Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

מבוא לביולוגיה התפתחותית מולקולרית
 
Click here for the English version

מבוא לביולוגיה התפתחותית מולקולרית

Overview

אותות מולקולריים ממלאים תפקיד מרכזי בתהליכים המורכבים המתרחשים במהלך התפתחות עוברית. אותות אלה מווסתים פעילויות כגון בידול תאים והעברה, התורמים להיווצרות של סוגי תאים ומבנים ספציפיים. השימוש בגישות מולקולריות מאפשר לחוקרים לחקור בפירוט מנגנונים פיזיים וכימיים אלה.

וידאו זה יעבור היסטוריה קצרה של חקר האירועים המולקולריים במהלך הפיתוח. לאחר מכן, שאלות מרכזיות שנשאלו על ידי ביולוגים התפתחותיים מולקולריים היום ייבחנו, ולאחר מכן דיון במספר שיטות בולטות המשמשות לתשובה על שאלות אלה, כגון כתמים, תרבות explant, והדמיה של תאים חיים. לבסוף, נבחן כמה יישומים נוכחיים של טכניקות אלה לחקר הביולוגיה ההתפתחותית.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

מחקרים בתחום הביולוגיה ההתפתחותית המולקולרית מספקים תובנה על השינויים המתרחשים ברמה התאית במהלך בידול והתפתחות. החוקרים בוחנים את המנגנונים הפיזיים והכימיים המווסתים את תפקודי התאים. זה עוזר להבין איך תאים להוליד רקמות מיוחדות בתוך העובר ההתבגרות, וכיצד פגמים ברמה המולקולרית יכול להוביל מצבי מחלה.

וידאו זה מציג היסטוריה קצרה של ביולוגיה התפתחותית מולקולרית, מציג שאלות מפתח שנשאלו על ידי מדענים בתחום זה, מתאר כמה כלים זמינים לענות על שאלות אלה, ודן בכמה יישומי מעבדה נוכחיים.

בואו נתחיל על ידי סקירת כמה מחקרים ציון דרך בהיסטוריה של מחקר ביולוגיה התפתחותית מולקולרית.

בשנת 1957, קונרד וודינגטון פרסם ספר בשם "האסטרטגיה של הגנים" שבו הוא ניסה להסביר כיצד גורל התא נקבע. בהתבסס על מחקרים שנערכו בעבר להשתלת רקמות, הוא הציג מודל רעיוני המתאר כי תא הוא כמו שיש המתגלגל במורד גבעה, ואת הנתיב שנדרש כדי להגיע לתחתית יקבע את מצבו המובחן הסופי. רעיון זה כי סוגי תאים נפרדים נובעים תאים לא מובחנים המקבלים אותות שונים במהלך ההתפתחות נודע בשם "הנוף האפיגנטי".

בערך באותו זמן, ריטה לוי-מונטלצ'יני וסטנלי כהן הבחינו כי השתלת גידולים בעוברי אפרוח הובילה לצמיחת נוירונים מהירה. הם שיערו כי חומר המופרש על ידי הגידולים גרם לצמיחה זו, וזיהו את החלבון כגורם גדילה עצבי, או NGF. זמן קצר לאחר מכן, כהן גילה גורם גדילה נוסף שהופרש על ידי בלוטת הרוק של העכבר וקידם את הצמיחה של תאי אפיתל. הוא זיהה את החלבון הזה כגורם גדילה אפידרמלי, או EGF.

מאוחר יותר, בשנת 1969, לואיס וולפרט הציע תיאוריה על איך סוג מסוים של מולקולות איתות, המכונה מורפוגנים, לפעול ישירות על תאים כדי לגרום לתגובות ספציפיות בריכוזים שונים. הוא השתמש בצבעים של הדגל הצרפתי כדי לדגמן מצבי תאים, אדום המשמש כמצב ברירת המחדל כאשר אין אות. משם, ריכוזי מורפוגן נמוכים, המוצגים בלבן, עשויים להפעיל גן אחד, בעוד שריכוזים גבוהים של מורפוגן, המוצגים בכחול, עשויים להפעיל גן אחר.

בהרחבה על עבודה זו, בשנת 1988 כריסטיאן נוסלין-וולהארד זיהתה את המורפוגן הידוע הראשון על ידי ביצוע מסכים גנטיים על זבובים. היא השתמשה בנוגדנים כדי להראות שחלבון, המכונה ביקואיד, יוצר שיפוע ריכוז לאורך הציר הקדמי-אחורי של העובר המתפתח, ושולט בביטוי הגנים החשובים לארגון אזורי הראש ובית החזה.

בתחילת שנות התשעים, פיטר לורנס וג'ינס מוראטה השתמשו בעבודתם בזבובים כדי להרחיב את התיאוריה של שיפועי מורפוגן. הם שיערו כי קבוצה אחת של תאים אחראית לארגון תא אחד מסוים של האורגניזם. ככל שהפיתוח מתקדם, אותות מולקולריים מנחים את התאים האלה לחלק ולבנות תאים נוספים, וממשיכים עד שכל האורגניזם נוצר.

כעת, לאחר שסקרנו כמה נקודות עיקריות היסטוריות, בואו נבחן כמה שאלות בסיסיות שנשאלו על ידי ביולוגים התפתחותיים עכשוויים.

ראשית, חלק מהחוקרים מתמקדים בזיהוי המולקולות המווסתות את ההתפתחות. לדוגמה, הם עשויים לחקור גורמי גדילה בודדים או שילובים של גורמי גדילה המוצגים כגורמים לתגובה ספציפית לתא, כגון בידול או העברה.

ביולוגים התפתחותיים אחרים חוקרים כיצד מולקולות אלה מווסתות את התהליך ההתפתחותי. הם עשויים לחקור כיצד ריכוז של אות מולקולרי יכול להנחות תא להבדיל או לנדוד. הם גם שואלים על האופן שבו תאים מתקשרים עם תאים סמוכים אחרים, ומסתכלים על מולקולות איתות המתפזרות על פני מרחק קצר ופועלות באופן מקומי, המכונות גורמים פארקריניים.

לבסוף, כמה ביולוגים התפתחותיים רוצים להבין כיצד תאים מגיבים לאותות חיצוניים. הם עשויים לחקור שינויים בתוך התא עצמו, כגון עליות או ירידות בביטוי של גנים מסוימים, על ידי התבוננות ברמות של החלבונים המקודדים שלהם. אחרים מתמקדים בשינויים חיצוניים, כגון שינויים בצורת התא או בגודל.

עכשיו שיש לכם תחושה של שאלות מפתח שנשאלו על ידי ביולוגים התפתחותיים מולקולריים, בואו נסתכל על כמה מהטכניקות בהן הם משתמשים כדי למצוא תשובות לשאלות אלה.

כתמים היא אחת הגישות הנפוצות ביותר לחקור דפוסי ביטוי גנים, ולזהות את המולקולות המסדירות את ההתפתחות.

אימונוהיסטוכימיה היא טכניקת הכתמה המשתמשת בנוגדנים הצמודים לכתבים כימיים או פלואורסצנטיים כדי לסמן חלבונים. הדמיה של חלבונים על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטית מציעה תובנות על לוקליזציה שלהם בקטעי רקמות, וגם על תרומתם הפוטנציאלית למבנים תאיים. הרכבה מלאה בהכלאה במקום היא שיטת הכתמה חלופית, המשתמשת בדנ"א או ב-RNA אוליגונוקלאוטידים כדי לבחון דפוסים של ביטוי גנים ברקמות תלת-ממדיות.

תרבות Explant היא עוד גישה נפוצה בתחום זה כדי ללמוד את המנגנונים שבאמצעותם גירויים חיצוניים לפעול. בטכניקה זו, רקמה מוסרת מהאתר הטבעי של צמיחה וגדלה בתרבות. לאחר מכן ניתן לבחון תנאי גדילה ספציפיים, כגון המצע על לוחות התרבות או גורמי גדילה שנוספו למדיית התרבות, על השפעותיהם על פיתוח תאים ורקמות.

הדמיית תאים חיים משמשת לניתוח תגובות תאים לגירויים התפתחותיים. תרביות הפריה מתאימות היטב ללכידת תנועות תאים ודפוסי לוקליזציה בזמן אמת. ניתן גם לעקוב אחר תאים מוכתמים או מתויגים פלואורסצנטית ב-vivo באמצעות מיקרוסקופיה של זמן..

לעתים קרובות, תאים מרקמה של עניין מושתלים מתורם לאורגניזם מארח, ולאחר מכן במעקב במהלך ההתפתחות.

עכשיו שאתם מכירים כמה שיטות מעבדה כלליות, בואו נסתכל על כמה יישומים של מחקר ביולוגיה התפתחותית מולקולרית.

גישה אחת לקביעת התפקיד שמוצרי גנים ספציפיים ממלאים בפיתוח היא לשנות את הביטוי שלהם באמצעים חיצוניים. בניסוי זה, אוליגונוקלאוטידים אנטיסנס בשם מורפולינוס הוזרקו לדפוק שני גנים דג זברה חשוב להתפתחות האוזן הפנימית נכונה. חיסון של חלבונים מבניים הראה כי עוברים עם ביטוי גנים מופחת להפגין פחות נוירונים ותאי שיער בתוך האוזן הפנימית לעומת הפקדים.

יישום נוסף של ביולוגיה התפתחותית מולקולרית הוא להבין מתי והיכן הגנים באים לידי ביטוי, כדי להבין טוב יותר כיצד החלבונים המקודדים שלהם עשויים לתפקד. חוקרים בניסוי זה השתמשו בגשושיות RNA עם תווית פלואורסצנטית משלימות לשני תמלילי יעד כדי לזהות תאים המתמללים גנים מעניינים אחד או שניהם.

מדענים מסוימים משתמשים בתרביות הסברה כדי לנתח תגובות תאים בתנאים שונים. בניסוי זה, החוקרים ניתחו נוירונים חושיים מהאוזן הפנימית של עוברים אפרוחים ותרבבו אותם במשך מספר שעות. לאחר מכן, תרבויות הועברו למדיה המכילה חרוזי חלבון. תמונות קונפוקליות של זמן לשגות בעקבות דגירה עם נוגדנים מסומנים גילו כי חלבונים על החרוזים קידמו את הצמיחה של תחזיות מגופי תאי נוירון.

הרגע צפית בהקדמה של ג'וב לביולוגיה התפתחותית מולקולרית. בסרטון זה סקרנו את ההיסטוריה של מחקר ביולוגיה התפתחותית מולקולרית, והכנסנו שאלות מרכזיות שנשאלו על ידי ביולוגים התפתחותיים. בחנו גם אסטרטגיות מחקר בולטות, ודנו בכמה מהיישומים הנוכחיים שלהם. כמו תמיד, תודה שצפית!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

לא הוכרזו ניגודי אינטרסים.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter