ड्रोसोफिला वयस्कों के व्यवहार अध्ययन के लिए एक समायोज्य उच्च परिभाषा इमेजिंग सिस्टम

अपने अजीब आकार के कारण, ड्रोसोफिला छवि के लिए मुश्किल है । यह विधि स्टीरियो माइक्रोस्कोप के उपयोग के माध्यम से मक्खियों के व्यवहार और आकृति विज्ञान की इमेजिंग को दर्शाती है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग वैज्ञानिक अनुसंधान और शिक्षण दोनों के लिए किया जा सकता है।

प्रक्रिया का प्रदर्शन टोंग और सुश्री वेंग Yujia, मेरे मार्गदर्शन में अनुसंधान प्रशिक्षण कर रहे स्नातक Ms.Li जाएगा । शुरू करने के लिए, एक फ्लाई व्यवहार अवलोकन कक्ष, या एफबीओसी बनाएं, लगभग 17 बाय 22 मिलीमीटर की पारदर्शी प्लास्टिक बोतल टोपी का उपयोग करके या पांच मिलीलीटर पिपेट टिप के मोटे अंत से 17 मिलीमीटर के एक वर्ग को काटकर। अपनी गहराई को समायोजित करने के लिए FBOC में 1% आगर डालो ।

यदि भोजन को एफबीओसी में रखने की आवश्यकता है, तो 12 मिलीमीटर की गहराई प्राप्त करने के लिए एगर डालें। यदि भोजन को एफबीओसी में रखने की आवश्यकता नहीं है, तो फल मक्खियों के ठिकाने को अधिक आसानी से ट्रैक करने के लिए एगर को पांच मिलीमीटर की गहराई तक डालें। एफबीओसी बनाने के लिए पिपेट टिप का इस्तेमाल करते हैं तो कटऑफ पिपेट टिप सेक्शन को 35 या 60 मिलीमीटर पेट्री डिश में रखें।

पेट्री डिश में 1% एगर जेल को लगभग पांच मिलीमीटर की मोटाई में डालें और एफबीओसी के नीचे जमना और सील करने के लिए एगर का इंतजार करें। फिर वांछित मोटाई के लिए एफबीओसी में आगर जेल डालें। एफबीओसी के समान व्यास के साथ एथिलमाइन फोम शीट के एक टुकड़े के केंद्र में 10 मिलीमीटर गहरे छेद को बोरिंग करके एफबीओसी बेस बनाएं।

छेद में FBOC डालें। अवलोकन के उद्देश्य के आधार पर खमीर माध्यम, कृत्रिम आहार, या शुद्ध सुक्रोज या ग्लूकोज के साथ आवश्यक हो तो फ्लाई फूड बनाएं। नेत्रहीन यह निर्धारित करने के लिए कि मक्खियों को खिला रहे हैं या नहीं, भोजन में भोजन के रंगों को 100 मिलीलीटर प्रति 12.5 मिलीग्राम की अंतिम एकाग्रता में जोड़ें।

तैयार भोजन को पेट्री डिश में आठ मिलीमीटर की ऊंचाई तक डालें। जमना के बाद, भोजन को कागज पर तैयार आयताकार पर रखें और तदनुसार भोजन को काटें और इसे प्लास्टिक के एक टुकड़े पर रखें और चतुष्कोणीय पिरामिड या चतुष्कोणीय फ्रस्टम पिरामिड में काट दें ताकि विभिन्न कोणों से फ्लाई व्यवहार की रिकॉर्डिंग की अनुमति दी जा सके क्योंकि भोजन पर मक्खियों की भूमि है। प्लास्टिक का एक टुकड़ा काटें और एफबीओसी के केंद्र में प्लास्टिक और भोजन को रखने के लिए चिमटी का उपयोग करें।

1-2 सेंटीमीटर की मोटाई के लिए एक साफ खाली बोतल में 1% एगर जेल डालें और इसे 1-2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर रखें। बोतल में मक्खियों को स्थानांतरित करें और इसे 36 घंटे या उससे अधिक के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर रखें। चिल और कुचल बर्फ में मक्खियों को निष्क्रिय, उन्हें एक बर्फ पैक पर सॉर्ट और उन्हें FBOC के लिए हस्तांतरण के रूप में पहले वर्णित है ।

मक्खियों को एफबीओसी में स्थानांतरित करने के बाद, इसे एफबीओसी कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए कैमरे के लिए 30-40 मिलीमीटर यूवी या स्पष्ट फिल्टर के साथ कवर करें। अवलोकन के लिए एफबीओसी परिसर को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे रखें। एफबीओसी को रोशन करें।

माउंट मिनी एलईडी वीडियो रोशनी गर्म जूता माउंट खड़ा फ़्लैश करने के लिए और FBOC के बाईं और दाईं ओर रोशनी जगह है। रोशनी चालू करें और रंग के तापमान को 5, 000 से 5, 600 केल्विन और चमक को 100% एलईडी वीडियो लाइट्स पर चालू करें और स्टीरियो ज़ूम माइक्रोस्कोप को समायोजित करें जब तक कि एफबीओसी के किनारे को नग्न आंखों से स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है। एफबीओसी को देखने के क्षेत्र के केंद्र में ले जाएं।

स्टीरियो माइक्रोस्कोप के एक आईपीस के लिए यूनिवर्सल टेलीस्कोप डिजिटल कैमरा एडाप्टर के क्लैंप संलग्न करें। फिर कैमरे के बढ़ते पेंच और कैमरा फिक्सिंग स्क्रू को बारी-बारी से बदलकर एडाप्टर को सुरक्षित रूप से एक कॉम्पैक्ट डिजिटल कैमरा संलग्न करें। डिजिटल कैमरे को चालू करें और क्षैतिज/ऊर्ध्वाधर ठीक ट्यूनिंग घुंडी बारी जब तक FBOC बढ़त स्पष्ट रूप से कैमरे की एलसीडी स्क्रीन पर देखने के उज्ज्वल परिपत्र क्षेत्र के केंद्र में दिखाई देता है ।

मोड डायल को अपर्चर प्राथमिकता ऑटो-मोड में घुमाएं। मल्टी-सिलेक्टर पर फोकस मोड दबाएं, मैक्रो क्लोज-अप चुनें और फिर ओके बटन दबाएं। ज़ूम स्विच को वाइड एंगल एंड से टेलीफोटो एंड तक ले जाएं और सर्कुलर इमेज में तब तक ज़ूम करें जब तक कि इसका केंद्रीय हिस्सा फुल एलसीडी स्क्रीन को भर न दे।

फिल्म रिकॉर्ड बटन दबाएं और मक्खी व्यवहार रिकॉर्डिंग शुरू करते हैं। माइक्रोस्कोप के फोकस घुंडी को तब तक घुमाएं जब तक कि एफबीओसी में मक्खियां स्पष्ट रूप से दिखाई न दें। अवलोकन या वीडियो रिकॉर्डिंग के लिए ब्याज की मक्खी व्यवहार चुनें।

अवलोकन या वीडियो रिकॉर्डिंग के लिए वांछित आवर्धन प्राप्त करने के लिए ज़ूम घुंडी को ज़ूम इन और बाहर घुमाएं। यूवी फिल्टर के माध्यम से ली गई प्रतिनिधि तस्वीर स्पष्ट और तेज है, जब संस्कृति की शीशी कवर नहीं होती है तो ली गई तस्वीर के समान। पेट्री डिश के ग्लास के जरिए ली गई फोटो की क्वालिटी बेहद खराब और आंशिक रूप से धुंधली होती है।

वीडियो रिकॉर्डिंग से ली गई एक तस्वीर जिसमें मक्खी के शरीर के हर हिस्से का ब्योरा दिखाया गया है। क्योंकि कैमरा जूम स्टीरियो माइक्रोस्कोप से जुड़ा हुआ है, इसलिए जूम सिस्टम का इस्तेमाल करते हुए पैनायरल से क्लोज-अप शॉट्स तक शूट करना बहुत आसान है । इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, फ्लाई व्यवहार को कई देखने के कोणों के लिए देखा और प्रलेखित किया जा सकता है।

उदाहरण के लिए, मादा फ्लाई अंडे डालने की प्रक्रिया के दौरान अपने पिछले पैरों के साथ ओविपोसिटर को लगातार रगड़ रही है। अंडा बिछाने के व्यवहार का यह विस्तार पक्ष से स्पष्ट रूप से नहीं देखा जा सकता है । इस सरल और किफायती विधि का उपयोग करके, हम मक्खियों के व्यवहार और आकृति विज्ञान का एक मनोरम या क्लोज-अप ले सकते हैं और एक अच्छी गुणवत्ता वाले वीडियो या फोटो प्राप्त कर सकते हैं।