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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Gel Purification
  • 00:00Overview
  • 00:39Gel Purification: Basic Principles
  • 01:51The Gel Purification Procedure
  • 04:51Application
  • 06:04Summary

Purificazione del gel

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Overview

La purificazione del gel viene utilizzata per recuperare frammenti di DNA dopo la separazione elettroforetica. Il recupero del DNA da un gel di acarosio comprende tre passaggi fondamentali: legatura, lavaggio ed eluizione da una colonna di silice. Si ritiene che il DNA si leghi alla silice in presenza di sale alto attraverso un ponte di sale. Dopo il legame, il DNA viene lavato dalle impurità ed eluito in condizioni di basso contenuto di sale interrompendo questa interazione.

Questo video passa attraverso una procedura generalizzata passo-passo per tagliare una fascia dal gel, solubilizzazione del gel, purificazione attraverso il legame a una colonna di silice ed eluizione di DNA purificato. Inoltre, la presentazione discute diversi suggerimenti per garantire una purificazione del gel di successo, tra cui l’importanza di eseguire un gel di acarosio con un marcatore o una scala che ha DNA di dimensioni note.

Procedure

La purificazione del gel è una procedura standard eseguita per recuperare i frammenti di DNA desiderati dai gel di acarosio dopo la separazione elettroforetica. Dopo aver sciolto il frammento di gel e averlo fatto passare attraverso un filtro specializzato, questa procedura produce DNA liberato da impurità come sali, nucleotidi liberi ed enzimi, adatto per applicazioni a valle. Il principio di base alla base del recupero del DNA dal gel di acarosio comporta una sequenza di passaggi di …

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Gel Purification. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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