Neuroscience
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चूहा में थोरैसिक स्पाइनल कॉर्ड हेमीसेक्शन सर्जरी और ओपन-फील्ड लोकोमोटर आकलन
Chapters
Summary June 26th, 2019
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चूहा वक्ष रीढ़ की हड्डी hemisection चलन वसूली और उपचार प्रभावकारिता के तंत्रिका तंत्र की जांच करने के लिए एकतरफा रीढ़ की हड्डी की चोट का एक मूल्यवान और reproduible मॉडल है. इस आलेख में अर्धखंड प्रक्रिया करने के लिए और एक खुले क्षेत्र के क्षेत्र में चलन प्रदर्शन का आकलन करने के लिए एक विस्तृत चरण-दर-चरण मार्गदर्शिका शामिल है।
Transcript
स्पाइनल हेमिक्शन मात्रात्मक और आदर्श प्रजनन योग्य लोकोमोटर घाटे का उत्पादन करता है जिसे हमारे द्वारा विकसित किए गए लोकोमोटिव पैमाने के साथ कैप्चर किया जा सकता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ घाव की चयनशीलता और प्रजनन क्षमता है, जो जानवरों के बीच व्यवहार फेनोटाइप में कम परिवर्तनशीलता की ओर ले जाती है। एक एनेस्थेटाइज्ड वयस्क चूहे में पैर की अंगुली चुटकी के लिए प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करने के बाद, मुंडा त्वचा में एक २.५ सेंटीमीटर चीरा टी-6 से टी-10 कशेरुकी के लिए overlying और कुंद कैंची का उपयोग करने के लिए त्वचा और सतही वसा वापस लेना ।
कुंद विच्छेदन कैंची और पैरावर्टेब्रल मांसपेशियों को अलग करने के लिए एक आत्म-बनाए रखने वाला रिट्रैक्टर का उपयोग करें, टी-7 के पृष्ठीय पहलू पर टी-9 कशेरुकी को सम्मिलित करें और डिब्राइड के लिए ठीक संदंश और कपास-इत्तला देने वाले एप्लीकेटर्स का उपयोग करें और स्पिनस प्रक्रियाओं और कशेरुका लैमिना को बेनकाब करने के लिए किसी भी शेष ऊतक को साफ करें। दर को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे रखें और टी-7 और टी-8 कशेरुकी पर द्विपक्षीय रूप से पहलुओं को सावधानीपूर्वक काटने के लिए नाजुक हड्डी ट्रिमर्स का उपयोग करें। टी-8 और टी-9 कशेरुका लैमिना के बीच पृष्ठीय संयोजी ऊतक में एक मिलीमीटर सतही कटौती करने के लिए एक स्केलपेल का उपयोग करें, जिसमें ध्यान रखा जाए कि अंतर्निहित कॉर्ड को घायल न करें और टी-8 कशेरुका की स्पिनस प्रक्रिया को हटाने के लिए हड्डी ट्रिमर का उपयोग करें।
टी-7 स्पिनस प्रक्रिया पर सावधानीपूर्वक क्लैंप किए गए घुमावदार हेमोस्टेटिक संदंश के साथ, टी-8 लैमिना के कौडल छोर को लगभग 20 डिग्री तक घुमाएं और टी-8 लैमिना के तहत हड्डी ट्रिमर डालें। रीढ़ की हड्डी को बेनकाब करने के लिए ट्रांसवर्स प्रक्रियाओं के लिए कशेरुका लैमिना मध्य प्रदेश के बाईं और दाईं ओर कटौती को दोहराकर, लैमिना के साथ विस्तारित एक मिडलाइन कट बनाएं। उजागर रीढ़ की हड्डी में 2% लिडोकेन के ड्रिप 100 माइक्रोलीटर और टी-8 स्पाइनल सेगमेंट को ओवरलेइंग ड्यूरा को हटाने के लिए ठीक संदंश और इरिडेक्टॉमी कैंची का उपयोग करें।
उजागर कॉर्ड के लिए लिडोकेन प्रशासन दोहराएं और उजागर टी-7 से टी-9 कशेरुका के बीच विस्तारित स्पिनस प्रक्रियाओं के बीच बनाई गई एक केंद्र रेखा के दृश्य द्वारा कॉर्ड के मिडलाइन की पहचान करें। रीढ़ की हड्डी को स्थिर करने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करना, जानवर के एक तरफ मिडलाइन से रीढ़ की हड्डी को कम करने के लिए एक विच्छेदन चाकू का उपयोग करें, इस बात का ध्यान रखते हुए कि वेंट्रल साइड पर पूर्वकाल रीढ़ की धमनी के माध्यम से कटौती न करें। इरिडेक्टॉमी कैंची का उपयोग करके, रीढ़ की हड्डी के घाव पक्ष पर किसी भी शेष ऊतक के माध्यम से सावधानीपूर्वक कटौती की जाती है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि वेंट्रल-पार्श्व चतुर्भुज उचित रूप से स्थानांतरित हो जाता है और एक बाँझ, लगभग छह बाय दो मिलीमीटर खारा लथपथ हेमोस्टेटिक स्पंज को रीढ़ की हड्डी के ऊपर उजागर गुहा में रखते हैं।
फिर, मांसपेशियों की परतों और चीरा साइट के आसपास की त्वचा को बंद करने के लिए 4-ओ पॉलीग्लेक्टिन 910 टांके का उपयोग करें और चूहे को पूर्ण वसूली तक निगरानी के साथ गर्मी के दीपक के नीचे गर्म वातावरण में रखें। व्यवहार परीक्षण के लिए उपयुक्त प्रयोगात्मक समय बिंदु पर, चूहों को क्षेत्र में आदी होने के बाद, वीडियो रिकॉर्डिंग शुरू करें और लोकोमोटर गतिविधि को प्रोत्साहित करने के लिए मंद प्रकाश स्थितियों के तहत, क्षेत्र के केंद्र में चूहे रखें। चूहे को कम से कम चार मिनट के लिए पता लगाने की अनुमति दें, चूहे को वापस अखाड़े के केंद्र में ले जाने दें जब यह लोकोमोशन को बढ़ावा देने के लिए 20 सेकंड से अधिक समय तक स्थिर रहता है।
फिर, रिकॉर्ड किए गए परीक्षण सत्र के लोकोमोटर प्रदर्शन को स्कोर करें। आर्टिकुलर अंग आंदोलनों के लिए, टखने, घुटने और कूल्हे के लिए अलग से सहज लोकोमोशन के दौरान हिंडलिब संयुक्त आंदोलनों को स्कोर करें, या तो सामान्य, मामूली या अनुपस्थित के रूप में। वजन समर्थन के लिए, हिंडलिब एक्सटेंसर मांसपेशियों की क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए अनुबंध और लोडेड शरीर के वजन का समर्थन जब अंग के लिए जमीन पर है जब चूहा स्थिर है, साथ ही सक्रिय लोकोमोशन के दौरान ।
अंक की स्थिति के लिए, हिंडलिब अंकों की स्थिति का मूल्यांकन करें जबकि चूहा स्थिर और लोकोमोशन के दौरान है। कदम पैरामीटर को केवल तभी पूरा करें जब चूहा प्रारंभिक संपर्क के समय हिंडलिम्ब पंजा प्लेसमेंट के अभिविन्यास को रेटिंग देकर अपने शरीर के वजन का समर्थन कर सकता है और कदम के दौरान स्विंग चरण की तरलता के अलावा जमीन से लिफ्ट पर। पूर्वअलम्ब/हिंडलिम्ब समन्वय पैरामीटर को तभी पूरा करें जब परीक्षण के दौरान लगातार चार कदम हों और यदि अंग सक्रिय रूप से शरीर के वजन का समर्थन कर सकते हैं ।
लोकोमोशन के दौरान पूंछ की स्थिति का मूल्यांकन करें या तो ऊपर या नीचे। फिर प्रत्येक पैरामीटर से व्यक्तिगत स्कोर जोड़ें ताकि प्रत्येक हिंडलिब के लिए अधिकतम 20 अंक प्रदान किए जा सकें। प्रयोगात्मक समूहों के बीच घाव के आकार का आकलन और तुलना करने के लिए, रीढ़ की हड्डी के कुल क्रॉस-सेक्शन के प्रतिशत के रूप में घाव के अधिकतम क्षेत्र की गणना रीढ़ की हड्डी के वर्गों के हिस्टोलॉजिकल धुंधला के साथ आसानी से की जा सकती है।
उदाहरण के लिए, चूहों के बीच साझा अधिकतम घाव क्षेत्र के अनुपात के ओवरले के साथ बाएं हेमिकॉर्ड के इस प्रतिनिधि घाव ने क्रॉस-सेक्शनल कॉर्ड क्षेत्र के लगभग 47% के औसत घाव आकार का प्रदर्शन किया। बाईं ओर हेमिक्शन के बाद पहले पांच हफ्तों में बरकरार राज्य में लोकोमोटर प्रदर्शन में ये प्रतिनिधि परिवर्तन सर्जरी के बाद पहले तीन हफ्तों के दौरान जानवर के बाएं हिंडलिम्ब में लोकोमोशन की एक महत्वपूर्ण हानि प्रदर्शित करते हैं। प्रक्रिया के बाद दो सप्ताह तक सही हिंडलंब में लोकोमोशन के स्तर में सुधार देखा जाता है।
याद रखने के लिए सबसे महत्वपूर्ण बातें यह हैं कि एक सफल प्रोटोकॉल के लिए हेमसेक्शन और उचित पोस्ट-सर्जिकल पशु देखभाल और निगरानी के लिए स्पाइनल मिडलाइन की सटीक पहचान आवश्यक है। यह व्यवहार मूल्यांकन लोकोमोटर वसूली पर ब्याज के विशिष्ट प्रश्न को संबोधित करने के लिए विशेष परीक्षण के साथ पूरक के लिए ऊपरी पैरेट्रेकोर्विल सूचकांकों के लिए स्क्रीन करने के लिए एक आदर्श प्रोटोकॉल प्रदान करता है।
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