/
/
Produktion, kristallisering och strukturbestämning av IKK-bindande domän för NEMO
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 01:12Large Scale Expression of Histidine-6 (His6)-Tagged Nuclear Factor-kappa-B Essential Modulator Crystallography Construct (NEMO-EEAA)
- 02:33His6-Tagged NEMO-EEAA Purification
- 04:42His6 Tag Cleavage and Purification
- 07:09Sparse Matrix Screening
- 08:23Seed Stock Generation
- 09:00Crystal Looping
- 09:43X-Ray Data Processing and Structure Solution
- 10:38Results: Representative Production, Crystallization, and Structure Determination of the IKK-Binding Domain of NEMO
- 12:28Conclusion
Vi beskriver protokoll för strukturbestämning av IKK-bindande domän för NEMO genom röntgenkristallografi. Metoderna omfattar proteinuttryck, rening och karakterisering samt strategier för framgångsrik kristall optimering och strukturbestämning av proteinet i dess obundna form.
