Arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep Technologies StemCell

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Cellule killer naturali sono una piccola popolazione di linfociti. Qui mostriamo come isolare queste cellule dal sangue umano per selezione negativa, utilizzando un kit da Technologies StemCell. Le cellule ottenute sono vitali e incontaminata dagli anticorpi, e quindi pronti per essere utilizzati per una serie di procedure.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Natural killer (NK) sono grandi linfociti granulari citotossici che appartengono al sistema immunitario innato e svolgono ruoli importanti nella lotta contro il cancro e le infezioni, ma sono anche implicati nelle prime fasi della gravidanza e rigetto del trapianto. Queste cellule sono presenti nel sangue periferico, da cui possono essere isolati. Le cellule possono essere isolate mediante selezione sia positiva che negativa. Per la selezione positiva usiamo anticorpi diretti ad un marcatore di superficie presente solo sulle cellule di interesse mentre per selezione negativa usiamo cocktail di anticorpi mirati a marcatori di superficie presenti in tutte le cellule ma le cellule di interesse. Quest'ultima tecnica presenta il vantaggio di lasciare le cellule di interesse privi di anticorpi, riducendo così il rischio di attivazione delle cellule indesiderate o differenciation. In questo video-protocollo dimostriamo come separare le cellule NK dal sangue umano per selezione negativa, utilizzando il kit RosetteSep dalle tecnologie StemCell. La procedura comporta l'ottenimento di sangue periferico umano (con una revisione istituzionale bordo approvato il protocollo per proteggere i soggetti umani) e mescolandolo con un cocktail di anticorpi che si legano ai marcatori assenti sulle cellule NK, ma presente su tutte le altre cellule mononucleate presenti nel periferico sangue (ad esempio, i linfociti T, monociti ...). Gli anticorpi presenti nel cocktail sono coniugati ad anticorpi diretti a glicoforina A eritrociti su. Tutte le cellule indesiderate e globuli rossi saranno quindi intrappolati in complessi. Il mix di cocktail di sangue e anticorpo è poi diluito, sovrapposto su una pendenza HISTOPAQUE, e centrifugati. Le cellule NK (> 80% puro) potranno essere ritirati presso l'interfaccia tra il HISTOPAQUE e il plasma diluito. Cocktail simili sono disponibili per l'arricchimento di altre popolazioni di cellule, come i linfociti T umani.

Protocol

Un protocollo dettagliato è incluso in ogni cocktail Rosetta isolamento settembre ed è disponibile online sul sito della StemCell tecnologie 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Le cellule isolate con questa tecnica può essere ulteriormente suddiviso in diverse popolazioni con altri kit di separazione delle cellule.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics