Chemistry
This content is Free Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Kvantitativ 31P NMR-analyse af ligniner og tanniner
Chapters
Summary August 2nd, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
31 P NMR er et kraftfuldt værktøj til strukturel udredning af polyfenoler. Denne hurtige, nemme, præcise, kvantitative og meget reproducerbare analyseprocedure, der giver mulighed for kvantificering og differentiering af de forskellige typer af hydroxy, phenol og carboxylic grupper i ligniner og tanniner er nu blevet et rutinemæssigt analytisk værktøj.
Transcript
Kvantitativ fosfor NMR repræsenterer et af de mest betydningsfulde gennembrud inden for lignin og tannin analytisk kemi i løbet af de sidste tre årtier. Denne teknik tilbyder hurtige, pålidelige og kvantitative oplysninger til de forskellige hydroxy gruppe i prøven. Disse NMR-metoder har enorm værdi i forståelsen af strukturen af lignaner og tanniner.
Det er også blevet anvendt på en række andre systemer, der har reaktive hydroxyl grupper. Begynd med forbehandling 100 milligram af lignin eller tannin prøve ved tørring natten over i en vakuum ovn ved 40 grader Celsius. Efter tørring overføres prøven hurtigt til en vandfri calciumsulfatdesikkator, indtil den når stuetemperatur.
For at forberede prøven til NMR-spektroskopi skal prøven vejes nøjagtigt omkring 30 mg af prøven i et to milliliterglas udstyret med en omrøringsstang. Derefter tilsættes 500 mikroliter af den frisklavede opløsningsmiddelopløsning til prøveglasset og forsegle hætteglasset med en hætte. Ved hjælp af en mikropipette tilsættes 100 mikroliter af den interne standardopløsning til prøveglasset og rører derefter magnetisk den resulterende spredning ved 500 rotationer i minuttet.
Når prøven er helt opløst, overføres 100 mikroliter tetramethyldioxyphospholane eller TMDP til prøveopløsningen, mens der arbejdes under emhætten, og prøveopløsningen forsegles, før prøven placeres til kraftig magnetisk omrøring. På dette tidspunkt forekommer den angivne reaktion på lignin- og tanninprøverne. Ved hjælp af en Pasteur-pipette overføres prøveopløsningen til et NMR-rør til analysen.
Hvis der observeres et gult bundfald i prøven, gentages proceduren ved at sikre, at al mulig fugtforurening undgås. Læg prøverøret i NMR-instrumentet, der er udstyret med en bredbåndssonde, og indstil forsøgsparametrene. Ved hjælp af resonansfrekvensen af deutereret kloroform skal frekvensen indstilles i spektrometeret.
Shim prøven og tune spektrometeret før du starter købet. Begynd at behandle rådata fra P31 NMR-spektroskopi ved at udføre Fourier-transformation. Juster fase efter manuel fasekorrektion ved at udvide behandlingsfanen og vælge fasekorrektion og manuel rettelse.
Ret oprindelig plan manuelt ved omhyggeligt at angive nulpunkter efter at have klikket på behandling og valgt oprindelig korrektion med flere punkter og flere punkter. Ved signalkalibrering skal du indstille signalet for fosforyleret vand til den kemiske skiftværdi på 132,2 dele pr. million ved at åbne analysefanen og derefter vælge reference under referencefanen. For signalintegration skal du åbne integreret i analysemenuen.
For at normalisere integrationen skal du indstille den interne standard til 1,0 ved at klikke på toppen for at vælge rediger integreret og indtast værdi 1,00 i den normaliserede fane og derefter udføre frekvensintegration i henhold til de kemiske skift, der er rapporteret i manuskriptet. Brug ligningen til at beregne molarkoncentrationen af intern standard, eller IS-opløsningen, og brug den beregnede værdi til at estimere den tilsvarende mængde af det specifikke signal pr. gram af prøven. Spektret kvantificering af forskellige hydroxy grupper i et nåletræ håndværk lignin stammer med TMDP blev registreret ved hjælp af 300 megahertz og 700 megahertz NMR spektrometer.
I NMR-spektret blev der fundet skarpe og stærke toppe ved henholdsvis 144 og 132 PPM på grund af henholdsvis TMD's interne standard og hydroxylation. De forskellige signaler fra hydroxygrupperne var tydelige i alle de kvantitative P31 NMR-spektre af ligniner. I et kvantitativt P31 NMR-spektrum af en tanninprøve, derivatiseret ved hjælp af TMDP, var et karakteristisk signal fra de forskellige alifatiske OH pyrogallol- og katekismusenheder godt synlige.
Sammenligningen mellem NMR-spektret af lignin før og efter oxidation blev registreret ved hjælp af et 300 megahertz NMR-spektrometer, der viste reduktionen i intensiteten af toppe af hydroxygrupper. De afgørende trin er dem, der vedrører tørring og vægtning af den prøve og nmr-behandlingsparametre, der skal anvendes. Og vigtigst af alt, udfasningen af det opnåede spektre.
Når denne metode er kombineret med to-dimensionelle NMR og gel permeation kromatografi, et meget detaljeret billede af naturlige polyfenoler kan opstå, tilbyder hidtil uset strukturel information og nye indsigter.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.
