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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
PCR: The Polymerase Chain Reaction
  • 00:00Overview
  • 00:35The Reaction
  • 04:46Reaction Components
  • 07:10Setting up the Reaction
  • 09:54Helpful Hints
  • 11:23Applications
  • 12:56Summary

PCR: 聚合酶链式反应

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Overview

聚合酶链式反应,或称PCR,是一种通过热循环反应来扩增DNA的技术,热循环是指在固定的时间间隔内温度变化的循环。采用热稳定的DNA聚合酶,PCR可以用DNA的合成原料,脱氧核苷三磷酸合成大量的DNA拷贝。PCR反应包括三步,变性,退火,和延伸。变性是PCR循环的第一步,它将DNA碱基之间的氢键打开来熔解DNA双链而产生单链DNA。退火则是将温度降到足够低,使寡聚核苷酸引物能够结合到DNA模板上。在延伸过程中,DNA聚合酶将合成新的双链DNA。

本短片将介绍PCR的过程。除了逐步讲述如何准备一个常用的PCR反应,还将描述PCR的基本原理。视频展示了一个PCR反应的所需组分,以及引物设计的规则,并给出了保证PCR反应成功的一些有用技巧。

Procedure

聚合酶链式反应或称PCR, 是一种被广泛用来扩增DNA片段的方法。PCR要用到热循环,就是在三个被称为变性、退火和延伸的特定温度之间反复地加热和制冷。 一旦将PCR试剂混合物置于热循环仪中,热循环反应就开始了。热循环仪是一种被设定来精确地加热和制冷反应的仪器。 PCR循环从变性开始,在95度持续20到30秒,它远高于DNA的熔解温度。溶解温度是当半数DNA处于双?…

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. PCR: The Polymerase Chain Reaction. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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