Análisis de microscopía de video de alta velocidad para el diagnóstico de primera línea de discinesia ciliar primaria

El análisis de microscopía de video de alta velocidad es una herramienta confiable para el diagnóstico de primera línea de la discinesia ciliar primaria. Esta técnica es relativamente fácil de realizar, rápida, rentable y, en manos experimentadas, una herramienta muy confiable. Y es aplicable para pacientes de todos los grupos de edad.

La microscopía de video también revela la función ciliar secundaria. Como, por ejemplo, debido a infecciones bacterianas o virales. Pero se ha utilizado principalmente para diagnosticar la discinesia ciliar primaria.

Los científicos utilizan este método también para visualizar procesos intracelulares o funciones biológicas en células vivas. Me asistirá en este procedimiento la Sra. Tina Peromaa, nuestra técnica de laboratorio.

Antes de recolectar las células epiteliales respiratorias, pídale al paciente que se suene bien la nariz. Cuando el paciente esté listo, mantenga la cabeza del paciente fija con una mano y use un cepillo interdental de 0,6 milímetros de tamaño en la otra mano para cepillar el cornete inferior de la fosa nasal para recolectar suficientes tiras de células epiteliales. Deje caer las tiras de células cosechadas en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros que contiene el DMEM nutrido por la célula.

Después de cerrar la tapa del tubo de la microcentrífuga, sostenga el tubo contra la fuente de luz y agite el tubo para descubrir las tiras y conglomerados celulares cosechados. Posteriormente, coloque los tubos de la microcentrífuga con las tapas correctamente cerradas en una caja de poliestireno. Antes de cerrar la caja herméticamente, asegúrese de que los tubos estén fijos dentro de la caja.

Luego agregue una compresa fría a la caja mientras evita congelar la muestra. Después de retirar los tubos de micro centrífuga que contienen las muestras de la caja de poliestireno, coloque un tubo debajo de una campana de la unidad de calentamiento del microscopio para calentar hasta 37 grados centígrados para el análisis de microscopía de video de alta velocidad o HSVMA. A continuación, inicie la cámara y el software de la unidad de video en la computadora.

Use una pipeta para tomar una muestra pequeña y coloque dos gotas de la muestra en una cubeta. Cubra la cubeta con una tapa antes de colocarla bajo el microscopio. Use una lente de inmersión en aceite con un aumento de 100x y coloque una gota de aceite de inmersión en la superficie de la óptica.

Mientras se acerca al fondo del plato con la lente del microscopio, busque los grupos de células sin glóbulos rojos y con bajo contenido de moco. Después de encontrar una región representativa de interés, o ROI, concéntrese en un grupo de cilios golpeadores con los movimientos de cilios más grandes y grabe una secuencia de video. Graba las células con cilios golpeados lateralmente y desde arriba.

El análisis representativo muestra movimientos normales de los cilios vistos lateralmente y desde arriba. La muestra de un paciente con discinesia ciliar primaria, o PCD, con una mutación en el gen DNAH11 demostró el patrón clásico de latido ciliar rígido y mínimamente móvil. Cuando se ve desde un lado y desde arriba.

En otro paciente con PCD con la misma mutación, se observó un patrón hipercinético pero ineficiente diferente de los cilios golpeadores. También se observó un patrón de latido ciliar patológico y una frecuencia de latido ciliar en un paciente con infecciones recurrentes de las vías respiratorias superiores. Si el procedimiento de cepillado se lleva a cabo rigurosamente, el análisis de HSVMA no se pudo realizar ya que las células epiteliales ciliadas se cubrieron con una capa de glóbulos rojos.

El paso más importante en el procedimiento es obtener suficientes células respiratorias de los cepillados y mantener este material bien conservado para el análisis de video. El material restante se puede utilizar para realizar microscopía electrónica o microscopía inmunoflourescense para detectar posibles defectos estructurales en los cilios o para revelar defectos y la síntesis de proteínas ciliares.