 모니터를 인큐베이터에 넣고 전화선을 통해 데이터 수집 시스템에 연결합니다.
이제 파리가 활동 관에 적재되고 운동 활동 모니터링 시스템이 준비되었으므로 데이터를 기록 할 수 있습니다.
이 프로토콜에 비해 circadian 리듬의 연구를 위해, 인큐베이터에서 빛이 이동하는 시간은 시대적 시간 0으로 정의되고 다른 모든 시간은 그 값에 상대적입니다.
자유 실행 운동 활동 리듬은 훈련 기간 후 일정한 어둡고 온도 조건에서 측정됩니다. 광 주기에 대한 설정은 LD의 마지막 날에 어두운 단계에서 언제든지 변경할 수 있으며, 이러한 실험의 후속 일은 DD의 첫날을 나타내므로 DD 데이터 수집의 7 일 은 플라이의 순환 기간 및 진폭 또는 강도를 계산하기에 충분합니다.
일반적으로, 특정 유전자형에 대해 신뢰할 수 있는 자유 실행 기간을 얻기 위해서는 최소 16개의 플라이의 샘플 크기가 필요하다.
원시 바이너리 데이터는 DAM Filescan102X를 사용하여 처리되며, circadian 매개 변수를 분석할 때 15 분 및 30 분 쓰레기통으로 요약되거나 수면 / 휴식 매개 변수를 분석 할 때 1 ~ 5 분 쓰레기통으로 요약됩니다. 현재 5 개의 연속적인 비활성 분은 Drosophila에서 수면 / 휴식의 표준 정의입니다.
