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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
PCR: The Polymerase Chain Reaction
  • 00:00Overview
  • 00:35The Reaction
  • 04:46Reaction Components
  • 07:10Setting up the Reaction
  • 09:54Helpful Hints
  • 11:23Applications
  • 12:56Summary

PCR: Die Polymerase-Kettenreaktion

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Overview

Die Polymerase-Kettenreaktion, oder PCR, ist eine Methode, bei der DNA durch das sogenannte Thermocycling – also das wiederholte verändern der Temperatur für einen bestimmten Zeitraum – amplifiziert werden kann. Durch die Benutzung einer thermostabilen DNA-Polymerase kann das PCR viele Kopien der DNA, von den DNA Bausteinen, die Deoxy-Nukleotidtriphosphaten, oder dNTPS, genannt werden, herstellen. Es gibt 3 Schritte in einem PCR: die Denaturierung, Hybridisierung, und Elongierung. Die Denaturierung ist der erste Schritt in dem Zyklus und bewirkt, dass die DNA durch die Unterbrechung der Wasserstoffbrückenbindungen schmilzt und dadurch Einzelstrang-DNA entsteht. Bei der Hybridisierung wird die Temperatur verringert, sodass sich die Oligonukleotidprimer an die Template-DNA binden können. Bei dem Elongierungsschritt synthetisisert die DNA Polymerase die neue, doppelsträngige DNA.

Dieses Video gibt eine Einführung in das PCR Verfahren. Wir beschreiben die grundlegenden Prinzipien des PCRs und geben eine Schritt für Schritt Anleitung, um eine allgemeine PCR Reaktion anzusetzen. Das Video beschreibt außerdem die benötigten Komponenten, zeigt wie Primer entworfen werden, und gibt nützliche Hinweise, um eine erfolgreich PCR Reaktion anzusetzen.

Procedure

Die Polymerase-Kettenreaktion, oder PCR ist eine häufig angewandte Methode, um DNA Fragmente zu vervielfältigen. Das PCR beruht auf der Thermocycling-Methode, bei der die Reaktionen wiederholt auf drei verschiedene Temperaturen, die Denaturierung, Hybridisierung und Elongierung genannt werden, erhitzt und abgekühlt werden.Die PCR Reaktion beginnt, wenn alle PCR Reagenzien in die Thermocycler Maschine platziert werden, die programmiert ist, um die Reaktion präzise zu erhitzen und abzuküh…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. PCR: The Polymerase Chain Reaction. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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