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निकट अवरक्त लेबल एजेंटों के साथ चूहे में पूंछ शिरा इंजेक्शन के लिए एक नया सबसे अच्छा अभ्यास
Summary April 19th, 2019
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यहाँ हम एजेंट या जैविक जांच में शामिल रंगों से पास-अवरक्त प्रतिदीप्ति इमेजिंग डेटा का उपयोग करके चूहों में पूंछ नस इंजेक्शन को मान्य करने के लिए एक विधि पेश करते हैं । पूंछ से पहले और इंजेक्शन के बाद imaged है, फ्लोरोसेंट संकेत मात्रा निर्धारित है, और इंजेक्शन की गुणवत्ता का एक आकलन किया जाता है ।
Transcript
इंजेक्शन सटीकता को मान्य करने और उसका आकलन करने की यह विधि एक महत्वपूर्ण गुणवत्ता नियंत्रण कदम और पशु अध्ययन में एक महत्वपूर्ण चरण प्रदान करती है जो सुसंगत और प्रजनन योग्य पूंछ नस इंजेक्शन को सुविधाजनक बनाने के लिए है। फ्लोरेसेंस इमेजिंग के माध्यम से इंजेक्शन का आकलन तुरंत बाद यह निर्धारित करने का लाभ प्रदान करता है कि क्या आपके एजेंट ने अपनी इच्छित मात्रा में रक्त परिसंचरण में प्रवेश किया है। पूंछ नस इंजेक्शन एक हाथ से हेरफेर है जो दृश्य प्रदर्शन से लाभ उठाता है और इंजेक्शन साइट से इंजेक्शन एजेंट की निकासी को देखकर बढ़ाया जा सकता है।
मुजामिल सलीम के साथ प्रक्रिया का प्रदर्शन ब्रुक डील, मेरी प्रयोगशाला से एक पीएचडी छात्र होगा । पूंछ नस इंजेक्शन से पहले, फ्लोरेसेंस बेसलाइन स्थापित करने के लिए उजागर पूंछ पर इंजेक्शन साइट के साथ एक निकट अवरक्त फ्लोरेसेंस इमेजर में एक एनेस्थेटाइज्ड जानवर को बाद में रखें। छवि के अधिग्रहण के बाद, जानवर को प्रवण स्थिति में सर्जिकल बेंच में स्थानांतरित करें और पूंछ के वास्कुलेचर को गर्म पानी में डूबकर फैलाएं।
लगभग एक मिनट के बाद, पूंछ उन्मुख तो पार्श्व पक्ष को देखने में है । पार्श्व पूंछ नस रंग में अंधेरा दिखाई देना चाहिए। अल्कोहल पैड के साथ नस की लंबाई को स्टरलाइज करें।
पूंछ को बाद में रखें और पूंछ के डिस्टल कोसीजील कशेरुकी क्षेत्र से शुरू होने वाले चयनित पार्श्व पूंछ नस में 25 से 27 गेज सुई बेवेल साइड अप और उठाया पूंछ के समानांतर डालें और यदि उचित सुई प्लेसमेंट आवश्यक रूप से विफल हो जाता है तो अधिक समीपस्थ आगे बढ़ जाता है। एक सफल सुई प्रविष्टि में, सुई के रिम में रक्त फ्लैशबैक देखा जाना चाहिए। यदि कोई फ्लैशबैक स्पष्ट नहीं है, तो नस प्रविष्टि खोजने के लिए इसे पूंछ से हटाने के बिना धीरे-धीरे सुई टिप को स्थानांतरित करें।
जब सुई ठीक से रखा गया है, सुई के रिम में इंजेक्शन सामग्री के साथ एक सिरिंज डालें और नस में सामग्री देने के लिए प्लंजर दबाना । वैकल्पिक रूप से, रक्त प्रवाह संकेतक के साथ एक कैथेटर का उपयोग किया जा सकता है। कैथेटर के संकेतक खंड में एक त्वरित फ्लैशबैक सही प्लेसमेंट के बाद देखा जाएगा।
इंजेक्शन लगाने से पहले पोत में उचित प्लेसमेंट की पुष्टि करने के लिए सिरिंज में रक्त खींचने के लिए मामूली पीठ दबाव का उपयोग किया जा सकता है। फिर, कोई प्रतिरोध महसूस नहीं किया जाएगा। एक बार जब सभी सामग्री वितरित कर दी गई है, तो सुई को हटा दें और थक्के को सुनिश्चित करने के लिए कम से कम एक मिनट के लिए बाँझ धुंध के साथ दबाव लागू करें।
यह सुनिश्चित करने के लिए इंजेक्शन की साइट को पेन से चिह्नित करें कि इंजेक्शन साइट अधिग्रहीत छवि के सफेद प्रकाश चैनल पर दिखाई देगी। इंजेक्शन की साइट पर इंजेक्शन फ्लोरेसेंस सिग्नल का आकलन करने के लिए, जानवर को निकट अवरक्त इमेजिंग चरण में वापस करें और जानवर को अपने पार्श्व पक्ष पर उन्मुख करें ताकि प्रदर्शन के अनुसार इमेजिंग के लिए पार्श्व पूंछ पर इंजेक्शन साइट का पर्दाफाश किया जा सके। बेसलाइन और पोस्ट-इंजेक्शन इंजेक्शन साइट फ्लोरेसेंस का विश्लेषण करने के लिए, ब्याज के क्षेत्रों को पूंछ नस इंजेक्शन के बाद फ्लोरेसेंस के क्षेत्र से पहले और उसके आसपास इंजेक्शन साइट के पास पूंछ पर निकट अवरक्त इमेजर सॉफ्टवेयर में खींचा जा सकता है।
सफलतापूर्वक दिया इंजेक्शन से पहले और इंजेक्शन के बाद फ्लोरोसेंट संकेत के लगभग समान रूप से कम स्तर का प्रदर्शन करेंगे । छवियां जिनमें फ्लोरेसेंस पूंछ की लंबाई में दिखाई देती है, स्वीकार्य नहीं हैं और विश्लेषण से हटा दी जानी चाहिए। इस प्रक्रिया का पालन करते हुए सामान्य रूप से किसी भी व्यवहार, शल्य चिकित्सा या पूर्व वीवो आणविक तकनीकों का प्रदर्शन किया जा सकता है।
यह तकनीक पूंछ नस इंजेक्शन के लिए गुणवत्ता नियंत्रण प्रदान करती है, ठीक से इंजेक्शन एजेंट के शिराओं के रक्त प्रवाह द्वारा तेजी से निकासी का खुलासा करती है, या नस छूट जाने पर इंजेक्शन की साइट पर पूलिंग करती है। इस विधि में उपयोग किए जाने वाले अभिवाक खतरनाक नहीं हैं, हालांकि, यदि फ्लोरेसेंस आधारित एजेंट को खतरनाक सामग्री के साथ शामिल किया जाता है तो उचित सावधानियां बरती जानी चाहिए।
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