Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Til å begynne med, plasser en bedøvet mus på en kirurgisk seng og injiser buprenorfin, et smertestillende for å lindre smerte, subkutant i skulderen. Deretter setter du musenesen inn i en nesemaske for å gi en kontinuerlig tilførsel av oksygen og bedøvelse, for eksempel isofluran til dyret. Bruk litt lab tape, immobilisere lemmer og sterilisere brysthuden med klorhexidin og jod, to desinfeksjonsmidler og etanol.
Bruk nå saks til å lage et snitt midt i den fremre brystveggen og inverter huden med tang for å eksponere den hvite mammaryfettputen. Injiser forsiktig kreftcellefjæringen som uttrykker et bioluminesent protein i mammaryfettputen. Vent i 5 sekunder før du trekker ut kanylen for å unngå tilbakestrømning. Slipp forsiktig fettputen og bruk sterile suturer for å sy og lukke snittet.
De injiserte kreftcellene inne i mammaryfettputen deler seg raskt for å danne en svulst. Returner dyret til et bur etter prosedyren. Overvåk dyret nøye til det gjenoppretter fra anestesi og begynner å bevege seg fritt.
I følgende protokoll vil vi implantere pattedyr adenokarsinomceller som uttrykker luciferase i en voksen muss brystfettpute.
Begynn med å bekrefte mangel på respons på tåklemme i en bedøvet kvinnelig mus og tappe dyrets lemmer til et kirurgisk brett. Bruk sterile bomullspinne, steriliser det kirurgiske området med klorhexidin, jod og 75% etanol, og lag et fem millimeter hudinnsnitt midt i den fremre brystveggen. Løft deretter høyre side av huden ved siden av snittet og bruk steril mikrodesisseksjonssaks for å løsne huden fra brystveggen.
Inverter huden for å eksponere riktig nummer to mammary fettpute og bruk en en milliliter insulin sprøyte utstyrt med en 28,5 gauge nål for å forsiktig injisere 20 mikroliter kreftcelle suspensjon gjennom såret i fettputen. Hold nålen i fettputen i fem sekunder for å la den gelatinøse kreftcelleproteinblandingen størkne før du fjerner nålen, og lukk snittet med sterile 5-0 ikke-absorberbare suturer. Plasser deretter dyret i et rent bur med overvåking til full heftelse.
