Overview
Это видео описывает технику внутриперитонеальной инъекции, метод доставки растворов в брюшную полость взрослой зебры.
Protocol
1. Экспериментальная инфекция M. marinum с внутриперитонеальной инъекцией
- Pipette 5 йл капли разбавленного бактериального раствора на кусок парафильма пленки и тянуть капли в 30 Г инсулина иглы.
- Для эксперимента используйте для эксперимента рыбу-мутанта 5-8-месячного дикого типа и рыбу-мутант. Анестезировать взрослых зебр в баке воды с 0,02% 3-аминобензойной кислоты этилэстер (рН 7,0). Распорежьте фибровую сторону вверх в щель на влажном вспененное пластмассу.
ПРИМЕЧАНИЕ: Rag-/- мутантные рыбы не способны пройти соматические рекомбинации и производить функциональные Т и В-клетки. - Ввись иглу между тазовыми плавниками под углом около 45 градусов. Держите иглу открытия вверх, чтобы заметить, что все отверстие находится внутри брюшной полости. Медленно ввилите бактериальную суспензию и аккуратно удалите иглу.
ПРИМЕЧАНИЕ: В случае, если красный трассировщик вытекает из рыбы при инъекциях, исключите рыбу из эксперимента. - Сразу после инъекции перенесите рыбу в восстановительный резервуар с пресной водой.
- Возьмите образцы бактериальной суспензии на пластинах 7H10 каждые 15 минут из бактериальной алицита в использовании и инкубировать бактерии при 29 градусов по Цельсию в течение 5 дней и проверить дозу инфекции, считая колонии на пластинах.
- Регулярно проверяйте благополучие рыбы и усыпляйте любую рыбу с симптомами инфекции с более чем 0,02% концентрацией 3-аминобензойной кислоты этилового эстера (рН 7.0).
ПРИМЕЧАНИЕ: Приблизительно, 7% взрослых зебры инфицированы 34 ± 15 CFU и 30% зебры инфицированных 2029 ± 709 CFU будут иметь симптомы на 8 недель. Симптомы могут включать ненормальное плавание, отсутствие реакции на прикосновения, задыхаясь, отек или наблюдаемые потери. - Поддерживайте зебру в соответствии с общими стандартами.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mycobacterium marinum | American Type Culture Collection | ATCC 927 | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Sigma-Aldrich | P4417-50TAB | |
| Middlebrock 7H10 agar | BD, Thermo Fisher Scientific | 11799042 | |
| 3-aminobenzoic acid ethyl ester (pH 7.0) | Sigma-Aldrich | A5040 | |
| Omnican 100 30 G insulin needle | Braun | 9151133 | |
| 1 mL syringe | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 |
