Encyclopedia of Experiments: Biology
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- यौगिक को विषाक्तता के लिए परीक्षण करने के लिए तैयार करके शुरू करें, और इसे परख प्लेट के कुओं में वितरित करें। उपयुक्त विकास स्तर के कीड़े को प्रत्येक कुएं में स्थानांतरित करें, और तुरंत एक टाइमर शुरू करें। क्षतिग्रस्त किसी भी कीड़े को ध्यान दें और उन्हें अपने अस्तित्व की गणना में शामिल न करें।
पूर्व निर्धारित समय के बाद, प्रत्येक कुएं में अभी भी जीवित हैं कि कीड़े की संख्या गिनती। एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप या प्लेट पर कोमल दोहन की उज्ज्वल रोशनी किसी भी जीवित कीड़े को स्थानांतरित करने के लिए कारण होना चाहिए । हर बार अंतराल के बाद इस अवलोकन को दोहराएं, जब तक कि अधिकांश जानवर मर न जाएं । निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम पैराक्विट के संपर्क में आने के दौरान एल4 लार्वा जीवित रहने का समय देखेंगे, एक यौगिक जो ऑक्सीडेटिव तनाव को प्रेरित करता है ।
- इस प्रदर्शन में पैराक्विट का उपयोग करके ऑक्सीडेटिव स्ट्रेस को प्रेरित किया जाएगा। 100 मिलीमीटर पैराक्विट समाधान तैयार करें जैसा कि साथ प्रोटोकॉल पाठ में वर्णित है। पैराक्विट एक खतरनाक और अत्यधिक विषाक्त यौगिक है, और उचित दिशानिर्देशों के अनुसार इसे संभाला जाना चाहिए।
96-वेल प्लेट के हर कुएं में पैराक्विट समाधान के 40 माइक्रोलीटर पिपेट। हर स्थिति की प्रतिकृति के रूप में कम से कम 12 कुओं का उपयोग करें। प्लेटिनम तार कीड़ा लेने का उपयोग करके, हर कुएं में पांच से आठ एल4 लार्वा जानवरों को स्थानांतरित करें।
हर कंडीशन टेस्ट के लिए स्टार्ट टाइम और एंड टाइम को इंगित करें। 96-वेल प्लेट को 20 डिग्री सेल्सियस पर रखें। शुरू होने के समय के एक घंटे बाद, विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करके मृत और जीवित जानवरों को स्कोर करें। गिनती शुरू करने से पहले धीरे-धीरे प्लेट को हिलाएं।
कीड़े जो उच्च तीव्रता वाले प्रकाश को खोलना के बाद भी नहीं चलते हैं, उन्हें मृत के रूप में बनाए जाते हैं। जीवित कीड़े से मृत कीड़े को अलग करने के लिए उच्च आवर्धन पर कृमि के आकार, पूंछ और सिर के आंदोलन को देखें। जब तक कि अधिकांश कीड़े मर न जाएं, और इस परख को कम से कम तीन स्वतंत्र बार दोहराएं।
हर बार के लिए जीवित रहने के प्रतिशत का निर्धारण करने के लिए, पहले प्रत्येक कुएं में स्थानांतरित जानवरों की कुल संख्या को जोड़कर प्रति स्थिति जानवरों की कुल संख्या की गणना करें । स्थानांतरण पर क्षतिग्रस्त या मारे गए जानवरों को अनदेखा करें । इसके बाद, हर बार बिंदु के लिए, प्रति शर्त मृत जानवरों की कुल संख्या की गणना करें । मृत्यु के प्रतिशत और जीवित रहने के प्रतिशत की गणना करें ।
