Developmental Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Vorming van menselijke parodontitis ligament Cell Sferoïden op Chitosan films
Chapters
Summary June 19th, 2019
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Hier presenteren we protocollen van kweken menselijke parodontitis ligament (PDL) cel sferoïden door Chitosan films. De cultuur van drie-dimensionale (3D) cellulaire sferoïden biedt een alternatief voor conventionele weefselcultuur polystyreen (TCPS) cultuursysteem.
Transcript
Dit is een gedetailleerd protocol van het kweken van parodontale ligament cel sferoïden door chitosan films. Vergeleken met het conventionele kweeksysteem produceert het sferoïde kweeksysteem parodontale ligamentcellen met verhoogde zelfvernieuwing en osteogene differentiatievaardigheden. Om te beginnen, bereid 1%gewicht-tot-volume chitosan oplossing zoals aangegeven in het manuscript.
Voeg 0,5 milliliter chitosan oplossing in elke put van een 24-well weefsel cultuur polystyreen plaat. Droog de plaat in een oven op 60 graden Celsius gedurende 24 uur om chitosan films te vormen. Om de chitosan films te neutraliseren, voeg 0,5 milliliter van 0,5 normale natriumhydroxide toe aan elke put van de 24-put plaat en incubeer bij kamertemperatuur gedurende twee uur.
Was vervolgens de chitosanfilms drie keer met dubbel gedestilleerd water. Steriliseer de chitosan-gecoate 24-well plaat in 70% alcohol 's nachts bij kamertemperatuur. Spoel de plaat drie keer met PBS en laat hem 's nachts onder ultraviolet licht achter.
Voorafgaand aan cel zaaien, pre-warme proliferatie medium, PBS oplossing, en trypsine EDTA oplossing tot 37 graden Celsius. Gooi de supernatant uit de celkweekkolf en was de samenvloeiende parodontale ligament, of PDL-cellen, met 10 milliliter PBS. Gooi de PBS en voeg een milliliter trypsine EDTA-oplossing toe aan de kolf.
Incubeer de kolf op 37 graden Celsius gedurende drie minuten en voeg vervolgens drie milliliter proliferatiemedium toe om de trypsinevertering te beëindigen. Breng de celsuspensie over op een conische buis van 15 milliliter en vercenter het vijf minuten op 300 keer g. Gooi de supernatant weg en schort de cellen opnieuw op in 500 microliter proliferatiemedium.
Tel de cellen met een hemocytometer en zaad ze op de plaat op vijf, 10, 30 en 60 duizend cellen per vierkante centimeter. Kweek de PDL-cellen in een couveuse bij 37 graden Celsius in 5% kooldioxide en bevochtelde lucht, waardoor het kweekmedium twee keer per week verandert. Observeer celmorfologie dagelijks gedurende vijf dagen via een omgekeerde fase contrastmicroscoop.
Levensvatbare PDL-celferoïden worden met succes gevormd met behulp van dit protocol. Sferoïden worden zelden waargenomen voor de lagere zaaidichtheid op dag één en drie. Maar bij de twee hogere dichtheden zijn vanaf dag één verschillende maten sferoïden aanwezig.
De optimale zaaidichtheid is 30 duizend cellen per vierkante centimeter omdat het resulteert in homogene sferoïden. Na vijf dagen van cultuur, grotere sferoïden worden waargenomen voor alle zaaien dichtheden. Een levensvatbaarheidstest toont aan dat de meerderheid van de PDL-cellen in leven zijn op dag één, drie en zes, maar het aantal dode cellen neemt toe op dag zes.
Een beperking van dit protocol is de verminderde proliferatie van cellen na sferoïde vorming. Dus verdere studies ter bevordering van de proliferatie van cellen na sferoïde vorming zijn vereist.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
