/
/
Kwantitatieve FRET (Förster Resonance Energy Transfer) Analyse voor SENP1 Protease Kinetics Bepaling
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 02:20Plasmid Constructs
- 03:07Protein Expression and Purification
- 06:16FRET-based Protease Assay for Enzyme Kinetic Study
- 08:54Quantitative FRET Spectrum Analysis
- 13:36Representative Results
- 15:11Conclusion
Een nieuwe werkwijze die kwantitatieve analyse van FRET (Förster Resonance Energy Transfer) signalen is beschreven voor het bestuderen enzymkinetiek.<em> K<sub> M</sub</em> En<em> K<sub> Cat</sub</em> Verkregen voor de hydrolyse van het katalytische domein van SENP1 (SUMO / Sentrin specifieke protease 1) een pre-SUMO1 (Small Ubiquitin-like modifier). De algemene beginselen van dit kwantitatieve FRET-gebaseerde protease kinetisch onderzoek kan worden toegepast op andere proteasen.
Tags
Quantitative FRET AnalysisF&246;rster Resonance Energy TransferSENP1 Protease Kinetics DeterminationPosttranslational ModificationsUbiquitinUbiquitin-like ProteinsProtein Activity RegulationSUMO ModificationCellular ProcessesSUMO-specific ProteaseEndopeptidaseIsopeptidaseCatalytic EfficiencySpecificityKinetic ConstantsKcat/KM RatioMethods For Determining Kinetic ParametersPolyacrylamide Gel-based Western-blotRadioactive-labeled SubstrateFluorescent CompoundProtein Labeled Substrate
