En minut, Sub-ett-Watt fototermisk tumör Ablation Använda Porphysomes, Intrinsic Multifunktionell Nanovesicles

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Vi utvecklade nya inneboende multifunktionella nanovesicles kallas porphysomes, som har strukturen beroende fluorescens självsläckning och unika fototermiska egenskaper, vilket fungerar som potenta fototermisk terapimedel. Vi formulerade porphysomes använder högtrycks extrudering och undersökt deras fototermisk terapi effektivitet i en xenograft tumörmodell.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Jin, C. S., Lovell, J. F., Zheng, G. One Minute, Sub-One-Watt Photothermal Tumor Ablation Using Porphysomes, Intrinsic Multifunctional Nanovesicles. J. Vis. Exp. (79), e50536, doi:10.3791/50536 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Vi har nyligen utvecklat porphysomes som något multifunktionella nanovesicles. En fotosensibilisator, pyropheophorbide α, var konjugerat till en fosfolipid och sedan själv ihop till lipo-liknande sfäriska vesikler. På grund av den extremt höga tätheten av porfyrin i porfyrin-membranet, porphysomes genererade stora extinktionskoefficienterna, struktur beroende fluorescens självsläckning, och utmärkt fototermisk effektivitet. I vår formulering var porphysomes syntetiseras med användning av högtryckssträngsprutning, och uppvisade en medelpartikelstorlek omkring 120 nm. Tjugofyra h efter intravenös injektion av porphysomes, den lokala temperaturen hos tumören ökas från 30 ° C till 62 ° C snabbt vid en minuters exponering av 750 mW (1,18 W / cm 2), 671 nm laser-strålning. Efter den fullständiga termiska ablation av tumören, sårskorpsbildning bildats och läkt inom 2 veckor, medan tumörerna i kontrollgrupperna fortsatte att växa och alla nådde den definierade svd punkt inom 3 veckor. Dessa data visar hur porphysomes kan användas som potent fototermisk behandling (PTT) medel.

Introduction

Porphysomes är nya multifunktionella nanovesicles som vi nyligen utvecklat som kan multimodal bildbehandling och terapi 1. De bildas från self-assembled porfyrin biskikt och innehåller en mycket hög täthet av porfyrin (över 83, 000/porphysome partikel), som genererar stora extinktionskoefficient och resulterar i en unik struktur-beroende fluorescens självsläckning. Porphysomes har bra in vivo farmakokinetiska och biodistribution egenskaper: de uppvisar en blodhalveringstid på 12 h efter systematisk administrering och passivt ansamlas i xenotransplantattumörer med 7,5% ID / g vid 24 timmar efter injektion 2.

Deras unika struktur och fysikalisk-kemiska egenskaper gör porphysome en bra kandidat för multimodal bildbehandling och bildstyrd behandling. Först av allt, porfyrin, porphysomes i sig är lämpliga för fluorescens avbildning av tumörer på tumören ackumulering 1.Dessutom har var och en porfyrin en stabil plats för kelatbildande radioisotoper kan därför porphysomes lätt kan märkas med radioisotoper såsom 64Cu för PET imaging 3. Dessutom är den absorberade ljusenergin avleds termiskt i laser bestrålning exponering när porphysome struktur är intakt, så porphysomes uppvisar också unik fotoakustisk avbildning och PTT kapacitet. Det har visats att 24 h efter intravenös injektion av porphysomes, laserbestrålning av porphysome-ackumulerade tumörinducerad en ökning snabb temperatur och stark fototermisk tumör ablation. Detta visade att porphysomes är effektiva fototermiska förstärkare med utsläckningskoefficient så högt som guld nanopartiklar (AuNPs) 1. Å andra sidan, i jämförelse med andra oorganiska fototermiska medel inkluderande AuNPs, porphysomes visar en enastående fördel i biosäkerhet på grund av deras organiska natur. Porphysomes är enzymatiskt nedbrytbara och inducerar minimal akut toxicity i möss med intravenösa doser upp till 1000 mg / kg 1. Dessutom liknar liposomer, kan den stora vatten kärna porphysomes vara passivt eller aktivt laddad med terapeutiska eller avbildningsmedel. De optiska egenskaperna och biokompatibilitet porphysomes demonstrera den multimodala potentialen av organiska nanopartiklar för BioPhotonic avbildning och terapi.

I denna uppsats presenterar vi syntesmetoden pyropheophorbide-lipid-konjugat, tillverkning och karakterisering metoden porphysomes använder högtrycks extrudering. In vivo PTT på möss bedrivs också för att visa på effektiviteten i porphysome-aktiverade PTT i tumören behandling med en subkutan xenograft tumörmodell.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Syntes av Pyropheophorbide-lipid-

  1. Kombinera 200 mmol pyropheophorbide (framställd från Spirulina Pacifica alger såsom beskrivits tidigare,... Zheng et al, Bioconj Chem, 2002, 13 -392) 4, 98,7 mg 16:00 lysophophatidylcholine (1-palmitoyl-2-hydroxi-sn-glycero -3-fosfokolin, Avanti Polar Lipids # 855675), 76,3 mg EDC, 48,7 mg DMAP (4 - (dimetylamino) pyridin) i 5 ml amylen stabiliserad kloroform till ett förhållande av 1:1:2:2 Pyro: Lipid: EDC : DMPA.
  2. Rör om reaktionsblandningen vid rumstemperatur under argon i 24 timmar. Indunsta kloroformen under reducerat tryck med användning av en rotationsindunstare under upphettning till 40 ° C. Blandningen av pyro-lipid-isomerer (pyro fästa vid sn-1 eller sn-2-position) bildas.
  3. Resuspendera pyro-lipid-isomerblandning i ett mM CaCl2, 50 mM Tris (pH 8), 0,5% Triton X-100 och 10% metanol vid en koncentration av 5 mg / ml. Lägg fosfolipas A2 (PLA2) från honungsbiet gift på0,1 mg / ml koncentration och inkubera lösningen vid 37 ° C under 24 timmar för att smälta sn-1 pyro-lipid och för att framställa den rena sn-2 pyro-lipid-isomeren.
  4. Lägg till ytterligare två volymer kloroform och 1,25 volymer av metanol, extrakt, och sedan avlägsna lösningsmedlet med hjälp av roterande indunstning vid reducerat tryck vid 40 ° C. Resuspendera spjälkningsprodukten i 1% MeOH i DCM och rena över en liten diol kiselkolonn för isomeriskt ren pyro lipid.

2. Framställning av Porphysomes

  1. Lös pyropheophorbide-lipid, distearoyl-sn-glycero-3-fosfoetanolamin-N-metoxi (polyetylenglykol) (PEG-2000-PE) och kolesterol i kloroform separat, och registrera koncentrationerna respektive.
  2. Förbered porphysome lipidfilm i en 12x75 mm borosilikat provrör med en total lipid vikt av 5 mg / rör genom att kombinera 65 molar% porfyrin-lipid, 5 mol-% PEG-2000-PE och 30 mol-% kolesterol.
  3. Torka lipidfilmer under en ström av nitroallm gas och låt dem torkades ytterligare under vakuum under en timme. Förvara lipidfilmer vid -20 ° C under argon till dess framtida hydratisering och extrudering.
  4. Tillsätt 1 ml fosfatbuffrad saltlösning (PBS, 150 mM NaCl, 10 mM fosfat, pH 7,4) till varje lipidfilm röret. Freeze provröret i flytande kväve tills den är helt fruset, och sedan tina röret i 65 ° C vattenbad tills provet har allt smält. Vortex röret under totalt 30 sekunder (3x vid 10 sekunder vardera, med 5 sek återuppvärmning i 65 ° C vattenbad i mellan varje virvling).
  5. Upprepa frysning-tining för 5 cykler eller mer vid behov tills inga stora aggregat kan iakttas i den hydratiserade lösningen. Låt porphysome fjädring på is när du är klar.
  6. Montera högtryckssträngsprutmaskin (10 ml) med två staplade 100 nm polykarbonatfilter installerade i. Anslut thermobarrel extruder till ett termostat cirkulator för 65 ° C cirkulerande vattenbad, och anslut utmatningssystemet till en kvävetank för högt trycksäker försörjning.
  7. Överför porphysome suspensionen till strängsprutningskammaren med användning av en 9 inch glas överföringspipett. Ställ in trycket genom att vrida på ratten på kvävetank regulatorn tills ett värde mellan 200 och 300 psig observeras som initial extruderingstryck. Öppna ventilen av tryckregulatorn gradvis tills tillräcklig porphysome flödeshastighet uppnås eller högst 800 psig (5440 kPa) tryck har uppnåtts.
  8. Efter den första extrudering passet är klar stänger tryckreglerventil och släpper trycket i extrudern genom att öppna övertrycksventilen på extrudern toppen. Fyll på extrudern med den färskt extruderade porphysome lösning och upprepa extrudering under åtminstone 10 gånger så att den slutliga strängsprutade lösningen är homogen.
  9. Bestäm koncentrationen av slutlig porphysome lösning genom mätning av absorptionen av ett utspätt prov i metanol genom UV-Vis-spektrometer. Beräkna koncentrationen med användning av följande ekvation with extinktionskoefficienten för 97.000 M -1 cm -1 vid 410 nm för pyropheophorbide-lipid.

Ekvation 1

  1. Mät den slutliga storleksfördelningen av porphysomes med användning av en Malvern Zetasizer ZS90 genom dynamisk ljusspridning. Späd porphysome lösning i PBS och utför tre mätningar med 15 körningar vardera för de genomsnittliga resultaten.
  2. Bestäm den fluorescensdämpning av porphysome genom att jämföra fluorescensemission av släcktes porphysome (1 mM i PBS) och odämpat porphysome (1 mM i 1% Triton X-100) med användning av Spectrofluorometer. Ta-spektra före och efter detergent (Tirton X-100) tillsätts, och normalisera signalen läser för maximal fluorescens. Ställ excitation att vara 410 nm och emissionsvåglängdsområde vara 600-800 nm.
  3. Håll porphysomes lösning under argon vid 4 ° C tills framtida användning, och skydda den från ljus genom aluminium folja.

3. Beredning av djur xenograftmodell

  1. Kultur av KB-celler i RPMI-1640 (med 10% FBS), och upprätthålla cellerna i 5% CO2 och fuktad atmosfär vid 37 ° C.
  2. Harvest KB celler med hjälp av standardcellodlingsteknik. Håll cellsuspensionen (20.000 celler / ml) i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) på is under korttidslagring tills tidpunkten för injektion.
  3. Förbered en KB xenotransplantat på nakna möss. Nakna möss köps från Charles River Laboratories när de är 20 g (Kategori # CRL: NU (NCR)-Foxn1 nu, 6-7 veckor gamla), med tanke på standarden kost och sängkläder (Harlan Laboratories, Diet: bestrålat LM-485, # 7912; Sängkläder: Corncob strö, ¼ ", # 7097). Sterilisera alla djurhanteringsverktyg (spruta, pincett, och djur pad) före experiment. Bedöva möss med 2% isofluran volym / volym i 100% syrgas bärgas. Alla djurprotokoll godkänns av institutionen (University Health Network i det här fallet) djuromsorg och användning kommittén.
  4. Injicera tumörceller suspenderade i PBS subkutant till den högra flanken av möss. Möss är klar att användas efter 10 dagar då tumören når en diameter på 4-5 mm och tjocklek på 2-3 mm.

4. In vivo fototermisk terapi

  1. Injicera porphysomes (innehållande 750 nmol pyro på 200 l volym) intravenöst via svansvenen. Genomför laserbestrålning 24 h efter injektion av porphysomes.
  2. I detta avsnitt, utföra alla procedurer i ett slutet lasersäkerhetsrummet. Bär laserskyddsglasögon under laserstrålning.
  3. Ställ upp lasern bestrålningsutrustning. Håll laserfiber och en diffusor med en klämma på ett stativ. Ställ in lasereffekten vid låg nivå och slå på lasern. Justera höjden på laserfiber för att uppnå en bestrålning yta på 9 mm i diameter (DPSS Laser, LaserGlow Technologies, Toronto, Kanada), kalibrera lasereffekt på 750 mW (1,18 W / cm 2) med hjälp av apower meter och sedan stänga av laser för att förbereda djuren.
  4. Söva djuren med 2% isofluran volym / volym i 100% syrgas bärgas genom noskon ingen sophantering uppenbart av isofluran en mänsklig hälsorisk fara). Kontrollera att djuret bedövas tillräckligt djupt genom att utföra en tå nypa med pincett eller fingrarna till djurets baktassarna. Djuren är redo för laserbestrålning, när de är okänsliga för detta förfarande.
  5. Övervaka tumören temperatur genom en infraröd värmekamera (Mikroshot, LUMASENSE Technologies). Placera kameran i närheten av tumören, fokuserar det bra och ta en pre PTT bild samt en vanlig vit-ljus bild innan PTT bestrålningstjänster startar.
  6. Sätt på lasern igen och öka ljuseffekten till 750 mW. Placera tumör i mitten av laserstråle för att få tumören helt täckta, och börja timing bestrålningen. Ta tumören temperatur bild varje 5 sekunder för en minut laserbehandling. Stäng av lasern vid en min. Stop gastillförseln på 2% isofluran, vänta tills djuret återhämtar sig från anestesi och lägger tillbaka den till buren.
  7. Håll möss vid normotermi djurrummet i 00:12 timmar mörker och ljus cykel enligt djurprotokoll som godkänts av University Health Network. Injicera buprenorfin (0,05 mg / kg, subkutant två gånger om dagen i en vecka efter det att laserstrålning för att minska smärta som orsakas av ärr. Varannan dag, mäta tumörens diameter med hjälp av ett skjutmått och ta ett foto. Beräkna tumörvolymen med hjälp av följande ekvation: V = π / 6 · a · b 2, där a är den långa diametern och b är det korta.
  8. Offrar djuren genom att sätta dem i CO 2 kammare när lång diameter för tumören når 10 mm, eftersom det är den definierade slutpunkten i vårt laboratorium. Utför halsdislokation efter CO2 behandling. Plotta överlevnadskurvan.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Pyropheophorbide konjugeras till fosfolipiden som en stabil lipid monomer (fig. 1a) och konjugerade själv montera för att bilda porphysomes genom membransträngsprutningsmetod med användning av en högtryckssprutmaskin. Det är vanligtvis svårt att extrudera porphysome-lipidsuspensionen under de tre första cyklerna av extrudering med relativt långsam flödeshastighet. När fler profiler upprepas, gradvis ökar flödet av extruderad lösning, och tryck kan minskas något om det behövs. Porphysome storlek, koncentration och utsläckning effektivitet är tre viktiga egenskaper för att karakterisera nanopartiklar direkt efter extrudering. Porphysomes med hög homogenitet storleksfördelning (topp kring 120 nm) genereras (figur 1 b och 1c) med två huvudsakliga absorbanstoppar (410 nm och 677 nm, figur 1d) och kan förbli stabil i över 12 månader när de lagras vid 4 ° C. Fluorescensen hos porfyrin släckes så hög som 99,8% vikthöna med nanostruktur är intakt (Figur 1e).

För in vivo-PTT kan värme alstras snabbt vid den laserbestrålning vid 24 h efter porphysome administration (figur 2). Porphysomes med laserstrålning orsakar temperaturen att öka med mer än 35 ° C efter 1 min av strålning, medan lasern enbart inducerar en ökning på mindre än 10 ° C. Temperaturen Det är viktigt att den slutliga tumör temperaturen når 55 ° C för att säkerställa fullständig tumör ablation. Efter PTT bestrålning, tumören oftast visar vitaktig grund av den potenta termiska effekten. Musen benet blir lite svullen vid tumörområdet för cirka 2 dagar efter PTT. Termiska ablation leder mörkt brunaktig sårskorpa på tumörer och 100% minskning av tumörvolymen. Sårskorpsbildning kan observeras tydligt vid 24 timmar efter behandling, och de gradvis återhämta sig under de följande två veckorna (Figur 3a). Använda porphysomes, subkutan tumors helt kan elimineras utan återfall (figur 3b), medan tumörer i porphysome ensam och laser ensam kontroll fortsätter att växa (figur 3b), och alla når slutpunkten i 2 veckor.

Figur 1
Figur 1. Uppbyggnad av porphysome nanovesicles och karakteriseringar. en. Schematisk representation av en pyropheophorbide-lipid porphysome. Miljarder. Motsvarande TEM bild. c.. storleksfördelning porphysomes efter högtrycks extrudering. d.. Absorbans av pyropheophorbide-lipid i metanol, normaliserad till toppen vid 410 nm. E. fluorescensemission (em) i kylda (röd streckad linje) och odämpat (blå heldragen linje) porphysomes, normaliserade till maximal fluorescens. Klicka här för att visa en större bild .

Figur 2
Figur 2. Termisk respons under PTT. En. laser inställd för transdermal ljus bestrålning. b och c.. . Temperatur av tumör vid laserbestrålning i KB tumörbärande möss vid 24 h efter injektion av porphysomes eller PBS d, Maximal tumör temperaturen under 60 sek laserbestrålning (medelvärde + / - SD för fem möss i varje grupp). klicka här för att visa en större bild .

iles/ftp_upload/50536/50536fig3highres.jpg "src =" / files/ftp_upload/50536/50536fig3.jpg "/>
Figur 3. en. Fotografier som visar terapeutiska svaret på PTT 1, däribland tre grupper: porphysomes injektion med laserstrålning, PBS-injektion med laserstrålning, och porphysomes injektion ensam. b. Genomsnittlig tumörvolymen efter varje behandling (n = 5, med * representerar p <0,0005). Klicka här för att visa en större bild .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I utvecklingen av drug delivery-teknologier, multifunktionella nanopartiklar är för närvarande under breda utredningar för exakt spårning av läkemedelsleveransfordon samtidigt som en hög läkemedelsnyttolast. Porfyrin-laddade liposomer har utvecklats för bättre farmakokinetiska egenskaper och mer effektiv leverans än direkt administrering av porfyrin, men hinder finns, däribland den begränsade last mängd porfyrin och snabb omfördelning av porfyrin från liposomer till plasmaproteiner 5,6. I motsats till konventionella liposomala leveranssystem, där fri porfyrin är införda i antingen kärnan eller lipid-dubbelskikt av liposomen, pyropheophorbide (pyro) är nu direkt och stabilt konjugerad till fosfolipiden och själv montera in liposom-liknande nanostrukturer för att bilda porphysomes . Som ett resultat uppnår porphysome tvåskiktsmembran extremt hög porfyrin packningsdensitet, vilket leder till struktur-beroende självsläckning av pyro fluorescence och hög extinktionskoefficient.

Dessa pyro lipid-konjugat själv montera in porphysomes i vatten buffert via liknande förberedelse metod för liposomer, såsom membran extrudering metod som ofta används för att generera enlamellvesiklar av väldefinierad storlek 7-9. Extruderingen börjar från en torr lipidfilm som hydratiseras i den vattenhaltiga lösningen och utsattes för flera frysnings-upptiningscykler för att bilda multilamellära vesiklar med bred storleksfördelning 10. När det hydratiserade porphysome lipidfilmen når mer än 1 mg / ml, blir manuell extrudering fysiskt krävande, så högt tryck extrudering väljs för skalas upp produktionen av porphysomes, exempelvis för djurförsök när minst 5 mg / ml porphysome krävs 8 , 9. För att uppnå ännu högre slut pyro koncentration, kan porphysome lipid-film vara beredd med högre ursprungliga beloppet. Men koncentration högre än 10 mg / ml rekommenderas inte, på grund av svårigheten attextrudering med 10 ml högtrycks extruder. Under extrudering, om flödet av den extruderade lösningen som kommer ut är extremt långsam (t.ex. 30 min / ml) till och med mycket högt tryck (≤ 800 psig för säkerhetsfråga), filtret kan ändras till en ny uppsättning, och temperatur av vattencirkulationen kan ökas från 65 ° C-75 ° C. Storlek homogenitet liposomala nanovesicles har visat sig hjälpa till att minska lever och mjälte upptag in vivo 11. Därför, för att erhålla en homogen och snäv storleksfördelning, extrudering av porphysome lipidsuspensionen genom filtermembran (100 nm) upprepas åtminstone tio gånger eller ännu mer.

Vi hittade porphysomes är mycket stabila efter extrudering vid förvaring vid 4 ° C, med obetydlig förändring i storlek eller läckande egenskaper för minst ett år i våra studier (data visas ej). Det är fortfarande rekommenderas att testa porphysome storlek och härdning effektivitet före varje djur injektionatt säkerställa porphysome intakthet.

Porphysomes är de första organiska nanopartiklar för att fungera som effektiva fototermiska förstärkare medan läkemedlet leveranskapacitet och biokompatibilitet hos konventionella liposomer underhålla. De baseras på porfyriner, som har utmärkta resultat för theranostic applikationer. 12 De har hög extinktionskoefficient jämförande till guld nanopartiklar (BNI) för snabb värmeutveckling och effektiv termisk ablation 1. In vivo-studier har visat fördelarna med porphysome aktiverade PTT som en alternativ metod till konventionell cancerbehandling. PTT är mycket enkel, med laserbehandling relativt lokaliserade till den valda bestrålning område (9 mm i diameter), och mycket kort behandlingsperiod (1 min) krävs för att uppnå tumör temperatur högre än 55 ° C i effektiv termisk ablation. Både enkelhet och hög selektivitet kan bidra till att förbättra återhämtningstiden och minska risken för komplikationer for translation terapeutiska tillämpningar. Om andra xenograft typer som har mindre tumör ackumulering än KB tumör (7,5% ID / g) används, kan högre porphysome dosen vara IV injiceras för effektiv värmeproduktion vid laserstrålning. Under bestrålningen processen är det viktigt att laserfläcken täcker hela tumörområdet och tumör Temperaturen ökas till 55 ° C eller högre för snabb och fullständig termisk ablation vid tumörer.

Studier pågår nu för att utforska den multimodal bildbehandling och terapeutiska tillämpningar av porphysomes som potenta PTT agenter i mer kliniskt relevanta djurmodeller för framtida translationell studie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Vi har inget att lämna ut.

Acknowledgments

Detta arbete stöddes av Princess Margaret Hospital Foundation, National Science and Engineering Research Council of Canada, Canadian Institute for Health Research, den kanadensiska Stiftelsen för innovation, och Joey och Toby Tanenbaum / brasiliansk Ball Chair i Prostate Cancer Research, en bevilja från SUNY Research Foundation och startstöd från University at Buffalo.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Rotary evaporator Thermo-Savant SPD131DDA
Votex Scientific Industries SI-0236 Model number: G560
High pressure extruder LIPEX, Northern Lipids Inc. T.001 10 ml Thermobarrel Extruder
Heated bath circulators (Thermostatted circulator) Thermo SCIENTIFIC SC100-S5P
Polycarbonate filters Avanti Polar Lipids 610005 Pore size 100 nm, and membrane diameter 19 mm
Zetasizer Malvern Instruments ZS90
UV/Visible Spectrophototmeter Varian Australia Cary 50 Bio UV/ Visible Spectrophotometer
Spectrofluorometer HORIBA Scientific FluoroMax-4
Transmission Electron Microscopy (TEM) Hitachi H-7000
Cell culture incubator SANYO MCO-18AIC
Powermeter Thorlabs PM100D with sensor S142C
671nm Laser LaserGlow Technologies LRS-0671_PFN-02000-05 S/N:10097270
Infrared Thermometer Mikroshot, LUMASENSE Technologies 9102409
Laser protective eye goggles LaserGlow Technologies AGF6602XX Optical Density: 1.5+ at 630-700 nm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lovell, J. F., et al. Porphysome nanovesicles generated by porphyrin bilayers for use as multimodal biophotonic contrast agents. Nat. Mater. 10, 324-332 (2011).
  2. Lovell, J. F., et al. Enzymatic regioselection for the synthesis and biodegradation of porphysome nanovesicles. Angew Chem Int Ed Engl. 51, 2429-2433 (2012).
  3. Liu, T. W., MacDonald, T. D., Shi, J., Wilson, B. C., Zheng, G. Intrinsically Copper-64-Labeled Organic Nanoparticles as Radiotracers. Angewandte Chemie. (2012).
  4. Zheng, G., et al. Low-density lipoprotein reconstituted by pyropheophorbide cholesteryl oleate as target-specific photosensitizer. Bioconjug Chem. 13, 392-396 (2002).
  5. Chen, B., Pogue, B. W., Hasan, T. Liposomal delivery of photosensitising agents. Expert Opin Drug Deliv. 2, 477-487 (2005).
  6. Jin, C. S., Zheng, G. Liposomal nanostructures for photosensitizer delivery. Lasers Surg Med. 43, 734-748 (2011).
  7. Olson, F., Hunt, C. A., Szoka, F. C., Vail, W. J., Papahadjopoulos, D. Preparation of liposomes of defined size distribution by extrusion through polycarbonate membranes. Biochim Biophys Acta. 557, 9-23 (1979).
  8. Berger, N., Sachse, A., Bender, J., Schubert, R., Brandl, M. Filter extrusion of liposomes using different devices: comparison of liposome size, encapsulation efficiency, and process characteristics. Int J Pharm. 223, 55-68 (2001).
  9. Jesorka, A., Orwar, O. Liposomes: technologies and analytical applications. Annu Rev Anal Chem (Palo Alto Calif). 1, 801-832 (2008).
  10. Lapinski, M. M., Castro-Forero, A., Greiner, A. J., Ofoli, R. Y., Blanchard, G. J. Comparison of liposomes formed by sonication and extrusion: rotational and translational diffusion of an embedded chromophore. Langmuir. 23, 11677-11683 (2007).
  11. Liu, D., Huang, L. Size Homogeneity of a Liposome Preparation is Crucial for Liposome Biodistribution In Vivo. Journal of Liposome Research. 2, 57-66 (1992).
  12. Zhang, Y., Lovell, J. F. Porphyrins as Theranostic Agents from Prehistoric to Modern Times. Theranostics. 2, 905-915 (2012).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics