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Murine Appendektomie Modell der chronischen Colitis assoziiert entaktischen Darmkrebs durch präzise Lokalisierung von Caecal Patch
Chapters
Summary August 24th, 2019
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Das vorgestellte Protokoll beschreibt eine einfache chirurgische Entfernung des Blinddarms (Kaecal-Patch) in einer Maus, gefolgt von der Induktion von entzündlichem Darmerkrankungen-assoziiertem Dickdarmkrebs. Dieses murine Appendektomie-Modell ermöglicht die Untersuchung der biologischen Rolle des Blinddarms bei der Pathogenese der menschlichen Magen-Darm-Krankheit.
Transcript
Das Gesamtprotokoll beschreibt leicht durchgeführte chirurgische Verfahren zur Entfernung des Blinddarms, der als Kaecal-Patch bei Mäusen bekannt ist. Das modellhafte Blinddarmpharmaktomie kann verwendet werden, um die biologische Rolle des Blinddarms bei der Pathogenese der menschlichen Magen-Darm-Krankheit zu untersuchen. Der menschliche Anhang ist ein disputierbares Organ.
Neuere Studien haben gezeigt, dass der Anhang eine wichtige Rolle bei der Erhaltung der Darmgesundheit spielt. Um die biologische Funktion des Blinddarms zu untersuchen, ist die Erzeugung eines krankheitsassoziierten Appendektomie-Tiermodells von entscheidender Bedeutung. In diesem Protokoll beschreiben wir einen einfachen und einen sicheren chirurgischen Schritt zur Entfernung von Blinddarm, bekannt als Kaecal-Patch bei Mäusen.
Um den Erfolg dieses Modells sicherzustellen, gibt es drei wichtige Schritte, wie Sie im folgenden Video sehen werden. Zuerst lokalisieren Sie das Caecum der Mäuse vor der Operation. Zweitens, machen Sie einen kleinen Schnitt in den Bauch.
Drittens, desinfizieren und schließen Sie den Caecum-Stumpf. Der erste Teil, Mäuse Appendektomie. Bereiten Sie sterile chirurgische Instrumente und Reinigungslösungen vor der Operation vor.
Anästhetisieren und sichern Sie die Maus auf einer Plattform in einer Supine-Position, indem Sie vier Streifen medizinisches Klebeband über die Gliedmaßen legen, um Haltungsbewegungen während der Operation zu verhindern. Berühren Sie vorsichtig den ganzen Bauch der Maus, um das Gefühl der Beule zu finden. Bedecken Sie den Vorhang und desinfizieren Sie den rasierten Bereich des Mausbauchs so weit wie möglich mit zwei Mal Entojod.
Machen Sie einen Längsschnitt im Bereich von 0,5 Zentimeter bis ein Zentimeter an der Mittellinie des Bauches. Suchen Sie das Caecum gemäß der vorgegebenen Position des Caecums und entfernen Sie es vorsichtig für etwa einen Zentimeter lang, um den Kaecal-Patch zu identifizieren. Verwenden Sie eine vorgewärmte und sterile physiologische Salzhaut, um den Darm zu hydratisieren.
Um mögliche Komplikationen postoperativer Blutungen und Infektionen zu verhindern, ligate die mesenterischen Blutgefäße von Caecum mit dem 8-0 Naht. Das Caecum mit der Saline hydratisieren. Markieren Sie den Resektionsbereich mit der 4-0 Naht mit offener Schleife in der Nähe des Scheitelpunkts des Caecums am proximalen Dickdarm.
Schneiden Sie den Kaecal-Patch unterhalb der markierten Resektion mit Mikroscheren ab und wischen Sie den restlichen Kaekalgehalt mit medizinischen Wattestäbchen aus. Desinfizieren Sie den Stumpf von Caecum mit Entojod. Schließen Sie den Stumpf mit laufender Naht mit dem 8-0 Naht.
Entfernen Sie vorsichtig die 4-0-Gewindeschleife, die zuvor zur Markierung der Resektion am Kaecumstumpf verwendet wurde. Sterilisieren Sie die vernähte Position mit Entojod. Rehydrieren Sie den Schnittbereich mit der Saline.
Schließen Sie die Muskulaturschicht mit laufender Naht mit 8-0 Nahtgewinde. Schließen Sie die Hautschichten mit unterbrochenen Nähten mit 4-0 Nahtfaden. Den chirurgischen Schnitt zweimal mit Entojod desinfizieren.
Dann entfernen Sie Jod mit 75% medizinischem Alkohol. Drehen Sie die Maus vorsichtig zurück. Subkutan injizieren 0,1 Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht von Buprenorphin, und 0,4 Milliliter physiologische ranieren.
Und ruhen Sie die Maus auf dem Heizkissen, bis sie ins Bewusstsein zurückkehrt. Setzen Sie die Maus zurück in den sterilen Käfig, und beobachten Sie die Maus genau auf die Anzeichen von Schmerzen für drei Tage nach der Operation, um ihre Genesung zu gewährleisten. Der zweite Teil:Induktion von Colitis-Associated Colorectal Cancer with Azoxymethane, AOM, and Dextran Sodium Sulfate, DSS, seven days post-appendectomy.
Ein Aliquot von AOM auftauen und mit 0,9% normaler Salzwäsche auf 1 Milligramm pro Milliliter verdünnen. Der gesamte Vorbereitungsprozess erfolgt in der Dunstabzugshaube. Lösen Sie vier Gramm DSS Pulver in 200 Milliliter autoklavierte Wasserlösung, um 2%DSS vorzubereiten.
Jeder Käfig enthält fünf Mäuse. Machen Sie eine intraperitoneale Injektion von AOM mit 0,01 Milliliter pro Gramm pro Maus basierend auf seinem Gewicht. Ersetzen Sie das autoklavierte Wasser fünf Tage lang durch 2%DSS.
Die Mäuse werden für weitere zwei Zyklen mit autoklaviertem Wasser gefüttert. Der dritte Teil:Ergebnisse. Flow- und ELISA-Ergebnisse zeigen die erfolgreiche Entfernung des Kaecal-Patches an.
Dieses Verfahren kann zu einer signifikanten Reduktion der IgA-spezifischen Plasmazellen beitragen, eine offensichtliche Veränderung der sekretonischen IgA im Großdarm, im Vergleich zu 3%DSS, die hohe Sterblichkeitsrate und signifikante Gewichtsänderung aufgrund von schweren blutigen Stuhl, Anus-Prolaps und Bauchabess hat. Der 2%DSS eignet sich für den gesamten Prozess für seine hohe Überlebensrate von fast 80% und eine vernünftige Gewichtsänderung in Schein- und Appendektomiegruppen. Wie in diesen Bildern gezeigt, haben wir erfolgreich die Kolitis-assoziierten kolorektalen Tumoren induziert.
In H&E-Färbungsbildern zeigt der schwarze Pfeil das Schleimhautgeschwür an, die Pfeilspitze zeigt Adenokarzinom und ein weißer Pfeil zeigt die Infiltration von Neutrophilen zwischen den Drüsen an. Verschiedene Stadien des Adenokarzinoms können sowohl in Schein- als auch in Appendektomiegruppen beobachtet werden. Dieses kostengünstige Murine Appendectomy Modell kann verwendet werden, um einige wichtige Fragen zu beantworten, wie: Was ist die Rolle des Blinddarms bei der Regulierung von Darmbakterien und wie es an der Immunantwort im Darm-assoziierten Lymphgewebe beteiligt ist.
Denken Sie daran, um die Schädigung der Haftung des Darms zu vermeiden, sind die Vorortung von Cecum und kleine Hauteinschnitt eisern wichtig. Darüber hinaus verwendeten wir die 2%DSS, um Kolitis zu induzieren. Aber eine höhere Konzentration von DSS kann für andere Mäusestämme verwendet werden.
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