Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Biology II: Mouse, Zebrafish, and Chick

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 
Click here for the English version

גידול דגי זברה וטיפול בעובר

Overview

דגי זברה(דניו ריו)הם אורגניזם מודל חשוב בעל ערך מיוחד למחקר בביולוגיה התפתחותית. דגי זברה הם פוריים ביותר ויכולים לייצר מאות צאצאים בשבוע, ולכן קל יחסית לאסוף מספר גדול של עוברים למספרי מדגם גבוהים. יתר על כן, דגי זברה עוברים התפתחות מהירה והעוברים שקופים, ומאפשרים הדמיה קלה של תהליכים התפתחותיים.

סרטון זה מכסה את השלבים הנדרשים לאיסוף עוברים של דגי זברה שהופרו לאחרונה. סקירה קצרה של התנהגות ההזדווגות של דגי הזברה מוצגת, ואחריה הוראות להקמת צלבים במיכלי הרבייה המיוחדים במעבדה המאפשרים הזדווגות מבוקרת. כמו כן מכוסים התנאים הנדרשים כדי ליזום שחרור ביצים (המכונה השרצה) בבוקר לאחר הטנקים מוגדרים. לאחר מכן, טכניקות חיוניות לעבודה עם עוברים מוצגים, כולל עיכוב של התפתחות פיגמנט עם PTU כימי, ו dechorionation: הליך שבו קרום דמוי קליפה סביב העובר (chorion) מוסר. לבסוף, הסרטון מסתיים עם כמה יישומים מעשיים של טכניקות אלה במחקר התפתחותי.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

דגי זברה הם מערכת מודל קטנה אך רבת עוצמה. דגים פוריים אלה יכולים להניב מאות צאצאים בשבוע ואלפים רבים במהלך חייהם. פיתוח חיצוני מהיר וגופים שקופים הופכים את העוברים לאידיאליים עבור יישומים מגוונים. סרטון זה יכסה את יסודות איסוף וטיפול העוברים לפני שיתאר את שיטות המחקר הנוכחיות המנצלות את העוברים של דגי הזברה.

על מנת ליצור עוברים, זה עוזר לדעת קצת על התנהגות ההזדווגות של דגי זברה.

דגי זברה עוברים רבייה מינית, ולכן הרבייה דורשת דגים זכריים ונקביים כאחד. לזכרים יש גוף רזה יותר עם גוון אדום מעט, בעוד שלנקבות יש בטן גדולה יותר, כסופה מלאה בביצים.

הזדווגות תקופתית שומרת על ביצים בריאות, אבל ביצוע כל הביצים האלה דורש הרבה עבודה, כך נקבות בודדות צריך להיות מזווג רק פעם בשבוע.

לבסוף, כמו בעלי חיים רבים אחרים, תהליכים חושיים מנחים התנהגות הזדווגות בדגים.

רמזי חוש הריח מהגבר עוזרים להכין את חברתו להשריץ, בעוד שקצת תאורת מצב רוח גורמת לשניהם לפעולה.

לאחר שלמדתי לזהות דגים זכרים ונקבות, הגיע הזמן להקים צלב.

עבור גידול דגי זברה, החוקרים משתמשים במיכלים שתוכננו במיוחד להזדווגות. מיכלי הרבייה כוללים בדרך כלל תוספת נשלפת עם חורים המאפשרים לביצים ליפול. תכונה זו מגנה על הביצים מפני אכילה על ידי דגים מבוגרים רעבים.

כדי להתחיל, לשלב דגים בוגרים במיכלי הרבייה בשעות אחר הצהריים או הערב. כדי לאסוף עוברים בשלב מוקדם למחרת בבוקר, להפריד בין דגים זכרים ונקביים לבין מחיצה, שמונעת מהם להתרבות לפני שאתם מוכנים להתחיל בניסוי. כדי למנוע מהדג לקפוץ החוצה, הקפד לכסות את מיכל הרבייה במכסה. לאחר מכן, להשאיר את הדג להתאקלם זה לזה בן לילה.

לאחר שבילו את הלילה יחד במיכל רבייה, הדגים יתזדווגו למחרת בבוקר.

הצעד הראשון בבוקר הוא להסיר את המחולק בין הזכר לנקבה דגים ליזום השרצה. אם לא נעשה שימוש בחלוקה, הדגים יטילו ביצים זמן קצר לאחר תחילת האור.

כשהזכרים רודפים אחרי הנקבות סביב המיכל, הם מעוררים השרצה של ביצים תוך שחרור זרע למים לצורך הפריה. המתן כ 15 - 30 דקות לאחר משיכת מחיצה כדי לתת את זמן הדג להזדווג. לאחר מכן, להסיר את המבוגרים מן הטנק באמצעות רשת או על ידי הרמת הטנק להכניס והניחה את הדג לתוך טנק אחר.

לאחר מכן, יוצקים את המים ואת העוברים דרך מסננת תה רשת לאיסוף. לאחר מכן, באמצעות "מי ביצים", לשטוף את העוברים את המסננת לתוך צלחת פטרי. ייתכן שיהיה צורך להעביר עוברים בין מנות כדי להשיג צפיפות אופטימלית של 50 - 100 לכל מנה. כדי להבטיח את הפיתוח בקצב נורמלי, למקם את הכלים באינקובטור ב 28 °C (5 °F).

ברגע שיש לך את העוברים שלך, לטפל בהם בזהירות. הם חשובים לניסויים שלך! בואו נעבור על כמה עצות.

כדי לשמור על בריאות העוברים, הקפידו לשמור על המים בצלחות הפטרי נקיות וללא פסולת. עוברים מתים יהיו אטומים ויש להסירם מדי יום. בנוסף, מתילן כחול ניתן להוסיף למים כדי למנוע צמיחה פטרייתית.

בכל פעם שאתה צריך להעביר עוברים מצלחת אחת לאחרת, להשתמש pipet העברה. על ידי מערבולת המנה, אתה יכול לרכז את העוברים במרכז הצלחת, מה שהופך את pipetting קל יותר.

פרוטוקולים מסוימים דורשים מספר שלבים נוספים לתחזוקת העובר. בשלושת הימים הראשונים של החיים, עוברים דגי זברה מתפתחים בתוך כמון, אשר יכול לעכב מניפולציה של העובר. הכוריון יכול להיות מוסר על ידי טיפול עם האנזים proteolytic, פרונאז, או באמצעות מלקחיים כדי להסיר אותו באופן ידני. בנוסף, דגי זברה מתחילים לפתח פיגמנט על ידי 24 שעות, כפי שמוצג כאן בזחל דג זברה זה, אשר יכול להפריע מיקרוסקופיה. כדי לראות דרך בעיה זו, מדענים להשלים את מי העובר עם PTU, אשר מעכב את הייצור של מלנין פיגמנט.

כעת, כאשר אתם יודעים כיצד להשיג ולטפל בעוברי דגי זברה, בואו נחקור כמה מהדרכים שבהן חוקרים משתמשים בהם לגילוי מדעי.

ההתפתחות החיצונית של עוברים דגי זברה מאפשרת מניפולציה גנטית על ידי מיקרו-המצאה של DNA, RNA או ריאגנטים של נוק-אאוט גנטי. שיטה זו מובילה להפצה אחידה של חומר מוזרק ברחבי העובר ויכולה לייצר פנוטיפים גלויים הנובעים מביטוי יתר או אובדן חלבון. אותה טכניקה יכולה לשמש גם לייצור דגים מהונדסים שבהם מבנים ספציפיים מסומנים על ידי ביטוי של חלבונים פלואורסצנטיים.

בנוסף, הגודל הקטן של עוברים דגי זברה וזחלים להפוך אותם אידיאליים עבור הקרנה כימית פנוטיפית. כאן, עוברים נטענים לתוך לוחות 96 באר ולאחר מכן מטופלים עם ספריות של מולקולות קטנות על ידי הוספת הכימיקלים לתוך המים. מאוחר יותר, לוחות דגים אלה נבדקים לפגמים מורפולוגיים, כגון ההתפתחות החריגה המוצגת כאן.

לבסוף, השקיפות של עוברים דגי הזברה הופכת אותם למתאימים היטב למיקרוסקופיה. עוברים חיים המביעים חלבונים פלואורסצנטיים בסוגי תאים ספציפיים ניתן להרכיב ולדמיין באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית, המאפשרת לחוקרים לבחון תנועות תאים בפיתוח רקמות לאורך זמן.

הרגע צפית בסרטון של ג'וב על גידול דגי זברה וטיפול בעוברים. בסרטון זה, דנו ביסודות ההזדווגות, בהקמת מיכלי הרבייה ובטיפול בעוברים. דנו גם בכמה שיטות מחקר שמנצלות את העובר הקטן והחזק הזה. תודה שצפיתם!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter