Dissecção da lente dos olhos: uma técnica para observar a morfologia das lentes de zebrafish

- Um olho de zebrafish compreende córnea, esclera, lente e retina. A córnea é um tecido transparente que permite que a luz entre no olho. A esclera é um tecido opaco que é contínuo com a córnea, formando uma camada protetora externa.

Para dissecar o olho, encha uma placa de Petri com silicone e deixe-a definida. Agora, coloque um peixe anestesiado no prato e extirpe os olhos usando uma micro-tesoura. Transfira os olhos para uma placa cheia de PBS para manter um pH constante no tecido e oriente o olho com o lado posterior voltado para cima. Segure o olho com fórceps e faça cuidadosamente três cortes radiais através da esclera e retina.

Em seguida, dobre o tecido para revelar a lente. Agora, posicione o olho com o lado anterior voltado para cima e remova a esclera e retina. Retire a lente do olho dissecado e remova qualquer tecido remanescente ao seu redor. No protocolo a seguir, realizaremos dissecções de lentes larval e zebrafish adultas para analisar a morfologia da lente.

depois confirmação de suficiente Sedação com tricaine, usar microdisseção tesoura Para imediatamente extirpar ambos olho De tampouco ano adulto ou Larval zebrafish, e lugar ambos olho em um 35 milímetros sob medida Petri prato com um silicone dissecção molde cheio com Pbs. Para colheita o lente De ano adulto zebrafish, lugar o olho posterior lado em cima e inserir fórceps em um menos que 45 grau ângulo através o óptico disco. usar dissecção tesoura Para fazer Dois ou Três Radial Incisões através o retina e esclera De o óptico disco Para o Ciliar zona em o Imobilizado olho e descascar Voltar o retina e esclera gostar flor Pétalas. inverter o olho córnea lado em cima e usar o plano lado de o tesoura Para imobilizar o lente indiretamente via manipulação de o esclera e córnea enquanto Usando fórceps Para puxar fora o retina e anexo Tecidos. então cuidadosamente aparar fora qualquer excesso tecido De o lente.

Para a colheita de lentes de zebrafish larval, joga um lado posterior do olho larval para cima na parte plana de um prato de silicone de PBS. E use uma agulha de tungstênio afiada para fazer cortes de rádio através da retina e esclera enquanto imobiliza o olho com outra agulha ou fórceps. Em seguida, colher suavemente a lente do olho dissociado com o lado contundente de uma agulha de fio de tungstênio feita sob medida e cuidadosamente puxar o tecido ligado.