Medicine
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
En ny bästa praxis för att validera svans ven injektioner i råtta med nära-infraröda-märkt agenter
Summary April 19th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Här presenterar vi en metod för att validera svans ven injektioner hos råttor genom att utnyttja infrarött fluorescens imaging data från färgämnen införlivas med agenter eller biologiska sonder. Svansen är avbildade före och efter injektionen, fluorescerande signalen kvantifieras, och görs en bedömning av injektion kvalitet.
Transcript
Denna metod för att validera och bedöma injektionsnoggrannheten ger ett viktigt kvalitetskontrollsteg och ett avgörande steg i djurstudier för att underlätta konsekventa och reproducerbara svansveninjektioner. Att bedöma injektionen via fluorescensavbildning omedelbart efter att den utförts ger fördelen att avgöra om ditt medel har kommit in i blodcirkulationen i avsedd mängd. Svans ven injektion är en praktisk manipulation som drar nytta av visuell demonstration och som kan förbättras genom att observera clearance av det injicerade medlet från injektionsstället.
Demonstrera förfarandet med Muzamil Saleem kommer att Brooke Deal, en doktorand från mitt laboratorium. Före svans ven injektion, placera en sövda djur i lateralt i en nära infraröd fluorescens imager med injektionsstället på svansen utsätts för att upprätta en fluorescens baslinjen. Efter att bilden har förvärvats, överföra djuret till den kirurgiska bänken i benäget läge och vidga svansen vasculature genom att dränka den i varmt vatten.
Efter ungefär en minut orientera svansen så att den laterala sidan är i sikte. Den laterala svansvenen ska visas mörk i färg. Sterilisera längden på venen med alkohol kuddar.
Placera svansen sidled och infoga en 25 till 27-gauge nål avfasning sida upp och parallellt med den lyfts svansen i den valda laterala svans venen börjar vid den distala coccygeal kotorna regionen svansen och flytta mer proximala om korrekt nål placering misslyckas som nödvändigt. Vid en lyckad nålinsättning bör blod flashback observeras i kanten av nålen. Om ingen tillbakablick är uppenbar, rör långsamt nålspetsen utan att ta bort den från svansen för att hitta ven insättning.
När nålen har placerats på rätt sätt, för in en spruta med det injicerbara materialet i kanylens kant och tryck ned kolven för att leverera innehållet i venen. Alternativt kan en kateter med en indikator för blodflödet användas. En snabb tillbakablick i indikatorsegmentet av katetern kommer att observeras efter korrekt placering.
Lätt mottryck kan sedan användas för att dra blod i sprutan för att bekräfta korrekt placering i kärlet innan du injicerar. Återigen kommer inget motstånd att märkas. När allt material har levererats, ta bort nålen och applicera tryck med en steril gasväv i minst en minut för att säkerställa koagulation.
Märk injektionsstället med en injektionspenna för att säkerställa att injektionsstället kommer att synas på den förvärvade bildens vita ljuskanal. För att bedöma fluorescenssignalen efter injektionen vid injektionsstället, returnera djuret till det när infraröda bildstadiet och orientera djuret på dess laterala sida för att exponera injektionsstället på den laterala svansen för avbildning som visats. För att analysera baslinjen och efter injektions injektionsstället fluorescens, regioner av intresse kan dras i nära infraröd imager programvara på svansen nära injektionsstället före och runt området fluorescens efter svansvenen injektion.
Framgångsrikt levererade injektioner kommer att visa nästan lika låga nivåer av fluorescerande signal före och efter injektionen. Bilder där fluorescensen syns i hela svansens längd är inte godtagbara och bör tas bort från analysen. Alla beteendemässiga, kirurgiska, eller ex vivo molekylära tekniker kan utföras som vanligt efter denna procedur.
Denna teknik ger kvalitetskontroll för en svans ven injektion, avslöjar den snabba clearance genom venöst blodflöde av den korrekt injicerade agenten, eller poolning vid injektionsstället om venen missas. Reagensen som används i denna metod är inte farliga, dock bör lämpliga försiktighetsåtgärder vidtas om det fluorescensbaserade medlet ingår med ett farligt material.
Please enter your institutional email to check if you have access to this content
has access to
BackLogin to access JoVE
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
To receive a free trial, please fill out the form below.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You
Thank You
Thank You
