아밀로이드에 대한 앞쪽에 지방 패드의 FNA 공연 및 처리

Published 10/30/2010
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Medicine
 

Erratum

Formal Correction: Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid
Posted by JoVE Editors on 12/20/2010. Citeable Link.

Summary

지방 패드의 열망은 조직의 아밀로이드증 진단 아밀로이드를 감지하는 다른 방법에 비해 선호, 법으로서, 낮은 비용 접근 방식입니다. 이 동영상이 문서에서는 최적의 진단 결과에 대한 표본의 적절한 처리와 함께 지방 패드 열망을 수행하기위한 절차 개요를 보여줍니다.

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Shidham, V. B., Hunt, B., Jaradeh, S. S., Barboi, A. C., Devata, S., Hari, P. Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid. J. Vis. Exp. (44), e1747, doi:10.3791/1747 (2010).

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Abstract

역사적으로, 심장, 간, 그리고 신장 biopsies는 아밀로이드증에서 아밀로이드 예금을 증명하기 위해 수행되었다. 이 질병의 임상 프레 젠 테이션 이렇게 변수가 아닌 구체적인 것이므로, 이러한 biopsies의 관련 위험 진단 생산량에 비해 너무 큰 있습니다. 이러한 피부 gingival 같은 낮은 생검 위험을 가지고 다른 사이트도 비교적 침략과 비용입니다. 또한, 이러한 biopsies 항상 진단을 수립하기 위해 충분한 아밀로이드 침전물이 없을 수 있습니다. 지방 패드의 열망은 낮은 비용과 최소한의 병적 상태와 좋은 상관 관계 임상을 보여주었다. 그러나,이 절차를 수행하거나 변수와 nonreproducible 결과에 이르게 aspirated 표본을 처리위한 표준 프로토콜이 없습니다. 조직에서 아밀로이드를 검출 가장 자주 이용 양상은 편광 현미경을 사용하여 콩고 레드 스테인드 섹션에 사과 녹색 복굴절입니다. 이 기술은 aspirated 재료의 셀 블록 준비가 필요합니다. 불행히도, 아밀로이드증의 초기 단계에서 제시 환자는 크게 지방 패드 aspirates 콩고 레드 스테인드 셀 블록 섹션의 감도를 감소 아밀로이드의 최소한의 금액을했습니다. 따라서, 전자 현미경에 의해 지방 패드 aspirates의 ultrastructural 평가 아밀로이드 감지에 대한 향상된 감도 제공, 활용하여야한다. 이 문서는 콩고 레드 셀 블록 섹션의 얼룩과 ultrastructural 식별을위한 전자 현미경을 모두 이용 아밀로이드의 검출을위한 앞쪽에 지방 패드 열망을 수행하기위한 간단하고 재현성 절차를 보여줍니다.

Protocol

소개

전신 아밀로이드증는 총칭 아밀로이드로 불리는 각종 단백질의 세포외 증착을 말합니다 높은 변수 질병입니다. 베타 내기 구성이 아밀로이드 원섬유의 증착은 관련 기관에 따라 다양한 임상 프레 젠 테이션에 연결됩니다. 같은 심장, 간, 및 / 또는 신장 등 중요 장기의 참여가있을 때 체계 아밀로이드증의 가장 임상적으로 관련성이 높은 발현이 설명되어 있습니다. 역사적으로, 이러한 참여 기관은 아밀로이드의 존재를 설명하기 biopsied 것입니다. 이 적당히 침입 절차는 출혈을 포함하여 상당한 위험을 실시. 지방 패드의 열망 그 이후 전신 아밀로이드증 1 아밀로이드의 검출에 대한 신뢰성 및 비침 투 방법을 제공하기 위해 표시되었습니다. 이 절차는 작은 혈관 벽 2 부족한 아밀로이드 예금을 평가하기위한 fibroadipose 조직을 검색할 국소 마취하에 앞쪽에 복벽에 피하 지방의 지방 흡입에 근본적으로 비교할 수 있습니다.

조직에서 아밀로이드 식별에 가장 자주 활용 방법은 콩고 레드 스테인드 섹션 편광 현미경 이하 시각 때 본 특성 사과 녹색 복굴절 패턴 남아 있습니다. 지방 패드의 열망이 수행되는 경우, 콩고 레드 얼룩이 직접 발랐습 슬라이드 또는 aspirated 지방 조직의 세포 블록 준비 중에서 할 수 있습니다. 그러나, 아밀로이드증의 초기 단계에서 환자는 크게 4,5 콩고 레드 스테인드 셀 블록 섹션의 감도를 감소 부족한 아밀로이드 예금을 보유하고 있습니다. 전자 현미경에 의해 지방 패드 aspirates의 Ultrastructural 평가 나은 재현성 향상 감도 4했습니다. 따라서, 그것은 셀 블록 모두 준비 및 전자 현미경 2 수행하기위한 모든 지방 패드 aspirates를 제출하는 것이 좋습니다.

지방 패드의 열망이 상대적으로 낮은 비용과 체계적 아밀로이드증를 진단하기 위해 조직을 얻기위한 비침 투 방법입니다. 이 문서는 전자 현미경에 의해 콩고 붉은 얼룩과 ultrastructural 평가 모두에 대한 표본을 제출하는 샘플 처리에 대한 자세한 내용과 함께 지방 패드 열망 절차를 설명합니다. 이 비디오에서는, 우리는 최적의 진단 자료를 검색하려면이 재현성 및 간단한 절차를 보여줍니다.

1. 앞쪽에 지방 패드의 FNA 공연

지역의 A.의 Anesthetization (그림 1 & 2)

  1. 알코올 면봉이나 특정 기관에서 선호하는 피부 클렌징 에이전트를 사용하여 정중선에 측면 복부 하단 사분면 지역과 배꼽 (그림 1) 아래의 피부를 청소하십시오.
  2. 로 표시 펜으로 그림 1에 표시된 2 X 2인치에 대한 편능형 모양의 영역을 표시합니다.
  3. 1 % 대기음 약 10 ML은 18G 바늘로 lidocaine. 25G 1 ½ 첨부 주사기에 바늘 인치합니다. 액체가 적절하고 기포가 존재하지 않습니다 때까지 플런저를 누르면서 똑바로 주사기를 감청하여 갇혀 공기를 제거합니다.
  4. 그림 2에 표시된 이미 표시된 편능형 지역의 국경을 따라 마취. 단지 지점에서 피부 아래의 25G 바늘을 삽입하여 시작하고 신중하게 X. 당​​신이 선박 내에되지 않도록하기 위해 주사기의 플런저에 다시 세워 지점 subcutaneously 바늘을 밀어. 그런 다음 천천히 바늘이 바늘이 지점 (그림 2a3)에서 피부의 나와 아무말도없이 A를 가리 키도록 철수하면서 lidocaine 2.5 ML (10 ML의 주사기에서 lidocaine의 ¼ 정도)까지 침투하는 플런저를 밀어. 바늘로 여전히 피부 밑에 지점 Y (그림 2a4)쪽으로 방향을 변경하고 지점 Y (그림 2b1)에 subcutaneously 바늘을 밀어. 이전처럼 천천히 포인트를 통해 바늘을 철수하면서 바늘이 선박에 아니라는 것을 확인하고 lidocaine의 약 2.5 ML 하는걸 (2b4 통해 그림 2b3). Y에 X와 B (2d4을 통해 그림 2c1)를 가리키는 B 지점에서 B와 분배 lidocaine 피하부터 유사한 단계를 반복합니다. 모여서에서 출혈을 방지하고 살균 게이지의 한 조각이 회사 응용 프로그램에 의해 B.
  5. 이제 지역이 인접 unanesthetized 가볍게 피부와 비교하여, 팁 / 면화 거즈 조각의 모서리로 anesthetized 편능형 이내에 피부를 만져 anesthetized 있는지 확인합니다.

B. 지방 흡인 패드 (그림 3) 공연

(이전 지방 패드 열망의 성능에 국소 마취의 응용 프로그램은 지역 및 개인 환경 설정에 따라 우회 수 있습니다. 앞쪽에 지방 패드 열망에 대해 올바르게 수행 FNAB 절차가 한 미친놈에 완료할 수 있습니다.하지만, 개별 환자의 고통 임계값에 따라 , 피하 지방 조직에 앞뒤로 18G 바늘의 작전을하는 것은 상대적으로 distres입니다노래. anesthetization 방법은 여기 25G 바늘로 두 거시기의 효과를 달성하고 절차를 개선 인내와 고통을 averts 설명.)

  1. 10 ML의 주사기에 18G 1 ½ 인치 바늘을 조립. 적절한 응용 프로그램 및 진공의 릴리스에 대한 주사기 그립 ( "FNAB 그립 / 총")에 주사 바늘 - 어셈블리를 마운트합니다.
  2. 정화 및 anesthetized 편능형 영역 (그림 3A) 이내에 피하 지방에 주사 바늘의 끝부분을 삽입합니다.
  3. 완전 진공 (그림 3B)를 생성하는 피하 조직에 삽입된 바늘과 주사기의 플런저를 철회.
  4. 진공을 유지하고 피하 지방 (3i를 통해 그림 3C)에 다양한 방향으로 앞뒤로 바늘을 기동. 각 스트로크는 바늘이 피부 밖으로 나와 아무말도없이 선택된 바늘의 길이와 최대한 오래해야합니다. 최대 샘플링하는 것은 각 뇌졸중 (그림 3i)와 방향을 변경하여 이루어진다. serosa에 접선과 복막 캐비티의 펑쳐링 피하기 위해 피부 표면에 평행하게 바늘의 방향을 유지하는 것이 중요합니다.
  5. fibroadipose 조직은 주사기에 축적되어. 일단 충분한 fibroadipose 조직 파편이 (조각 풍부한 혈액 혼합 시료 최대 1 ML) 검색되며, 완전히 진공을 해제하고 바늘을 (그림 3K)를 제거하십시오.
  6. 환자를 받거나 조수는 혈액의 넘쳐 흐름을 방지하기 위해 거즈의 패드와 프로 시저의 지역에서 확고한 압력을 적용합니다.

2. 스피스먼 처리

  1. 전자 현미경 (그림 4B)에 대한 글루 타 알데히드 용액에 fibroadipose 조직 최소한 5-6 조각을 놓으십시오.
  2. 기관 프로토콜에 따라 fibroadipose 조직 조각 몇 얼룩은 두 개의 슬라이드 (그림 4A) 사이를 확산하여 준비 수 있습니다.
  3. 나머지 자료는 주사기 응고 (이것은 응고 시간에 따라 5-7 분 정도 걸릴 수 있습니다) (그림 4C)에 허용됩니다.
  4. 응고된 fibroadipose 조직 재료는 주사기와 부유 (그림 4C2)의 벽에서 dislodged되도록 주사기에 포르말린 10 % 대기음. 주사기 (그림 4C3)에서 플런저를 제거하고 노즐 끝 (그림 4C4) 반대 주사기의 열린 월말부터 10 % 포르말린 용기에 응고된 fibroadipose 조직을 전송할 수 있습니다.
  5. 적절하게 컨테이너를 라벨 및 전자 현미경을위한 글루 타 알데히드와 H & E 섹션 콩고 레드 현미경을 편광에 따라 평가를 위해 얼룩을 위해 포르말린을 제출해주십시오. 얼룩이 준비가되어있다면, 그들은 개별 연구소의 프로토콜에 따라 처리될 수 있습니다.

그림 1
그림 1. 앞쪽에 지방 패드의 FNAB 위해 anesthetized 수 영역입니다.

그림 2
그림 2. 지역의 Anesthetization.

그림 3
그림 3. 앞쪽에 지방 패드의 FNAB 공연.

그림 4
그림 4. 앞쪽에 지방 패드 처리하면 아밀로이드 예금을 검출 실험에 제출하는 대기음.

3. 대표 결과

그림 5
그림 5. fibroadipose 조직 조각의 작은 혈관의 벽에 아밀로이드. Fibroadipose 조직은 포르말린 - 처리, 파라핀 콩고 레드 물들일, 임베디드, 가벼운 현미경을 편광으로 조사되었다. 작은 혈관의 벽에 아밀로이드는 애플 그린 복굴절 (흰색 화살표)를 보여줍니다.

그림 6
그림 6. 조직 아밀로이드증이 부족해. 애플 그린의 복굴절은 결석 다른 환자의 조직에서 아밀로이드증없이. 콜라겐 섬유의 블루 복굴절은 (흰색 화살표), 거의 모든 표본에 일반적으로 존재한다.

그림 7
그림 7. 혈관 벽에 아밀로이드와 일치 원섬유. 직선이 아닌 분기의 전자 현미경, 혈관 벽에 아밀로이드의 형성 8-10 나노미터 직경 원섬유을 무작위로 - 흩어져.

Discussion

아밀로이드증의 진단은 보통 같은 신장, 간, 및 / 또는 마음으로 영향을받는 장기의 조직 생검과 함께 이루어진다. 이러한 접근 방식은 높은 진단 수확량 그러나, 침략이다 있으며, 출혈이 포함하는 합병증에 연결되어있을 수 있습니다. 직장, gingival 및 골수 biopsies는 1960 6,7,8 상대적으로 덜 침략적 접근과 같은 진단을 선호했다. 복부 지방 패드의 열망은 체계 아밀로이드증 1의 조직 진단을위한 안전 법으로서, 단순하고 저렴 절차로 1973 년에보고되었다. 그러나, 검색된 시료의 처리 절차와 방법의 자세한 사항은 coherently보고되지 않습니다. 이 동영상과 기사는 단계로 절차 단계를 설명합니다.

지방 패드의 열망에서 아밀로이드를 검출 방법은, 마찬가지로, 또한 몇 가지 연구는 비교하고 1,5,6,7,8 다양한 접근 방식을 평가 잘 표준화되지 않습니다. 콩고 레드 얼룩과 앞쪽에 지방 패드 aspirates 평가 특히 부족한 아밀로이드 예금 5 아밀로이드증의 조기 경우에 낮은 interobserver의 재현성과 덜 민감합니다. Immunohistochemistry은 포르말린 고정 파라핀 - 임베디드 셀 블록 섹션에서 수행하고 세포학 얼룩에서 수행 콩고 빨간색 형광은 진단 민감도 9,10을 향상시키기 위해보고되었습니다. 전자 현미경은 지방 패드 aspirates 4, 5에서 fibroadipose 조직의 작은 혈관 벽에 부족한 아밀로이드 원섬유의 탐지 및 식별을 향상시킵니다. 이 정보를 기반으로,이 문서에서는 셀 블록 (진단 애플 그린의 복굴절을위한 편광 현미경 콩고 레드 스테인드 셀 블록 섹션의 평가 또한 표시된 immunohistochemistry 등) 및 전자 현미경을 위해 준비하는 시편 처리 설명합니다. 그러나 아밀로이드에 대한 표본 평가하기 위해 선택한 방법에 따라, 그것은 세포학의 비방 준비, 셀 블록 준비하고, 전자 현미경에 대한 처리를 받게 될 수도 있습니다. 일부 실험실은 aspirated fibroadipose 조직 조각에서 준비하고 형광 10 연구 콩고 레드 물들일 뭉개진에서 테스트를 수행합니다.

일반적으로 늦은 아밀로이드증에서 콩고 레드 편광 현미경으로 빛이 현미경 충분한 수 있지만, 셀 블록 섹션에 현미경을 편광과 질병 콩고 빨간 얼룩의 초기 단계에 지방 패드 aspirates 4,5,11에 대해 덜 민감하고 안정적인 것입니다 . Thioflavin T를 포함한 기타 특수 얼룩이 유사한 제한 사항과 함께 사용할 수 있습니다. 아밀로이드를 감지하는 다른 방법은 콩고 레드 편광 현미경과 형광 10과 아밀로이드에 대한 대기음 뭉개진의 평가를 포함합니다. 우리의 경험에서이 방법은 덜 재현할 수 있습니다. 전자 현미경에 의해 아밀로이드에 대한 지방 패드에있는 혈관의 평가는 이러한 한계를 극복에게 4,11. 아밀로이드의 자세한 특성은 immunoelectron 현미경 12보고되었습니다 있지만, 이러한 방법이 아닌 차 치료 환경에서 널리 사용할 수 없습니다.

열망의 절차를 수행하기위한 사용되는 바늘들은 게이지 벌금에 크기 (21 - 25G), 중급 (18 - 20G), 대형 (예 : - 14G) 11에 따라 분류있을 수 있습니다. 앞쪽에 지방 패드의 열망은 중급 (18 20G)에서 고급 (21 22G) 2,10에 이르기까지 변수 게이지를 사용하여 수행할 수로보고되었습니다. 대량 병변의 대부분은 세포 블록에 대한 추가 예제를 검색하는 광범위한 게이지 바늘 (예 : 18G 등)과 함께 추가적인 전달과 함께 좋은 세포학 얼룩을 얻기 위해 미세한 게이지 바늘 (예 : 25G 등) aspirated 있습니다.

앞쪽에 지방 패드 열망 동안 응집 fibroadipose 조직은 미세한 바늘 잘 대기음하지 않습니다. 셀 블록 준비와 전자 현미경은 지방 aspirates에 fibroadipose 조직 조각의 작은 혈관 벽의 평가를 위해 중요합니다. 넓은 게이지 바늘은 (예 : 18G 등) 진단 충분한 자료 2,10를 얻을 것을 권장하고 있습니다. 절차는 기존 FNAB 비교이므로, 지방 패드 열망은 넓은 게이지 바늘이 그것을 수행하기위한 5 사용될 수있다하더라도 FNAB이라고합니다.

Disclosures

관심 충돌하지 않습니다.

Acknowledgements

우리는 FNAB 절차 데모를 그래프 비디오 중에 도움을 양 보니 Phetteplace, RN 감사합니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alcohol swabs
gauze pads
marking pen
10 mL syringes x2
1% lidocaine local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate
18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB)
25G 1 ½ inch needle for injecting local anesthetic
FNA syringe holder ("gun")
bandage
vial of glutaraldehyde for electron microscopy
biopsy container of 10% formalin

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References

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