Medicine
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Neue bewährte Methode zur Validierung von Tail Vene Injektionen in Ratte mit nahe-Infrarot-Label Agenten
Summary April 19th, 2019
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Hier präsentieren wir eine Methode zur Validierung Schweif Vene Injektionen bei Ratten durch die Verwendung von Nah-Infrarot-Fluoreszenz Bilddaten von Farbstoffen in Agenten oder biologische Sonden eingearbeitet. Die Rute wird abgebildet, bevor nach der Injektion wird das Fluoreszenzsignal quantifiziert und eine Beurteilung der Qualität Injektion erfolgt.
Transcript
Diese Methode zur Validierung und Bewertung der Injektionsgenauigkeit bietet einen wichtigen Schritt zur Qualitätskontrolle und eine entscheidende Phase in Tierstudien, um konsistente und reproduzierbare Schwanzveneninjektionen zu ermöglichen. Die Beurteilung der Injektion über fluoreszenzbildende Bildgebung unmittelbar nach ihrer Durchführung bietet den Vorteil, festzustellen, ob Ihr Mittel in der vorgesehenen Menge in den Blutkreislauf gelangt ist. Schwanzveneninjektion ist eine praktische Manipulation, die von der visuellen Demonstration profitiert und die durch die Beobachtung der Clearance des injizierten Mittels von der Injektionsstelle verbessert werden kann.
Das Verfahren mit Muzamil Saleem demonstriert Brooke Deal, eine Doktorandin aus meinem Labor. Positionieren Sie vor der Injektion der Schwanzvene ein anästhesiertes Tier seitlich in einem Nahinfrarot-Fluoreszenzbildr, wobei die Injektionsstelle am Schwanz ausgesetzt ist, um eine Fluoreszenzbasis zu bilden. Nachdem das Bild aufgenommen wurde, übertragen Sie das Tier auf die Operationsbank in der anfälligen Position und erweitern Sie die Schwanzvaskulatur, indem Sie es in warmes Wasser tauchen.
Nach etwa einer Minute den Schwanz so ausrichten, dass die Seitenseite in Sicht ist. Die seitliche Schwanzvene sollte dunkel erscheinen. Sterilisieren Sie die Länge der Vene mit Alkoholpolstern.
Positionieren Sie den Schwanz seitlich und legen Sie eine 25 bis 27-Spur-Nadelabschrägungnach oben und parallel zum angehobenen Schwanz in die ausgewählte seitliche Schwanzvene, beginnend am distalen Steißbeinwirbelbereich des Schwanzes, und bewegen Sie sich proximaler, wenn die richtige Nadelplatzierung bei Bedarf fehlschlägt. Bei einer erfolgreichen Nadeleinfügung sollte eine Blutrückblende am Rand der Nadel beobachtet werden. Wenn keine Rückblende sichtbar ist, bewegen Sie langsam die Nadelspitze, ohne sie vom Schwanz zu entfernen, um eine Veneneinfügung zu finden.
Wenn die Nadel richtig platziert wurde, legen Sie eine Spritze mit dem injizierbaren Material in den Rand der Nadel und drücken Sie den Kolben, um den Inhalt in die Vene zu liefern. Alternativ kann ein Katheter mit einem Durchflussindikator verwendet werden. Eine prompte Rückblende im Indikatorsegment des Katheters wird nach korrekter Platzierung beobachtet.
Ein leichter Gegendruck kann dann verwendet werden, um Blut in die Spritze zu ziehen, um die richtige Platzierung im Gefäß vor der Injektion zu bestätigen. Auch hier wird kein Widerstand zu spüren sein. Sobald das gesamte Material geliefert wurde, entfernen Sie die Nadel und setzen Sie mindestens eine Minute lang mit einer sterilen Gaze Druck auf, um die Gerinnung zu gewährleisten.
Markieren Sie die Injektionsstelle mit einem Stift, um sicherzustellen, dass die Injektionsstelle auf dem weißen Lichtkanal des aufgenommenen Bildes sichtbar ist. Um das Fluoreszenzsignal nach der Injektion an der Injektionsstelle zu bewerten, kehren Sie das Tier in die Nahinfrarot-Bildgebungsphase zurück und richten Sie das Tier seitlich aus, um die Injektionsstelle am seitlichen Schwanz zur Bildgebung freizulegen, wie gezeigt. Um die Fluoreszenz der Baseline- und Post-Injektionsstelle zu analysieren, können In der Nahinfrarot-Imager-Software am Schwanz in der Nähe der Injektionsstelle vor und um den Bereich der Fluoreszenz nach der Injektion der Schwanzvene Bereiche von Interesse gezogen werden.
Erfolgreich gelieferte Injektionen zeigen vor und nach der Injektion nahezu gleich niedrige Fluoreszenzsignale. Bilder, bei denen die Fluoreszenz über die gesamte Länge des Schwanzes sichtbar ist, sind nicht akzeptabel und sollten aus der Analyse entfernt werden. Alle verhaltens-, chirurgischen oder ex vivo molekularen Techniken können nach diesem Eingriff wie gewohnt durchgeführt werden.
Diese Technik bietet Qualitätskontrolle für eine Schwanzveneninjektion, die schnelle Clearance durch venösen Blutfluss des ordnungsgemäß injizierten Mittels, oder Pooling an der Injektionsstelle, wenn die Vene verpasst wird. Das bei dieser Methode verwendete Reagenz ist nicht gefährlich, es sollten jedoch geeignete Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden, wenn das fluoreszenzbasierte Mittel in ein gefährliches Material eingebaut wird.
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