Test di risposta fotomotoria: un metodo per misurare la risposta comportamentale di Larval Zebrafish a un improvviso cambiamento nelle condizioni di illuminazione

- Per iniziare, trasferire 10 embrioni di zebrafish, con l'aiuto di una pipetta di trasferimento, in un becher riempito con 20 millilitri di acqua. Ora, far crescere gli embrioni a 28 gradi Celsius, sotto l'appropriato ciclo buio chiaro necessario per un esperimento. Successivamente, trasferire le larve in piastre di pozzo. Assicurarsi che ogni pozzo contenga una larva per dare spazio sufficiente per nuotare.

Ora riempire completamente ogni pozzo con acqua. Posizionare la piastra del pozzo nella camera di registrazione comportamentale e tenere traccia del movimento larvale utilizzando il software di tracciamento video. Le larve mostrano un aumento del movimento al buio e una diminuzione del movimento nella luce quando esposte a un ciclo di luce e buio anomalo a causa dell'aumento dei livelli di stress. Calcolando la differenza tra la distanza media percorsa durante l'ultimo minuto di un periodo iniziale e il primo minuto del periodo successivo ci dice la risposta fotomotoria del pesce.

In questo protocollo esamineremo la risposta fotomotoria nelle larve di zebrafish e fathead minnow esposte alla caffeina. In primo luogo, posizionare la piastra del pozzo contenente il pesce sperimentale nella camera di registrazione comportamentale. Quindi, aprire il protocollo di tracciamento precedentemente sviluppato. Nel visualizzatore di tracciamento video, assicurarsi che tutte le larve siano visibili, che sia presente una sola larva in ogni pozzo e che i pozzi siano allineati con le aree di osservazione definite.

Quindi, fate clic su Esperimento (Experiment) ed Esegui (Execute). Specificate il nome e salvate la posizione dei dati e fate clic sull'icona Diverse immagini in tempo reale (Several Live Images) per evidenziare tutte le aree di visualizzazione predefinite. Infine, chiudete il pannello della camera di registrazione e fate clic su Sfondo (Background), quindi fate clic sull'icona Diverse immagini in tempo reale (Several Live Images) per evidenziare tutte le aree di visualizzazione predefinite. Infine, chiudete il pannello della camera di registrazione e fate clic su Sfondo (Background) seguito da Start sul monitor del computer.