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Uma Introdução ao Micropipettor

Overview

O micropipettor é um instrumento de laboratório comum utilizado para a transferência de microvoluis de soluções líquidas. Os micropipettores vêm em uma variedade de tamanhos para o movimento preciso de volumes entre 0,5 e 5000 μl e cada instrumento requer uma das três pontas descartáveis de tamanho diferente. Os micropipettores trabalham deslocando o ar do eixo da pipeta, permitindo que o líquido seja atraído para o vácuo resultante. Seus usos incluem a transferência de suspensões celulares para uma variedade de ensaios baseados em células, o carregamento de amostras para diferentes técnicas analíticas e a interrupção mecanicamente de tecidos em suspensões de células únicas. Micropipettores são ferramentas de laboratório extremamente úteis que são fáceis de usar com um pouco de instrução e prática. Neste vídeo, o JoVE mostra ao usuário de primeira viagem todas as dicas, truques e ins e outs de usar um micropipettor no laboratório.

Procedure

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O micropipetador é um importante instrumento usado para medir com precisão pequenos volumes de líquido. Esta ferramenta de pesquisa, que pode ser encontrada em inúmeros laboratórios de pesquisa em todo o mundo, vem em várias formas e tamanhos. No entanto, apesar da variação entre os micropipettores, todos eles trabalham de forma semelhante para medir com precisão as quantidades de microliteres de líquido. Micropipettores são usados com pontas descartáveis, que, como micropipettores, vêm em uma variedade de tamanhos.

Todos os micropipettores compartilham os mesmos componentes básicos para aspirar e distribuir líquidos. O êmbolo é encontrado na parte superior do pipettor e é usado para elaborar ou expelir líquido, dependendo da posição para a qual está deprimido ou liberado.

O mostrador de ajuste de volume é usado para alterar o volume de líquido a ser transferido.

O visor de leitura de volume é lido de cima para baixo. Dependendo do micropipetador usado, os números refletem diferentes ordens de magnitude na medição do volume. Aqui você pode ver uma medição para 370 microliters.

As pontas descartáveis são carregadas na parte inferior do micropipettor.

O botão de ejetar a ponta e o eixo de ejetar ponta trabalham juntos para ejetar pontas de pipeta quando precisam ser descartadas.

A família de micropipettores inclui vários membros de tamanhos variados que transferem uma gama precisa de volumes.

Aqui você pode ver a família fazendo fila de acordo com as faixas de volume que cada um pode transferir. Por exemplo, papa P-1000 entrega entre 200-1000 μl, enquanto o bebê do grupo, o P-2, transfere entre 0,2-2 μl.

Cada um dos membros da família é reconhecível por um número na parte superior do êmbolo, e por cor, o que deixa claro quem eles são e quanto volume eles podem transferir confortavelmente.

Ocasionalmente, outros parentes de micropipettores aparecerão para um experimento, como tio P5000, tia P100 e primo P10. Juntos, esta família estendida pode auxiliar na movimentação de líquido de 0,2-5000 μl em volume.

Para garantir ainda uma transferência precisa e precisa de líquido, diferentes tamanhos de pontas de pipetas, muitas vezes, mas nem sempre, são codificadas por cores para facilitar o reconhecimento e são usadas para diferentes tamanhos de pipettors. Com relação ao volume transferido, as pontas do micropipettor branco normalmente transferem entre 0,5-2,5 μl, as pontas amarelas são para 1-200 μl, e as pontas azuis de 200 a 1000 μl.

Ao usar um micropipetador, primeiro escolha o instrumento com a faixa apropriada para o volume que deseja transferir. A escolha correta do pipettor pode significar a diferença entre um experimento bem sucedido ou fracassado.

Para começar, ajuste o mostrador ao volume desejado. Para aumentar o volume de aspiração, gire o mostrador no sentido anti-horário, passando o volume desejado por uma curva de um terço e, em seguida, lentamente diminuindo para a marca final. Para diminuir o volume, gire o mostrador no sentido horário.

Tenha em mente que esses dígitos na leitura de volume têm diferentes ordens de magnitude dependendo do micropipetador. Por exemplo, à esquerda, vemos o P1000, lendo 370 μl. Há um zero no lugar de milhares, um 3 nas centenas de lugares, e um 7 no lugar das dezenas. À direita está o P200, exibindo 159 μl com um 1 nas centenas de lugares, um 5 no lugar das dezenas, e um 9 no local.

Uma vez definido o volume, selecione uma dica.

Agora, segure o micropipettor em uma posição vertical com a parte estreita do corpo na palma da mão e a saliência sobre o dedo indicador,

Usando pressão leve para deprimir o êmbolo aproximadamente a meio caminho da primeira parada, ou quando você começa a sentir mais resistência.

Esta ação desloca o ar da ponta da pipeta.

Mantendo o êmbolo deprimido, mergulhe a ponta entre 1-3 mm na amostra. Solte suavemente o êmbolo de volta para a posição de descanso, espere um segundo para que o líquido se mova para a ponta e, em seguida, remova a pipeta da amostra.

Quando o êmbolo é liberado de volta para a posição de descanso, o líquido é atraído para o vácuo criado pelo ar deslocado.

Inspecione a ponta para confirmar a quantidade desejada de líquido e que a ponta não contém bolhas de ar.

Ao transferir a amostra para o vaso desejado, segure o micropipetador em um ângulo de 10-45° contra a parede interna do recipiente receptor. Isso evitará que bolhas se formem na ponta. Para expulsar o líquido depresse levemente o êmbolo para a primeira parada sem problemas, para começar a distribuir o líquido e, em seguida, aplicando resistência mais forte, pressione o êmbolo até a segunda parada para "soprar" o último pedaço de líquido da ponta.

Retire a ponta completamente do vaso e, em seguida, solte o êmbolo de volta para a posição de descanso.

Agora use o botão ejetar para descartar cuidadosamente a ponta da pipeta no recipiente apropriado. Preste atenção no que você está fazendo, porque as pontas ejetadas podem agir como projéteis e podem potencialmente ferir seus colegas de laboratório.

Para manter os micropipettores funcionando bem e preservar o mecanismo de ajuste de volume interno, nunca gire o mostrador de volume acima ou abaixo da faixa específica do micropipettor. Você pode quebrar o instrumento.

Para evitar contaminação cruzada entre as amostras, altere a ponta após cada transferência de volume.

A consistência do operador é importante quando se trabalha com micropipetters. Uma pressão suave do êmbolo produzirá ótimos resultados experimentais. Por fim, lembre-se, para manter seus micropipettores em condições de alto desempenho, sempre armazene os instrumentos em uma posição vertical quando não estiverem em uso.

Agora que cobrimos a operação básica e os princípios do uso de micropipettores, vamos discutir algumas aplicações laboratoriais comuns para transferências de microvolume, bem como variações deste instrumento.

Micropipettores são frequentemente usados para transferir suspensões celulares para placas de cultura para uma variedade de experimentos.

Em conjunto com dicas especializadas, micropipetadores podem ser usados para carregar cuidadosamente amostras para técnicas analíticas, como eletroforese de gel de DNA.

Micropipettores também podem ser usados para quebrar tecido mecanicamente, a fim de obter suspensões de células únicas.

Variantes do micropipettor, que operam com base no deslocamento do ar, também podem ser encontradas no laboratório.

As pipetas repetidos permitem a pipetação serial de volumes menores após uma aspiração inicial de um volume maior de solução. As pipetas são realmente úteis para transferir o mesmo volume de amostra para um grande número de recipientes.

As pipetas multicanais são geralmente usadas para transferir volumes na faixa de volume de 20-200 μl , e são úteis para carregar linhas inteiras de 96 placas de poço.

Você acabou de assistir a introdução do JoVE aos micropipettores.

Neste vídeo revisamos: o que é um micropipettor e como ele funciona, como aspirar e dispensar uma amostra de volume líquido, algumas precauções de segurança e diferentes aplicações de seus micropipettores. Obrigado por assistir e lembre-se escolher a pipeta certa para suas experiências.

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