Calibration-free <em>In Vitro</em> Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Rory Nolan; Luis A. Alvarez; Samuel C. Griffiths; Jonathan Elegheert; Christian Siebold; Sergi Padilla-Parra

doi:10.3791/58157

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Exempt de calibration In Vitro la Quantification des protéines Homo-oligomérisation à l’aide d’instruments commerciaux et Open Source gratuit, logiciel d’analyse de luminosité

JoVE Journal
Biochemistry

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Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

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Exempt de calibration In Vitro la Quantification des protéines Homo-oligomérisation à l’aide d’instruments commerciaux et Open Source gratuit, logiciel d’analyse de luminosité

DOI:

10.3791/58157-v

•

08:22 min

•

July 17, 2018

•

Rory Nolan, Luis A. Alvarez, Samuel C. Griffiths, Jonathan Elegheert, Christian Siebold, Sergi Padilla-Parra^2,3,4

¹Cellular Imaging Group, Wellcome Centre Human Genetics,University of Oxford, ²Division of Structural Biology, Wellcome Centre Human Genetics,University of Oxford, ³Dynamic Structural Virology Group,Biocruces Health Research Centre, ⁴IKERBASQUE,Basque Foundation for Science

Chapters

00:04Title
00:50FKBP12F36V-mVenus Purification
03:24Preparation of Multiwell Plate Array
04:19Calibration-free Confocal Acquisition
06:26Results: FKBP12 Dimerizes upon Addition of BB Dimerizer Drug
07:23Conclusion

Summary

Automatic Translation

Ce protocole décrit une approche sans étalonnage pour quantifier les protéines homo-oligomérisation in vitro basée sur la spectroscopie de fluorescence fluctuation en utilisant la lumière commerciale au microscope à balayage. Les paramètres d’acquisition correcte et les méthodes d’analyse sont affichés.

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Usage Statistics

Utilisation de Scaffold Liposomes à Reconstituer interactions protéine-protéine Lipid-proximal<em> In vitro</em

Caractérisation biochimique et structurelle de l’hydrate de carbone Transport substrat-GRB2 SP0092

Quantification de l’activité In Vitro de l’Hypopigmentation

Analyse de repliement des protéines, des transports et dégradation dans les cellules vivantes par radioactifs Pulse Chase

Utilisation du pipeline Open-Source MALDI TOF-MS IDBac pour l'analyse des protéines microbiennes et des données spécialisées sur les métabolites

Quantification de la dynamique du réseau d'interaction des protéines à l'aide de la co-immunoprécipitation multiplexée

Quantification absolue du métabolisme de synthèse des protéines sans cellules par spectrométrie de chromatographie liquide à phase inversée

Quantification des acides humique et fulvique dans les minerais humates, le DOC, les matériaux humifiés et les produits commerciaux contenant des substances humiques