/
/
כמותית סריג ניתוח (תהודת העברת אנרגית פורסטר) לקביעת SENP1 פרוטאז קינטיקס
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 02:20Plasmid Constructs
- 03:07Protein Expression and Purification
- 06:16FRET-based Protease Assay for Enzyme Kinetic Study
- 08:54Quantitative FRET Spectrum Analysis
- 13:36Representative Results
- 15:11Conclusion
שיטה חדשה כרוכה בניתוח כמותי של סריג (העברת אנרגית פורסטר תהודה) אותות מתוארת ללימוד קינטיקה אנזים.<em> K<sub> M</sub</em> ו<em> K<sub> חתול</sub</em> התקבלו להידרוליזה של התחום קטליטי של SENP1 (פרוטאז הספציפי SUMO / Sentrin 1) לטרום SUMO1 (משתנה קטן יוביקוויטין דמוי). העקרונות הכלליים של מחקר הכמותי קינטית-סריג מבוסס פרוטאז יכולים להיות מיושמים על פרוטאזות אחרות.
Tags
Quantitative FRET AnalysisF&246;rster Resonance Energy TransferSENP1 Protease Kinetics DeterminationPosttranslational ModificationsUbiquitinUbiquitin-like ProteinsProtein Activity RegulationSUMO ModificationCellular ProcessesSUMO-specific ProteaseEndopeptidaseIsopeptidaseCatalytic EfficiencySpecificityKinetic ConstantsKcat/KM RatioMethods For Determining Kinetic ParametersPolyacrylamide Gel-based Western-blotRadioactive-labeled SubstrateFluorescent CompoundProtein Labeled Substrate
