Medicine
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Murine Myokardinfarkt Modell mit permanenten Ligation der linken Anterior absteigende Koronararterie
Chapters
Summary August 16th, 2019
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Hierin beschreiben wir ein chirurgisches Verfahren, das zeigt, wie eine dauerhafte Ligation der links-vorderen absteigenden Herzkranzgefäße bei Mäusen erreicht werden kann. Dieses Modell ist von hoher Relevanz für die Untersuchung der Pathophysiologie des Myokardinfarkts und der damit einhergehenden biologischen Prozesse.
Transcript
Dieses murine Modell der Myokardverletzung ermöglicht die Überwachung pathologischer Prozesse, die von der koronaren Okklusion bis zur Herzinsuffizienz im späten Stadium des lokalen Herzgewebes und der systemischen Ebene auftreten. Diese Methode ist mit allen Derzeit in der Herzbiologie und Physiologie verwendeten Auslesungen kompatibel. Darüber hinaus profitiert es von der immensen Vielfalt der murinen genetischen Modelle.
Der Erwerb von adäquaten chirurgischen Fähigkeiten kann einige Zeit in Anspruch nehmen. Dieses Verfahren lernt man am besten Schritt für Schritt mit einem erfahrenen Forscher. Visuelle Demonstration dieses murinen Modells ermöglicht die gemeinsame Nutzung von Hinweisen, die mit dem chirurgischen Eingriff helfen und den Lernprozess beschleunigen können.
Verwenden Sie einen elektrischen Rasierer, um schnell eine anästhesierte, 25-zu-30-Gramm, männlich, C57-Black/6 Maus auf der Kehle und der linken Seite des Rippenkäfigs zu rasieren. Bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifen. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf.
Legen Sie die Maus in die Supine-Position auf einem Heizkissen, und legen Sie eine kleine Gaze-Kompresse unter den Kopf, um eine Überhitzung der Augen zu vermeiden. Sichern Sie die Gliedmaßen mit Klebeband. Passieren Sie eine Schleife von 5-0 Seidennaht unter den oberen Schneidezähnen, und sichern Sie die Extremität der Schleife auf das Heizkissen, um den Mund während der Kanulation offen zu halten.
Enthaartiscreme auf die vorrasierten Bereiche auftragen und eine Minute lang sanft mit einem Wattestäbchen massieren. Entfernen Sie das überschüssige Fell und Creme mit Gaze, und reinigen Sie die exponierte Haut mit Tropfen von 0,9% Saline-Lösung und Gaze. Tragen Sie Stücke von steriler Gaze auf die rasierte Kehle und Thorax auf, und tränken Sie die Gaze mit Iodopovidon.
Stellen Sie das Beatmungsgerät auf ein Gezeitenvolumen von sieben Milliliter pro Kilogramm und eine Belüftungsrate von 140 Hüben pro Minute ein. Bewegen Sie die Maus unter einem Mikrochirurgie-Stereomikroskop. Halten Sie die Haut auf der Mitte des Halses, machen Sie einen 0,5-Zentimeter-Einschnitt entlang der kaudalen/cephalischen Linie, und trennen Sie die Lappen der Speicheldrüse.
Verwenden Sie gekrümmte Zangen, um die Faszien des Sternohyoidmuskels sanft zu trennen, bis Kehlkopf und Luftröhre sichtbar sind. Dann sichern Sie die Kanten der Öffnung mit Retraktoren an elastischen Bändern befestigt. Ziehen Sie als nächstes die Zunge vorsichtig seitlich und setzen Sie die stumpfe Innennadel einer 16-Spur-Kanüle mit Zange in die Luftröhre ein.
Visualisieren Sie eine korrekte Einfügung in die Luftröhre durch den Halsschnitt und schließen Sie die Kanüle an das Beatmungsgerät an. Legen Sie sterile 0,9%saline ergänzt mit Iodopovidon-getränkte Gaze auf den Schnitt, um das Gewebe während der Operation nass zu halten. Dann den Auspuffschlauch in Wasser geben.
Das Vorhandensein von Blasen deutet auf eine erfolgreiche Intubation hin. Für die Ligation der linken vorderen absteigenden Koronararterie, oder LAD, bewegen Sie vorsichtig die Maus in die rechte Seite decubitus Position, und sichern Sie die linke vordere Gliedmaße in der neuen Position. Identifizieren Sie die Linie zwischen der linken pectoralis Minor und Hauptmuskeln, und machen Sie einen schrägen ein Zentimeter Hautschnitt entlang der Linie.
Mit stumpf sezierenden Mikroscheren, trennen Sie die Faszien der Pectoralis Muskeln, ohne das Gewebe zu zerschneiden, und verwenden Sie Retraktoren, die an elastischen Bändern befestigt sind, um die Trennung aufrechtzuerhalten. Stellen Sie das Beatmungsgerät mit einem positiven Endexiratoratusdruck von drei Zentimetern Wasser ein. Verwenden Sie stumpfe Zangen, um die Brusthöhle im dritten interkostalen Raum zwischen der dritten und vierten Rippe zu öffnen.
Legen Sie zwei Retraktoren in den Rippenkäfig, einen auf jede Rippe, und verwenden Sie eine gekrümmte feine Zange, um das Perikard vorsichtig zu entfernen, ohne das Herz und die Lunge zu schädigen. Suchen Sie den LAD als oberflächliche, leuchtend rote Linie, die vom Rand der linken Aurikel in Richtung Der Scheitelpunkt verläuft. Verwenden Sie einen Nadelhalter, um eine 7-0 Seidennaht unter dem LAD zwei bis drei Millimeter unterhalb der linken Vorhöfin zu passieren.
Ziehen Sie die Seide langsam, um herzgewebe zu reißen, binden Sie die Ligatur mit drei Knoten. Der untere linke Teil des linken Ventrikels wird sofort blass auf Ligation. Lassen Sie nun die Rippenretraktoren los und halten Sie die dritte Rippe mit Zangen, machen zwei Pässe mit einer 6-0 Seidennaht unter der dritten und vierten Rippe.
Legen Sie drei Tropfen 37-Grad Celsius 0,9%saline Lösung auf die Öffnung, und schließen Sie das Ablauf-Abgasrohr für zwei oder drei Atemwege Zyklen, um die Lunge richtig aufzublasen. Ziehen Sie die Naht mit zwei Würfen fest und lösen Sie die Retraktoren, die die Muskeln halten, und helfen Sie den Muskeln, an ihre richtige anatomische Position zurückzukehren. Dann schließen Sie die Brusthaut mit zwei Stichen und zwei Würfen von 5-0 Naht seide.
Schließen Sie die Kehlhaut mit einem Stich von 5-0 Nahtseide und zwei Würfe. Am Ende des Verfahrens, entfernen Sie die Bandbänder von den Gliedmaßen, drehen Sie das Tier vorsichtig zu ventralen Dekubitus auf das Komprimus, und legen Sie eine Kompresse auf dem Heizkissen auf der rechten Seite des Tieres. Intraperitoneal injizieren 0,3 Milliliter 37-Grad-Celsius erwärmt 5%Glukose-Lösung.
Stoppen Sie das Beatmungsgerät. Wenn die Maus spontan atmet, entfernen Sie vorsichtig die Kanüle. Subkutan injizieren 0,1 Milligramm pro Kilogramm Buprenorphin.
Legen Sie die Maus in einen 30-Grad-Celsius-Käfig mit 100% Sauerstoff für mindestens eine Stunde mit Überwachung belüftet. Während der beiden ersten Tage nach der Operation, stellen Sie der Maus eine weiche Ernährung und Wasser ad libitum, Erwärmung des Tieres nach Bedarf. Sieben Tage nach der Operation bleiben die ischämischen Bereiche von Triphenyltetrazoliumchlorid unbefleckt, während das lebende Gewebe aufgrund von Dehydrogenasen rot färbt.
Die ischämischen Bereiche können dann als Prozentsatz der weißen Fläche der linken Herzkammer in einem bildgebenden Softwareprogramm berechnet werden. Die Western Blot-Analyse für alpha-glattes Muskelaktin und SMAD2-Phosphorylierung, die jeweils wichtige Auslesungen von Myofibroblasten und der transformierenden Wachstumsfaktor-Beta-Signalaktivierung sind, kann verwendet werden, um das Ausmaß der Fibrose im Myokardgewebe der infarktierten Herzen zu bestimmen. Eine Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktionsanalyse des transformierenden Wachstumsfaktors Beta und seiner nachgelagerten Ziel-mRNA-Expression kann auch durchgeführt werden, um das Vorhandensein von Myokardfibrose zu bewerten.
Pro-inflammatorische Signalwege und die Expression von pro-inflammatorischen Genen wird in der Regel gefunden, innerhalb der ersten Woche nach Myokardinfarkt aktiviert werden. mRNA-Expression von pro-inflammatorischen Genen und Monozyten-/Makrophagenmarkern wird ebenfalls beobachtet. Die Ligationshöhe wird das Überleben entscheidend beeinflussen und sollte an jede Sorte oder jeden Genotyp angepasst werden, da die LAD-Verzweigung variieren kann.
Konstanten in der Ligation sind der Schlüssel, um reproduzierbare Ergebnisse zu erzielen. Dieses Verfahren kann mit jeder Analysemethode gekoppelt werden und kann durch funktionelle Analyse, Gewebefixierung, Zellkultur oder jede Technik von Interesse gefolgt werden.
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