Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- כדי להתכונן לזריקה, השתמש בבחירת תולעת כדי להניח מסלול של שמן ההילה על כרית agarose. מניחים תולעים בשמן ומשתקים אותן על ידי דחיפתן בעדינות על כרית האגר.
בעדינות לדחוף את המחט דרך הקוטיקל ולהזריק את זרוע gonad עם חומצת גרעין או תרכובת של עניין. כל זרוע gonad מכיל syncytium נבט כי יתפתח ביציות בודדים. חומר מוזרק לתוך גונד דיסטלי ישולב אלה ביציות להשפיע על הדור הבא.
לאחר הזרקת תולעים, להחליף את השמן עם חיץ M9. ברגע שהתולעים מתחילות לנוע, להעביר אותם לצלחת אגר NGM עם מזון חיידקי. בפרוטוקול הבא, שיטת microinjection gonad משמש כדי לספק קומפלקס Cas9 כדי למקד ולערוך את הגן dpy-10.
- התחל עם הכנת C. elegans ו רפידות agarose כמתואר בפרוטוקול הטקסט. השתמש בחר תולעת כדי להניח מסלול קטן של שמן halocarbon לאורך קצה אחד של כרית. לאחר מכן, להשתמש בקוטף התולעת מצופה בשמן כדי להרים כמה תולעים את צלחת אגר NG לתוך המסלול של שמן. לעלות ולהזריק תולעת אחת בכל פעם.
לאחר המיקום ומחוברים לכריתה, מכסים את התולעים עם עוד כמה טיפות של שמן הולוגרבון מקצה תא התולעת.
לעבור להגדלה גבוהה ולמקם מחדש את המחט הסמוכה לזרוע האשכון, מתאים לאזור ליד הגרעינים באמצע עד מאוחר- pachytene. באמצעות micromanipulator, להזיז את המחט נגד התולעת, מדכא את הקוטיקל מעט. ואז, ביד אחת, הקש על הצד של שלב המיקרוסקופ כדי לטלטל את המחט דרך הקוטיקל.
לאחר הזרקת התולעים, להסיר את הכיסוי בכרית agarose ומניחים אותו תחת מיקרוסקופ מנתח. באמצעות פיפטה נימי משך, לעקור את השמן מן התולעים על ידי pipetting מאגר M9 מעליהם. בצע טיפול זה כדי לשחרר את התולעים מן האגר. לאחר 10 דקות, כאשר התולעים הם חבטות סביב החיץ, להעביר אותם לצלחת אגר NG עם חיידקים OP50 באמצעות פיפטה נימי משך. צלחות אגר עם OP50 לאחר מכן, להעביר את הצלחות לאינקובטור 25 מעלות צלזיוס.
