Внутриперитонеальная инъекция: метод доставки раствора в брюшную полость взрослой зебры

- Быстрый взрослой рыбы в течение 24 часов до инъекции, чтобы очистить желудочно-кишечный тракт и создать дополнительное пространство в брюшной полости. В день процедуры, анестезировать рыбу с трикайном и поместить его в слот во влажной губкой с брюшной стороны лицом вверх.

Далее, пипетка нужное количество инъекционного раствора на кусок лабораторной пленки и вытащить его в инсулиновую иглу. Распоитите иглу между тазовыми плавниками под углом 45 градусов от передней-задней оси тела и аккуратно затолкайте ее в средней линии. Предварительный иглы примерно от 1 до 2 миллиметров в брюшную полость, пространство между брюшной стенки и внутренних органов, и медленно вводить решение интереса. Подождите в течение пяти секунд, прежде чем вытащить иглу, чтобы избежать разлива.

После инъекции быстро перенесите рыбу в восстановительный резервуар с пресной водой. Если рыба не начнет плавать сразу, закружить воду возле жабры, чтобы помочь ей оправиться от анестезии. В примере протокола, мы вводим раствор микобактерий маринума в RAG1 мутант рыбы для изучения инфекции.

- Во-первых, труба из 5 микролитров капли разбавленного бактериального раствора на кусок парафиновой пленки. Затем потяните каплю в 30 калибровочной инсулиновой иглы. Используйте для этого эксперимента рыбу пяти-восьмимесячной, при этом одна из них является рыбой дикого типа, а другая - рыбой-мутантом RAG.

Распорежьте эти рыбы брюшной стороной вверх в щелях куска влажного вспененной пластики. Ввимите инсулиновую иглу между тазовыми плавниками под углом 45 градусов. Держите иглу открывают вверх, чтобы убедиться, что все отверстие находится внутри брюшной полости. Затем медленно ввините бактериальный раствор. После этого осторожно удалите иглу и немедленно перенесите рыбу в восстановительный резервуар, наполненный пресной водой.

Возьмите образцы из бактериальной aliquot в использовании каждые 15 минут на 7H10 пластин. Инкубации этих образцов при 29 градусов по Цельсию в течение пяти дней, чтобы проверить дозу инфекции. Проверьте благополучие рыбы регулярно, убедившись, что усыплять любую рыбу с симптомами инфекции, инкубируя их в воде с более чем 0,02% 3-аминобензой кислоты этилэстер.