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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
PCR: The Polymerase Chain Reaction
  • 00:00Overview
  • 00:35The Reaction
  • 04:46Reaction Components
  • 07:10Setting up the Reaction
  • 09:54Helpful Hints
  • 11:23Applications
  • 12:56Summary

PCR: La reazione a catena della polimerasi

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Overview

La reazione a catena della polimerasi, o PCR, è una tecnica utilizzata per amplificare il DNA attraverso il termociclizzazione – cicli di variazioni di temperatura a intervalli di tempo fissi. Utilizzando una DNA polimerasi termostabile, la PCR può creare numerose copie di DNA da blocchi di costruzione del DNA chiamati dNTP. Ci sono tre passaggi nella PCR: denaturazione, ricottura e allungamento. La denaturazione è il primo passo del ciclo e fa sì che il DNA si sciolga interrompendo i legami idrogeno tra le basi con conseguente DNA a singolo filamento. La ricottura abbassa la temperatura abbastanza da consentire il legame dei primer oligonucleotidici al modello di DNA. Durante la fase di allungamento la DNA polimerasi sintetizza nuovo DNA a doppio filamento.

Questo video fornisce un’introduzione alla procedura PCR. Vengono descritti i principi di base della PCR e una procedura passo-passo per l’impostazione di una reazione PCR generalizzata. Il video mostra i componenti necessari per una reazione PCR, include istruzioni per la progettazione del primer e fornisce suggerimenti utili per garantire reazioni PCR di successo.

Procedure

La reazione a catena della polimerasi o PCR è un metodo ampiamente utilizzato per amplificare i frammenti di DNA. La PCR utilizza il termociclo, che è il riscaldamento e il raffreddamento ripetuti della reazione attraverso tre temperature distinte chiamate denaturazione, ricottura ed estensione o allungamento. La reazione di termociclica inizia una volta che i reagenti PCR vengono messi in un termociclatore una macchina, che è programmata per riscaldare e raffreddare con precisione la …

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No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. PCR: The Polymerase Chain Reaction. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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