Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
General Laboratory Techniques

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 
Click here for the English version

מבוא למיקרופיפטור

Overview

המיקרופיפטור הוא מכשיר מעבדה נפוץ המשמש להעברת מיקרו-טרולים של פתרונות נוזליים. מיקרופיפטורים מגיעים במגוון גדלים לתנועה מדויקת של כרכים בין 0.5 ל-5000 מיקרול וכל מכשיר דורש אחד משלושה טיפים חד פעמיים בגודל שונה. מיקרופיפטורים פועלים על ידי עקירת אוויר מפיר הפיפטה, ומאפשרים לנוזל להיגרר לוואקום שנוצר. השימושים בהם כוללים העברת מתלים לתאים למגוון עבירות מבוססות תאים, טעינת דגימות לטכניקות אנליטיות שונות ושיבוש מכני של רקמות להשעיות של תאים בודדים. מיקרופיפטורים הם כלי מעבדה מועילים ביותר שקל להשתמש בהם עם קצת הדרכה ותרגול. בסרטון זה, JoVE מציגה למשתמש בפעם הראשונה את כל הטיפים, הטריקים, וההפצות והשימוש במיקרופיפטטור במעבדה.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

המיקרופיפטור הוא מכשיר חשוב המשמש למדידת כמויות קטנות של נוזלים. כלי מחקר זה, אשר ניתן למצוא במעבדות מחקר רבות ברחבי העולם, מגיע במספר צורות וגדלים. עם זאת, למרות השונות בין מיקרופיפטורים, כולם עובדים באופן דומה כדי למדוד במדויק כמויות מיקרוליטרים של נוזל. מיקרופיפטורים משמשים עם טיפים חד פעמיים, כי, כמו micropipettors, לבוא במגוון של גדלים.

כל המיקרו-אפיפטורים חולקים את אותם רכיבים בסיסיים לשאיפה ולחלוקת נוזלים. הבוכנה נמצאת בחלק העליון של הצינור ומשמשת לציור או גירוש נוזל בהתאם למיקום שאליו הוא מדוכא או משוחרר.

חיוג התאמת עוצמת הקול משמש לשינוי לאמצעי האחסון של נוזל שיש להעביר.

תצוגת קריאת אמצעי האחסון נקראת מלמעלה למטה. בהתאם למיקרופיפטטור שבו השתמשו המספרים משקפים סדרי גודל שונים במדידת הנפח שלך. כאן תוכלו לראות מדידה עבור 370 מיקרוליטרים.

טיפים חד פעמיים נטענים על קרקעית המיקרופיטור.

לחצן הוצאת הקצה ופיר הוצאת הקצה פועלים יחד כדי להוציא טיפים של pipette כאשר יש להשליך אותם.

משפחת המיקרופיטור כוללת מספר חברים בגדלים שונים המעבירים טווח מדויק של כרכים.

כאן אתה יכול לראות את המשפחה עומדת בתור בהתאם לטווחי עוצמת הקול שכל אחד מהם יכול להעביר. לדוגמה, פאפא P-1000 מספק בין 200-1000 μl, בעוד התינוק של החבורה, P-2, מעביר בין 0.2-2 μl.

כל אחד מבני המשפחה מזוהה על ידי מספר בחלק העליון של הבוכנה, ועל ידי צבע, אשר מבהיר מי הם וכמה נפח הם יכולים להעביר בנוחות.

מדי פעם, קרובי משפחה אחרים של מיקרופיפטור יופיעו לניסוי, כמו דוד P5000, דודה P100 ובן דוד P10. יחד, משפחה מורחבת זו יכולה לסייע בהעברת נוזל מ 0.2-5000 μl בנפח.

כדי להבטיח עוד יותר העברה מדויקת ומדויקת של נוזלים, גדלים שונים של טיפים pipettes, לעתים קרובות, אבל לא תמיד, מקודדים בצבע כדי להקל על זיהוי ומשמשים בגדלים שונים של pipettors. ביחס לנפח שהועבר, טיפים מיקרופיפטור לבן בדרך כלל להעביר בין 0.5-2.5 μl, טיפים צהובים הם עבור 1-200 μl, וטיפים כחולים מ 200 עד 1000 μl.

בעת שימוש במיקרופיפטטור, בחר תחילה את המכשיר עם הטווח המתאים עבור עוצמת הקול שברצונך להעביר. בחירה נכונה של pipettor יכול להיות ההבדל בין ניסוי מוצלח או נכשל.

כדי להתחיל, התאם את החוגה לאמצעי האחסון הרצוי. כדי להגביר את עוצמת השאיפה, סובב את החוגה בכיוון נגד כיוון השעון, העברת אמצעי האחסון הרצוי בפנייה של שליש ולאחר מכן ירידה איטית לסימן הסופי. כדי להנמיך את עוצמת הקול, סובב את החוגה בכיוון השעון.

זכור כי ספרות אלה בהקראת אמצעי האחסון יש סדרי גודל שונים בהתאם micropipettor. לדוגמה, בצד שמאל, אנו רואים את P1000, קריאת 370 μl. יש אפס במקום האלפים, 3 במאות המקום, ו-7 במקום ה-10. מימין נמצא ה-P200, שמציג 159 μl עם 1 במאות הדירות, 5 בעשרות הדירות ו-9 במקום אחד.

לאחר הגדרת אמצעי האחסון, בחר עצה.

עכשיו, להחזיק את micropipettor בתנוחה זקופה עם החלק הצר של הגוף בכף היד שלך ואת overhang מעל האצבע המורה שלך,

באמצעות לחץ קל כדי לדכא את הבוכנה בערך באמצע הדרך לתחנה הראשונה, או כאשר אתה מתחיל להרגיש התנגדות רבה יותר.

פעולה זו מסלקת את האוויר מקצה הפיפטה.

שמירה על הבוכנה מדוכאת, לטבול את הקצה בין 1-3 מ"מ לתוך המדגם. שחררו בצורה חלקה את הבוכנה בחזרה לתנוחת המנוחה, המתינו שנייה אחת עד שהנוזל יעבור לקצה, ולאחר מכן הסירו את הפיפטה מהדגימה.

כאשר הבוכנה משתחררת בחזרה לתנוחת המנוחה, הנוזל נמשך לוואקום שנוצר על ידי האוויר שנעקר.

בדוק את הקצה כדי לאשר את הכמות הרצויה של נוזל נמשך וכי הקצה אינו מכיל בועות אוויר.

בעת העברת הדגימה לתוך כלי הרצוי, להחזיק את micropipettor בזווית של 10-45 ° נגד הקיר הפנימי של כלי הקבלה. פעולה זו תמנע נוצרות בועות בקצה. כדי לגרש את הנוזל לדכא את הבוכנה בקלילות אל התחנה 1 בצורה חלקה, כדי להתחיל לחלק את הנוזל, ולאחר מכן, החלת התנגדות חזקה יותר, לדכא את הבוכנה כל הדרך אל התחנה השנייה "לפוצץ" את פיסת הנוזל האחרונה מהקצה.

הסר את הקצה לחלוטין מן הכלי, ולאחר מכן לשחרר את הבוכנה בחזרה למצב המנוחה.

כעת השתמש בלחצן ההוצאה כדי להשליך בזהירות את קצה הפיפטה לכלי הקיבול המתאים. שים לב למה שאתה עושה, כי טיפים שנפלטו יכולים לשמש כקלילים ועלולים לפגוע בחבריך למעבדה.

כדי לשמור על מיקרופיפטורים פועלים היטב ולשמור על מנגנון התאמת עוצמת הקול הפנימי, לעולם אל תסובב את חיוג עוצמת הקול מעל או מתחת לטווח הספציפי של המיקרופיפטטור. אתה יכול לשבור את הכלי.

כדי למנוע זיהום צולב בין דגימות, שנה את הקצה לאחר כל העברת נפח.

עקביות המפעיל חשובה בעת עבודה עם מיקרופיפטרים. לחץ בוכנה חלק יניב תוצאות ניסוי אופטימליות. לבסוף, זכור, כדי לשמור על micropipettors שלך במצב ביצועים טובים, תמיד לאחסן את המכשירים במצב זקוף כאשר הם לא נמצאים בשימוש.

כעת, לאחר שכיסינו את הפעולה הבסיסית ואת העקרונות של שימוש במיקרופיפטורים, בואו נדון בכמה יישומי מעבדה נפוצים להעברת מיקרו-וולטום, כמו גם וריאציות של מכשיר זה.

מיקרופיפטורים משמשים לעתים קרובות להעברת השעיות תאים ללוחות תרבות למגוון ניסויים.

בשילוב עם טיפים מיוחדים, מיקרופיפטורים יכולים לשמש כדי לטעון בקפידה דגימות לטכניקות אנליטיות, כמו אלקטרופורזה ג'ל DNA.

מיקרופיפטורים יכולים לשמש גם כדי לפרק רקמות מכניות, על מנת להשיג השעיות תא יחיד.

במעבדה ניתן למצוא גם גרסאות של המיקרופיטור, הפועלות על בסיס תזוזת אוויר.

צינורות מהדר מאפשרים צנרת טורית של אמצעי אחסון קטנים יותר לאחר שאיפה ראשונית של נפח גדול יותר של פתרון. הפיפטות שימושיות מאוד להעברת אותו נפח דגימה למספר רב של כלי קיבול.

צינורות רב-ערוציים משמשים בדרך כלל להעברת אמצעי אחסון בטווח של 20-200 מיקרול , והם מועילים לטעינת שורות שלמות של 96 לוחות באר.

הרגע צפית בהקדמה של ג'וב למיקרופיפטורים.

בסרטון זה סקרנו: מהו מיקרופיפטטור וכיצד הוא עובד, כיצד לשאוף ולחלק דגימת נפח נוזלי, כמה אמצעי זהירות ויישומים שונים של המיקרופיטורים שלך. תודה שצפיתם ותזכרו לבחור את הפיפטה הנכונה לניסויים שלכם.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter