Test di risposta optocinetica: un metodo per misurare l'acuità visiva in Zebrafish

- Fissare un pesce anestetizzato su una piattaforma con gli occhi e le branchie che si estendono oltre il bordo della piattaforma. Posizionare il pesce in posizione verticale in un cilindro pieno d'acqua all'interno di un tamburo ben illuminato che può ruotare liberamente. Una volta che il pesce si ravviva, indicato dal movimento della branchia e degli occhi, posizionare una griglia o un motivo di strisce verticali bianche e nere alternate nel tamburo. Ora posizionare un solido occluder nero sulle strisce nella vista dell'occhio sinistro.

Iniziare la rotazione e registrare la risposta optocinetica, OKR, per l'occhio destro. L'OKR è costituito da movimenti riflessivi degli occhi in risposta a uno stimolo visivo. Sostituire il motivo con strisce bianche e nere sempre più piccole fino a quando il movimento degli occhi non è più osservato. Eseguire la stessa procedura per l'occhio sinistro.

Per calcolare l'acuità visiva monoculare, la capacità di distinguere i dettagli fini, misurare la distanza dal centro dell'obiettivo dell'occhio al modello e la lunghezza del modello più piccolo di una coppia di strisce bianche e nere in cui è stato osservato il movimento degli occhi. Nel protocollo di esempio, useremo la risposta optocinetica per misurare l'acuità visiva monoculare e binoculare nel pesce zebra adulto.

- Gli studi optocinetici vengono effettuati con un dispositivo di registrazione personalizzato utilizzando un tamburo rotante di 14,5 centimetri di diametro, un microscopio stereo con impostazioni regolabili dell'intensità della luce, un computer e una fotocamera per l'acquisizione di immagini e registrazioni. Un microcontrollore azionato da computer viene utilizzato per regolare la velocità del tamburo rotante e le direzioni di rotazione. Utilizzando pesci mantenuti in condizioni standard, iniziare un'analisi anestetizzando un pesce nello 0,016% di tricaina per due o tre minuti e quindi posizionandolo su una piccola piattaforma con gli occhi e le branchie sospesi sul bordo.

Per mantenere immobilizzato il pesce evitando lesioni, posizionare una spugna sottile o un asciugamano sul corpo del pesce e fissare da due a tre pezzi di schiuma sul pesce, assicurandosi che il movimento della coda sia limitato. Posizionare il pesce all'interno di un serbatoio cilindrico pieno d'acqua che si inserisce all'interno del tamburo rotante del dispositivo di registrazione OKR. Utilizzare i magneti sulla piattaforma per posizionare il pesce in posizione verticale con gli occhi a circa 7,3 centimetri dal bordo del tamburo.

Una volta che il pesce rivive dall'anestesia e si osservano respirazione normale e movimenti casuali degli occhi, posizionare una griglia di base di 0,07 cicli per grado, o CPD, nel tamburo rotante e attivare i comandi del computer per iniziare la rotazione e l'acquisizione video. Dopo che un OKR iniziale è stato suscitato dalla griglia di base, sospendere brevemente la rotazione e sostituire la griglia con una griglia più piccola con una frequenza spaziale più elevata. Ripetere il processo con griglie sequenzialmente più piccole fino a quando un OKR non può più essere ottenuto. Per verificare la perdita di OKR, seguendo una scala di avvicinamento modificata, riprovare con la griglia più piccola che ha causato un OKR, e quindi con la griglia che non è riuscita a ottenere una risposta per verificare la perdita dell'OKR.

Per ottenere misurazioni dell'acuità monoculare, posizionare un occluder di plastica nera sopra le strisce adiacenti all'occhio opposto e ripetere il processo di raccolta dei dati. Passare quindi all'altro occhio riposizionando l'occluder e prendendo misure. Utilizzare la striscia di misura di riferimento sotto il serbatoio del pesce per prendere nota della distanza di ogni occhio dalla striscia per effettuare misurazioni accurate dell'acuità.