Esecuzione ed elaborazione di FNA anteriore Fat Pad per Amiloide

Published 10/30/2010
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Formal Correction: Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid
Posted by JoVE Editors on 12/20/2010. Citeable Link.

Summary

Aspirazione cuscinetto adiposo è un preferito, l'approccio mini-invasivo di costo e bassa rispetto ad altri metodi per rilevare amiloide per la diagnosi di amiloidosi sistemica. In questo articolo video dimostra uno schema procedurale per l'esecuzione di aspirazione di grasso pad con l'elaborazione appropriata del campione per l'esito diagnostico ottimale.

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Shidham, V. B., Hunt, B., Jaradeh, S. S., Barboi, A. C., Devata, S., Hari, P. Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid. J. Vis. Exp. (44), e1747, doi:10.3791/1747 (2010).

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Abstract

Storicamente, le biopsie del cuore, fegato e reni sono stati eseguiti per dimostrare depositi di amiloide in amiloidosi. Dal momento che la presentazione clinica di questa malattia è così variabile e non specifico, i rischi associati di queste biopsie sono troppo grandi per il rendimento diagnostico. Altri siti che hanno un minor rischio biopsia, come la pelle o gengivale, sono anche relativamente invasivi e costosi. Inoltre, queste biopsie non può sempre avere depositi di amiloide sufficienti per stabilire una diagnosi. Aspirazione cuscinetto adiposo ha dimostrato una buona correlazione clinica a basso costo e morbilità minima. Tuttavia, non ci sono protocolli standardizzati per l'esecuzione di questa procedura o la trasformazione del campione aspirato, che porta a risultati variabili e non riproducibili. La modalità più frequentemente utilizzate per la rilevazione di amiloide nei tessuti è un verde mela birifrangenza sul Congo sezioni rossi colorati con un microscopio polarizzatore. Questa tecnica richiede blocco preparazione delle cellule di materiale aspirato. Sfortunatamente, i pazienti che presentano in fase iniziale di amiloidosi sono minime quantità di amiloide che riduce notevolmente la sensibilità del Congo sezioni cellula colorata blocco rosso di aspirati cuscinetto adiposo. Pertanto, la valutazione ultrastrutturale di aspirati cuscinetto adiposo con la microscopia elettronica deve essere utilizzato, data la sua maggiore sensibilità per il rilevamento di amiloide. Questo articolo illustra una procedura semplice e riproducibile per l'esecuzione di aspirazione anteriore grasso pad per la rilevazione di amiloide utilizzando sia colorazione rosso Congo di sezioni di blocco di celle e la microscopia elettronica per l'identificazione ultrastrutturale.

Protocol

Introduzione

Amiloidosi sistemica è una malattia altamente variabile che fa riferimento alla deposizione extracellulare di proteine ​​diverse che vengono indicate collettivamente come amiloide. Deposizione di queste fibrille amiloidi con beta configurazione pieghettata porta a diverse presentazioni cliniche a seconda degli organi coinvolti. Le manifestazioni più clinicamente rilevanti di amiloidosi sistemiche sono notati quando c'è il coinvolgimento di organi critici come il cuore, il fegato, e / o renali. Storicamente, questi organi coinvolti sarebbero sottoposte a biopsia per dimostrare la presenza di amiloide. Queste procedure moderatamente invasivi effettuato un rischio significativo tra cui emorragia. Aspirazione cuscinetto adiposo è stato poi dimostrato di fornire un metodo affidabile e non invasivo per la rilevazione di amiloide in amiloidosi sistemica 1. Questa procedura è sostanzialmente paragonabile alla liposuzione del grasso sottocutaneo della parete addominale anteriore in anestesia locale per il recupero del tessuto fibroadipose per la valutazione dei depositi di amiloide scarsa in piccole pareti dei vasi sanguigni 2.

Il metodo più frequentemente utilizzato per l'identificazione amiloide nel tessuto rimane la caratteristica verde mela modello di birifrangenza visto quando Congo sezioni colorate rosso sono visualizzati al microscopio a luce polarizzata 3. Quando l'aspirazione cuscinetto adiposo viene eseguito, il Congo macchie rosse può essere fatto su entrambi diapositive direttamente macchiate o preparati blocco delle cellule del tessuto adiposo aspirato. Tuttavia, i pazienti in fase iniziale di amiloidosi sono scarsi depositi di amiloide, che riduce notevolmente la sensibilità del Congo sezioni cellula colorata blocco rosso 4,5. Valutazione ultrastrutturale di aspirati cuscinetto adiposo con la microscopia elettronica ha una migliore riproducibilità e sensibilità migliorata 4. Pertanto, si raccomanda di presentare tutti aspirati cuscinetto adiposo sia per la preparazione di un blocco di celle e per l'esecuzione di microscopia elettronica 2.

Aspirazione cuscinetto adiposo è un costo relativamente basso e il metodo non invasivo per l'ottenimento di tessuto per la diagnosi amiloidosi sistemica. Questo articolo descrive grasso procedura di aspirazione pad con i dettagli circa l'elaborazione del campione a presentare esemplare sia per colorazione rosso Congo e la valutazione ultrastrutturale al microscopio elettronico. In questo video, dimostriamo questa procedura riproducibile e semplice per recuperare materiale diagnostico ottimale.

1. Esecuzione della FNA anteriore del cuscinetto adiposo

A. anestesia del territorio (Figura 1 e 2)

  1. Utilizzando tamponi imbevuti di alcool o usato per disinfettare la pelle preferita da una particolare istituzione, pulire la pelle sulla zona quadrante inferiore dell'addome laterale alla linea mediana e sotto l'ombelico (Figura 1).
  2. Segna una superficie a forma di rombo di circa 2 x 2 pollici, come mostrato nella Figura 1 con un pennarello.
  3. Aspirare circa 10 ml di lidocaina 1% con un ago da 18G. Collegare un ago 25G 1 ½ pollice alla siringa. Rimuovere l'aria intrappolata toccando la siringa in posizione verticale mentre si tiene premuto lo stantuffo fino a liquido erogato e non siano presenti bolle d'aria.
  4. Anestetizzare lungo i confini dell'area romboidale già segnato come mostrato nella Figura 2. Iniziare inserendo l'ago 25G appena sotto la pelle nel punto A e spingere l'ago per via sottocutanea al punto X. Tirare indietro lo stantuffo della siringa per assicurare che non si è all'interno di una nave. Poi spingere lentamente lo stantuffo per infiltrarsi fino a 2,5 ml di lidocaina (circa ¼ della lidocaina nella siringa da 10 ml), mentre estrarre l'ago al punto A senza che l'ago esce dalla pelle nel punto A (Figura 2a3). Con l'ago ancora sotto la pelle cambiare la direzione verso il punto Y (Figura 2a4) e spingere l'ago per via sottocutanea al punto Y (Figura 2b1). Come prima, confermano che l'ago non è in un vaso e versare circa 2,5 ml di lidocaina, mentre lentamente ritirando l'ago attraverso il punto A (Figura 2b3 attraverso 2B4). Ripetere i passaggi simili a partire dal punto B e la dispensazione lidocaina sottocutaneo da punti B e B a X a Y (Figura attraverso 2c1 2d4). Prevenire le emorragie dal punge A e B con l'applicazione ditta di pezzi sterile calibro.
  5. È ora possibile verificare che la zona è anestetizzato da toccano leggermente la pelle all'interno della romboidale anestetizzato da punta / angolo del pezzo di garza di cotone, dal confronto con adiacente la pelle non anestetizzati.

B. Esecuzione di aspirazione di grasso pad (Figura 3)

(Applicazione della anestesia locale prima della performance di aspirazione cuscinetto adiposo può essere bypassato, a seconda delle preferenze regionali e individuali. Correttamente eseguita procedura FNAB per aspirazione anteriore cuscinetto adiposo può essere completato in un cazzo. Tuttavia, a seconda della soglia del dolore del singolo paziente , le manovre di aghi 18G avanti e indietro per il tessuto grasso sottocutaneo è relativamente distrescantare. Il metodo di anestesia descritto raggiunge qui l'effetto in soli due punture con aghi 25G e scongiura il dolore con una maggiore tolleranza alla procedura.)

  1. Montare l'ago 18G 1 ½ pollice su una siringa da 10 ml. Montare la siringa con ago di montaggio nella morsa siringa ("presa FNAB / pistola") per la corretta applicazione e il rilascio del vuoto.
  2. Inserire la punta dell'ago nel grasso sottocutaneo all'interno dell'area puliti e anestetizzato romboidale (Figura 3a).
  3. Rientrare completamente lo stantuffo della siringa con l'ago inserito nel tessuto sottocutaneo di generare vuoto (Figura 3b).
  4. Mantenere il vuoto e manovra l'ago avanti e indietro in direzioni diverse al grasso sottocutaneo (Figura 3c attraverso 3i). Ogni colpo deve essere il più lungo possibile con la lunghezza dell'ago selezionato senza che l'ago esce dalla pelle. Di campionamento massima si ottiene cambiando direzione ad ogni corsa (Figura 3i). E 'importante mantenere la direzione dell'ago tangente alla sierosa e parallela alla superficie della pelle per evitare la puntura della cavità peritoneale.
  5. Il tessuto fibroadipose si accumula nella siringa. Una volta abbastanza frammenti di tessuto fibroadipose (fino a 1 ml di campione di sangue ricco di frammenti misti) vengono recuperati, rilasciare il vuoto e rimuovere l'ago (figura 3k).
  6. Hanno il paziente o l'assistente esercitare una pressione decisa sulla zona di procedura con un tampone di garza per evitare stravaso di sangue.

2. Campione di elaborazione

  1. Luogo almeno 5-6 frammenti di tessuto fibroadipose in soluzione glutaraldeide per la microscopia elettronica (Figura 4B).
  2. A seconda del protocollo istituzionale, un paio di strisci di frammenti di tessuto del fibroadipose può essere preparata ripartendoli tra due vetrini (Figura 4A).
  3. Il materiale rimanente viene lasciato coagulare nella siringa (questo può richiedere 5-7 minuti, a seconda del tempo di coagulazione) (Figura 4C).
  4. Aspirare formalina al 10% nella siringa in modo che il materiale tessuto coagulato fibroadipose è staccato dalla parete della siringa e variabile libera (Figura 4C2). Togliere lo stantuffo dalla siringa (Figura 4C3) e trasferire il tessuto coagulato fibroadipose nel contenitore di formalina al 10% dalla fine della siringa aperta di fronte alla fine degli ugelli (Figura 4C4).
  5. Etichettare i contenitori in modo appropriato e presentare la glutaraldeide per la microscopia elettronica e la formalina per H & E sezione e Congo macchia rossa per la valutazione sotto microscopio polarizzatore. Se le sbavature sono preparati, possono essere trattati secondo il protocollo del singolo laboratorio.

Figura 1
Figura 1. Area di essere anestetizzati per FNAB anteriore di cuscinetto adiposo.

Figura 2
Figura 2. Anestesia del territorio.

Figura 3
Figura 3. L'esecuzione di FNAB anteriore cuscinetto adiposo.

Figura 4
Figura 4. Trattamento dei anteriore cuscinetto adiposo aspirato da sottoporre al laboratorio per la rilevazione di depositi di amiloide.

3. Rappresentante Risultati

Figura 5
Figura 5. Amiloide nella parete dei piccoli vasi sanguigni in frammenti di tessuto fibroadipose. Tessuti Fibroadipose è stato elaborato in formalina, inclusi in paraffina, colorate con rosso Congo, ed esaminate dalla polarizzazione microscopio ottico. Amiloide nella parete dei piccoli vasi sanguigni mostra birifrangenza verde mela (freccia bianca).

Figura 6
Figura 6. Tessuto manca amiloidosi. La birifrangenza verde mela è assente nei tessuti di un paziente diverso senza amiloidosi. Birifrangenza blu (freccia bianca) delle fibre di collagene, di solito sono presenti in quasi tutti i campioni.

Figura 7
Figura 7. Fibrille amiloidi in linea con la parete dei vasi sanguigni. Microscopio elettronico di diritto, non ramificati, a caso sparsi 8-10 nm di diametro fibrille formate da amiloide nella parete dei vasi sanguigni.

Discussion

La diagnosi di amiloidosi viene ottenuto con una biopsia dei tessuti degli organi colpiti, come il rene, il fegato, e / o del cuore. Questo approccio è ad alto rendimento diagnostico, tuttavia, è invasiva e può essere associata a complicanze tra cui emorragia 2. Rettale, gengivale, e le biopsie del midollo osseo sono stati preferiti per la diagnosi come approccio relativamente meno invasivo in 6,7,8 1960. Aspirazione cuscinetto adiposo addominale è stato segnalato nel 1973 come sicura, minimamente invasiva, procedura semplice e meno costoso per la diagnosi del tessuto di amiloidosi sistemica 1. Tuttavia, i dettagli della procedura e l'approccio al trattamento del campione recuperate non è coerentemente riportato. Questo video e l'articolo descrivere la procedura passo passo.

L'approccio per la rilevazione di amiloide in aspirazione cuscinetto adiposo, allo stesso modo, inoltre, non è ben standardizzato con pochi studi a confronto e valutare diversi approcci 1,5,6,7,8. Valutazione dei anteriore aspirati cuscinetto adiposo con colorazione rosso Congo è meno sensibile di riproducibilità tra osservatori più bassi soprattutto nei primi casi di amiloidosi con depositi di amiloide scarsa 5. Immunoistochimica eseguita su formalina fissi incluse in paraffina blocco di celle e sezioni rosso Congo fluorescenza eseguite su prelievi citologici sono stati segnalati per migliorare la sensibilità diagnostica 9,10. La microscopia elettronica migliora la rilevazione e l'identificazione di fibrille amiloidi scarsa nelle pareti piccoli vasi sanguigni nel tessuto fibroadipose di grassi pad aspirati 4, 5. Sulla base di queste informazioni, questo articolo descrive il trattamento del campione per preparare blocchi di celle (per la valutazione del Congo sezioni cellula colorata blocco rosso al microscopio polarizzatore per la diagnostica birifrangenza verde mela e anche per l'immunoistochimica, come indicato) e per la microscopia elettronica. Tuttavia, a seconda dell'approccio scelto per la valutazione del campione per l'amiloide, può essere sottoposto a preparazione striscio citologico, blocco preparazione delle cellule, e di elaborazione per la microscopia elettronica. Alcuni laboratori di eseguire le prove del strisci preparati da frammenti di tessuto aspirato fibroadipose e colorate con rosso Congo per studiare la fluorescenza 10.

Generalmente in tarda amiloidosi, la microscopia ottica con microscopio rosso Congo polarizzante può essere sufficiente, tuttavia, nelle prime fasi della malattia colorazione rosso Congo con polarizzazione microscopio su sezioni di blocco di celle è meno sensibile e affidabile per il grasso aspirato pad 4,5,11 . Altre colorazioni speciali comprese Thioflavin T può essere usato con limitazioni simili. Altri approcci per rilevare amiloide includere la valutazione di strisci di amiloide aspirato con microscopia rosso Congo polarizzazione e fluorescenza 10. Nella nostra esperienza questo metodo è meno riproducibile. Valutazione dei vasi sanguigni nel cuscinetto adiposo per l'amiloide da microscopia elettronica supera queste limitazioni 4,11. Un'ulteriore caratterizzazione di amiloide è stata riportata al microscopio immunoelectron 12, tuttavia, questi metodi potrebbero non essere disponibili ampiamente in un non-contesto di cura terziaria.

Aghi usati per l'esecuzione di procedure di aspirazione possono essere classificati in base alle loro dimensioni valutare in fine (21-25G), intermedio (18-20G) e grandi (ad esempio-14G) 11. Anteriore aspirazioni cuscinetto adiposo sono stati segnalati per essere eseguita utilizzando indicatori variabile da intermedia (da 18 a 20 G) di multa (da 21 a 22G) 2,10. La maggior parte delle lesioni di massa sono aspirati con aghi calibro più fine (come 25G) per ottenere una buona prelievi citologici con ulteriori passaggi con gauge più ampia (come 18G) per recuperare campione supplementare per i blocchi delle celle.

Durante l'aspirazione anteriore cuscinetto adiposo, il tessuto fibroadipose coesa non aspirare bene con aghi più sottili. Bloccare la preparazione delle cellule e la microscopia elettronica sono importanti per la valutazione dei muretti dei vasi sanguigni nel tessuto frammenti fibroadipose nel aspirati grasso. Aghi calibro più ampia (come 18G) sono raccomandati per produrre materiale diagnostico adeguato 2,10. Poiché la procedura è paragonabile alla FNAB convenzionale, aspirazione cuscinetto adiposo viene indicato come FNAB anche se aghi calibro più ampio può essere utilizzato per l'esecuzione di esso 5.

Disclosures

Nessun conflitto di interesse.

Acknowledgements

Ringraziamo la signora Bonnie Phetteplace, RN per l'assistenza durante il video graficamente la dimostrazione procedura FNAB.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alcohol swabs
gauze pads
marking pen
10 mL syringes x2
1% lidocaine local anesthetic- If lidocaine is used alone, it causes an initial burning sensation after instillation. This can be prevented by using a 1:1 mixture of 1% lidocaine and 1% sodium-bi-carbonate
18 gauge(G) 1 ½ inch needles x2 (for performing FNAB)
25G 1 ½ inch needle for injecting local anesthetic
FNA syringe holder ("gun")
bandage
vial of glutaraldehyde for electron microscopy
biopsy container of 10% formalin

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References

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