ल्युकोसैट प्लेटलेट रिच आतंच, एक उपन्यास biomaterial की विशेषता

1Department of General Practice, School of Dentistry, Virginia Commonwealth University, 2Department of Biomedical Engineering, Virginia Commonwealth University, 3Department of Periodontics, School of Dentistry, Virginia Commonwealth University
Bioengineering

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Madurantakam, P., Yoganarasimha, S., Hasan, F. K. Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial. J. Vis. Exp. (103), e53221, doi:10.3791/53221 (2015).

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Abstract

Protocol

सभी रक्त-ड्राइंग प्रक्रियाओं लाइसेंस और प्रमाणित पेशेवरों द्वारा किया जाना चाहिए। अनुसंधान के लिए मानव विषयों का उपयोग संस्थागत समीक्षा बोर्ड या अन्य उपयुक्त प्राधिकारी से अनुमोदन करना शामिल है। सूचित सहमति के बारे में और भागीदार पहचान की रक्षा के लिए विशेष सावधानियों का पालन करने की आवश्यकता। इस प्रोटोकॉल में सूचीबद्ध सभी प्रयोगों मानव रक्त और / या रक्त उत्पादों और उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण की हैंडलिंग हर समय पहना जाने की जरूरत है शामिल है। अपशिष्ट Biohazard के रूप में माना जाता है और नियमों के अनुसार निपटाया जाना चाहिए।

1. venipuncture

  1. रोगी / प्रतिभागी को पहचानें और मौजूदा रिकॉर्ड के साथ की पुष्टि करें। विस्तार से अध्ययन बारे में बताएं और एक सूचित सहमति मिलता है।
  2. एक फ्लैट स्थिर सतह पर चिह्नित ट्यूबों के साथ रोगी व्यक्ति के लिए स्थापित एक ट्रे है।
  3. प्रक्रिया समझाने और समर्थित भुजा के साथ आराम से रोगी सीट बनाते हैं। रोगी है कि वह या श को सूचित करेंई एक छोटी सी चुटकी महसूस होगा और प्रक्रिया के दौरान अभी भी रहना चाहिए।
  4. एडाप्टर के लिए सुई संलग्न।
  5. हाथ धोने और दस्ताने पहनते हैं।
  6. जावक केंद्र से गाढ़ा हलकों में 70% isopropyl शराब के साथ सफाई से venipuncture के लिए कोहनी के सामने खात तैयार करें। 30 सेकंड के लिए हवा शुष्क करने के लिए साइट की अनुमति दें।
  7. टटोलने का कार्य द्वारा उचित नस को पहचानें।
  8. (अभी भी रेडियल पल्स महसूस करते हुए) यह भी तंग नहीं है सुनिश्चित करते हुए कि पंचर साइट ऊपर में बंधन 3-4 लागू करें।
  9. एक निर्बाध गति में त्वचा के लिए सुई 15-30 डिग्री के उठाव डालने से venipuncture प्रदर्शन करते हैं। सुई के माध्यम से रक्त संग्रह ट्यूब पुश और पूरे रक्त के 9 मिलीलीटर लीजिए।
  10. बंधन निकालें। सुई से ट्यूब निकालें।
  11. सुई वापस लेने और सुई को हटाने के लिए पहले पंचर साइट पर धुंध वर्ग लागू होते हैं। एक उपयुक्त biohazard कंटेनर में सुई फेकें।
  12. जनसंपर्क बनाए रखने के लिए रोगी पूछोपंचर साइट पर essure।
  13. नलियों लेबल
  14. रक्तस्राव बंद कर दिया गया है यह सुनिश्चित करने की पंचर साइट की जाँच करें।
  15. रोगी (कोई दर्द, सूजन या प्रकाश headedness) ठीक महसूस कर रही है, पूछना अगर धुंध वर्ग पर चिपकने वाली पट्टी या टेप लागू
  16. का निर्वहन करने से पहले रोगी / भागीदार धन्यवाद।

2. एल पीआरएफ तैयारी

  1. तुरंत लाल सबसे ऊपर सूखी ग्लास ट्यूब में शिरापरक रक्त संग्रह के बाद, अपकेंद्रित्र में जगह है।
  2. एक उचित काउंटर संतुलन रखने के बाद आरटी पर 12 मिनट के लिए 400 XG पर अपकेंद्रित्र।
  3. चक्र के अंत में ट्यूब निकालें। प्लेटलेट गरीब प्लाज्मा (पीपीपी), प्लेटलेट से भरपूर आतंच (एल पीआरएफ) और आरबीसी आधार (चित्रा 1): तीन परतों पर ध्यान दें।
  4. एक विंदुक का उपयोग पीपीपी Aspirate। का प्रयोग चिमटी धीरे एल पीआरएफ बाहर खींचने के लिए और एक बाँझ, छिद्रित धातु जाल में जगह है।
  5. शल्य छुरी का प्रयोग, ध्यान शौकीन छोड़ने आरबीसी परत के थोक परिमार्जनY कोट बरकरार।
  6. धीरे 30 सेकंड के लिए (बाँझ धातु की थाली, अनुमानित वजन 225 ग्राम का उपयोग) एल पीआरएफ थक्का सेक। प्लेटलेट गरीब प्लाज्मा बाहर निचोड़ा किया जाएगा।
  7. थाली निकालें और धीरे एल पीआरएफ झिल्ली उठा। एल पीआरएफ झिल्ली 12 प्रयोगों में इस्तेमाल के लिए तैयार है।

3. अक्षीय तनन परीक्षण

  1. से निपटने में आसानी के लिए एक फिल्टर पेपर पर प्लेस एल पीआरएफ झिल्ली (एन = 6) और (7.5 मिमी की एक लाइन की लंबाई के साथ उनकी संकीर्ण बिंदु पर विस्तृत 2.75 मिमी) कस्टम निर्मित धातु मर जाता है का उपयोग कर "कुत्ते हड्डियों" में पंच।
  2. तीन स्थानों पर प्रत्येक नमूने की मोटाई मापने और औसत ले।
  3. ध्यान से एक अक्षीय परीक्षण प्रणाली के जबड़े पकड़ती के केंद्र में एल पीआरएफ झिल्ली संलग्न हैं।
  4. ध्यान एल पीआरएफ झिल्ली को बेनकाब करने के filer कागज समर्थन आंसू।
  5. कार्यक्रम साधन चल सिर एक स्थिर दर (10.0 मिमी / मिनट) पर काम कर रही है ताकि जब एल प्रयोग शुरूपीआरएफ अभी भी गीला है।
  6. अक्षीय टेस्टिंग सिस्टम के साथ सॉफ्टवेयर से तोड़ने में, तोड़ने के लिए ऊर्जा, और तनाव लोचदार मापांक रिकॉर्ड। इन मूल्यों को स्वचालित रूप से गणना कर रहे हैं और कोई भी उपयोगकर्ता परिभाषित इनपुट की आवश्यकता है। चित्रा 3 देखें।

4. सिवनी अवधारण शक्ति

  1. प्लेस एल पीआरएफ से निपटने में आसानी के लिए एक फिल्टर पेपर पर झिल्ली (एन = 3) और एक शल्य छुरी का उपयोग कर मापने आयताकार नमूने (10 मिमी x 25 मिमी) में कटौती।
  2. प्रत्येक नमूना (3 का औसत) की मोटाई मापने।
  3. स्टेनलेस स्टील orthodontic संयुक्ताक्षर तार (व्यास में 220 माइक्रोन) का उपयोग नमूना के केंद्र में एक पिनहोल बनाओ।
  4. एक पाश फार्म और तनन परीक्षण मशीन को ठीक करने के लिए पिनहोल के माध्यम से संयुक्ताक्षर तार गुजरती हैं। निचले जबड़े की पकड़ से 13 एल पीआरएफ झिल्ली के किनारे रखें।
  5. जंगम सिर एक स्थिर दर (10 मिमी / मिनट) और शुरू में काम कर रही है कि इतने साधन कार्यक्रमप्रयोग।
  6. अक्षीय टेस्टिंग सिस्टम के साथ सॉफ्टवेयर से तोड़ने में, तोड़ने के लिए ऊर्जा, और तनाव लोचदार मापांक रिकॉर्ड। इन मूल्यों को स्वचालित रूप से गणना कर रहे हैं और कोई भी उपयोगकर्ता परिभाषित इनपुट की आवश्यकता है। चित्रा 3 देखें।

5. रूपात्मक परीक्षा

  1. एक 10 मिमी त्वचीय बायोप्सी पंच का उपयोग SEM परीक्षा के लिए एल पीआरएफ नमूने तैयार है और एक 24 अच्छी तरह से थाली में उन्हें जगह है।
  2. पीबीएस के साथ नमूनों को धो लें और 20 मिनट के लिए (पीबीएस) में 2.5% glutaraldehyde के साथ तय कर लो।
  3. क्रमिक रूप से 5 मिनट प्रत्येक के लिए इथेनॉल की सांद्रता (50%, 70%, 80%, 90% और 100%) बढ़ाने में विसर्जन के द्वारा नमूनों निर्जलीकरण।
  4. 5 मिनट के लिए 100% HMDS (Hexamethyldisilazane) के 0.5 मिलीलीटर के साथ समझो। HMDS 14 अतिरिक्त हटाने के लिए हे / एन Aerate।
  5. एक दो तरफा टेप का उपयोग स्टब्स पर माउंट नमूने, 70 सेकंड के लिए प्लैटिनम कोट धूम है और एक एसेल परिचालन पर एक स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप से जांचeration 20 केवी की वोल्टेज (या उपयुक्त सेटिंग)।

एल पीआरएफ, trypsin संवेदनशीलता और Ninhydrin परख के 6. Genipin Crosslinking

  1. Genipin पार से जुड़े एल पीआरएफ तैयार करने के लिए, पीबीएस के साथ झिल्ली कुल्ला और 48 घंटे के लिए (70% इथेनॉल में) 1% genipin समाधान के 4 मिलीलीटर में भिगो दें। अतिरिक्त genipin 15, 16 को दूर करने के प्रयोगों के लिए पहले पीबीएस के साथ कुल्ला।
  2. ट्रिप्सिन द्वारा क्षरण करने के लिए अपने प्रतिरोध द्वारा एल पीआरएफ की genipin तिर्यक की स्थिरता का आकलन करें। प्लेस एल पीआरएफ झिल्ली (एन = 3) और 0.01% trypsin के 500 μl में Crosslinked एल पीआरएफ genipin और trypsin के एक दैनिक परिवर्तन के साथ 3 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर incubated।
    1. शुरू में जोखिम और 3 दिन में अंतर एंजाइम और वजन एंजाइमी गिरावट 17 प्रतिनिधित्व समाप्त करने के लिए 1 दिन पहले कम से नमूने वजन।
  3. परख ninhydrin द्वारा genipin इलाज किया एल पीआरएफ (जी पीआरएफ) में पार से जोड़ने की राशि यों। पहली मानक curv तैयारई ग्लाइसिन का उपयोग कर (1 मिमी-0.031 मिमी) वक्र मुक्त अमीनो एसिड एकाग्रता (एफएए) और absorbance के बीच संबंध स्थापित करने के लिए।
    1. 2% से 1 मिलीलीटर के साथ हीट पीआरएफ नमूने (डब्ल्यू / वी) 100 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए ninhydrin।
    2. समाधान आरटी के लिए शांत और 50% इथेनॉल के 1.5 मिलीलीटर जोड़ने की अनुमति दें।
    3. एक उपयुक्त स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग कर 570 एनएम पर absorbance का विश्लेषण करें।
    4. 15 से नीचे सूत्र का उपयोग कर पार से जोड़ने प्रतिशत निर्धारित

1 समीकरण

7. एमटीएस सेल प्रसार परख

  1. एक 80% मिला हुआ monolayer प्राप्त किया जाता है जब तक टी -75 बोतल में न्यूनतम आवश्यक मध्यम -alpha संशोधन (αMEM) में MC3T3 (माउस calvarial preosteoblasts) आगे बढ़ें।
  2. ताजा, बाँझ एल पीआरएफ झिल्ली (सेल संस्कृति हुड के अंदर एल पीआरएफ ट्यूब खोलने के लिए) तैयार है और एक नया सेल संस्कृति डिश पर झिल्ली हस्तांतरण।
  3. महाप्राण कुप्पी से मीडिया और पीबीएस के साथ monolayer कुल्ला 5 मिलीलीटर 0.05% trypsin जोड़ें और 5 मिनट के लिए 37 सी इनक्यूबेटर में कुप्पी जगह, 5 के लिए 400 XG पर एक अपकेंद्रित्र ट्यूब अपकेंद्रित्र में कुप्पी की सामग्री पिपेट मि।
  4. धीरे सतह पर तैरनेवाला छानना सेल गोली तोड़ने के लिए ट्यूब नल और ताजा α सदस्य के 4 मिलीलीटर के साथ फिर से निलंबित, hemocytometer में सेल निलंबन (50 μl) और trypan नीले (50 μl) का एक मिश्रण बांटना और की संख्या गिनती कोशिकाओं
  5. बीज झिल्ली के भीतर कोशिकाओं को बनाए रखने के लिए एल पीआरएफ झिल्ली के शीर्ष पर रखा 10 मिमी कांच क्लोनिंग के छल्ले के भीतर 4x10 5 कोशिकाओं (छल्ले 24 घंटे के बाद हटाया जा सकता है)।
  6. 4 दिन में 10 मिनट के लिए पीबीएस तीन बार के साथ निर्माणों कुल्ला।
  7. अच्छी तरह से प्रत्येक के लिए सीरम मुक्त मीडिया और 200 μl एमटीएस अभिकर्मक के 1 मिलीलीटर जोड़ें और 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए सेते हैं।
  8. 490 एनएम पर 200 μl aliquots से absorbance के उपाय।

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Representative Results

(शीर्ष, मध्य और नीचे) परत चित्रा 2 में सचित्र है विभिन्न वर्गों में एल पीआरएफ थक्का की स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप छवि। के रूप में देखा जा सकता है, शीर्ष भाग कोई कोशिकाओं के साथ मुख्य रूप से आतंच नेटवर्क से बना है। मध्यम परत उनकी सक्रियता और degranulation के सबूत के साथ प्लेटलेट्स से समृद्ध है। निचली परत ल्यूकोसाइट्स और एक आतंच मैट्रिक्स के भीतर फँस लाल रक्त कोशिकाओं का एक मिश्रण है।

अक्षीय तनन परीक्षण और सिवनी प्रतिधारण शक्ति परीक्षण: यांत्रिक गुणों दो मोड में मूल्यांकन किया गया। परिणाम एल पीआरएफ के viscoelastic व्यवहार प्रदर्शित करता है। लोचदार मापांक (0.47 एमपीए) कम है, भले ही झिल्ली कठिन (5 एन · मिमी तोड़ने के लिए ऊर्जा) है और महत्वपूर्ण विरूपण (217%, चित्रा 3) के दौर से गुजर करने में सक्षम है। सीवन प्रतिधारण परीक्षण से डाटा, झिल्ली की क्षमता का सूचक ऊतकों को sutured किया जाना है, एक काफी कठिन एक सुझावएन डी विरूप्य सामग्री (मापांक-0.2 एमपीए, तनाव-140% और ऊर्जा तोड़ 3.2 N.mm) एल पीआरएफ में (चित्रा 4)।

पुनर्योजी चिकित्सा में आतंच उत्पादों की सीमाओं में से एक अपनी छोटी जैविक जीवन है। अंतर्जात आतंच से बनाया गया था, एल पीआरएफ गिरावट एंजाइम की संभावना है और फाइब्रिनोलयन आए। एल पीआरएफ के प्रतिरोध का मूल्यांकन करने के लिए आदेश में गिरावट की मध्यस्थता एंजाइम को ताजा एल पीआरएफ 37 सी पर trypsin उपचार (0.01%) के अधीन है और incubated था हम तीन दिनों के भीतर एल पीआरएफ की पूरी गिरावट मनाया। एल पीआरएफ झिल्ली के Genipin तिर्यक लगभग 60% (चित्रा 5) से गिरावट में कमी आई है।

सेल के विकास का समर्थन करने के लिए एल पीआरएफ झिल्ली की क्षमता Crosslinked और uncrosslinked झिल्ली पर माउस calvarial अस्थिकोरक संवर्धन द्वारा मूल्यांकन किया गया था। Genipin crosslinked झिल्ली उनकी संरचना को बनाए रखा और ग समर्थित जबकि uncrosslinked थक्के विभिन्न स्तरों को गिरावट कराना पड़ापक्ष विकास (चित्रा 6)।

चित्र 1
एल पीआरएफ की पीढ़ी में चित्रा 1. कदम। (ए) एक ग्लास ट्यूब में पूरे रक्त की centrifugation के बाद, तीन परतों दिखाई जाएगी। (बी) पीपीपी decanting के बाद, एल पीआरएफ एक बाँझ चिमटी का उपयोग कर हटाया जा रहा है । (सी) लाल रक्त कोशिका का आधार एक छुरी का उपयोग बंद scraped और एक छिद्रित धातु ट्रे (डी) पर रखी जा रही है। कोमल संपीड़न के बाद पीपीपी बाहर निचोड़ा जाता है और एक फर्म एल पीआरएफ झिल्ली बनाई है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
SEM ताजा एल पीआरएफ की विभिन्न परतों की छवि (ए) आतंच अमीर परत का प्रतिनिधित्व 2.;। (बी) के सक्रियण के विभिन्न डिग्री के साथ समृद्ध प्लेटलेट्स की एक क्षेत्र है, (ग) कई ल्यूकोसाइट्स साथ buffy कोट है और (डी) लाल रक्त कोशिका की जाती है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा अक्षीय तनन परीक्षण मोड (ए) और सिवनी प्रतिधारण ताकत (बी) में एल पीआरएफ की यांत्रिक लोड हो रहा निम्नलिखित 3. तनाव तनाव घटता है। प्रत्येक नमूने की लोडिंग पैटर्न अलग रंग में प्रतिनिधित्व किया है। अक्षीय तनन परीक्षण डेटा (ए) एक कम मापांक से संकेत मिलता है, एक बड़े लोचदार विरूपण और एक तेजी से विफलता। एक सिवनी (बी) द्वारा बढ़ाव पर, एल पीआरएफ एक कठिन है कि झिल्ली (वक्र के अंतर्गत क्षेत्र) के साथ ही लचकदार प्रतिनिधित्व करता है। डेटा का अच्छा क्लस्टरिंग नमूनों के बीच कम से कम भिन्नता चलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा सीवन प्रतिधारण शक्ति परीक्षण में वास्तविक विफलता की 4. फोटो। एक 220 माइक्रोन मोटी स्टेनलेस स्टील orthodontic संयुक्ताक्षर तार एल पीआरएफ के बीच के माध्यम से पारित कर दिया और तनन परीक्षण मशीन के ऊपरी जबड़े सदस्य से बंधा था। दूसरे छोर कम पकड़ से जुड़ी है और एक स्थिर दर पर बढ़ाया गया था। एल पीआरएफ के उत्कृष्ट लचीलापन, सुझाव झिल्ली और आंसू लिए अपने प्रतिरोध का बढ़ाव पर ध्यान दें।ओम / फ़ाइलें / ftp_upload / 53221 / 53221fig4large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
Genipin-Crosslinked एल पीआरएफ 60% अधिक स्थिर थे, जबकि 0.01% trypsin में ऊष्मायन के बाद एल पीआरएफ झिल्ली की चित्रा 5. गिरावट। सभी एल पीआरएफ झिल्ली 3 दिन के भीतर ट्रिप्सिन में पूरी तरह से बिखर गया। इस विवो में रखा जब रासायनिक crosslinking एल पीआरएफ झिल्ली की लंबी उम्र में सुधार करने के लिए एक व्यवहार्य रणनीति हो सकती है कि पता चलता है।

चित्रा 6
सेल व्यवहार्यता पर एल पीआरएफ crosslinking की चित्रा 6 प्रभाव। Uncrosslinked एल पीआरएफ (ए) पर MC3T3 कोशिकाओं, genipin-crosslinked एल पीआरएफ (बी) के एक से 4 दिन संस्कृति के प्रतिनिधि छवियोंएन डी टिशू कल्चर प्लास्टिक (सी)। Uncrosslinked एल पीआरएफ चर हद तक संस्कृति में अपमानित और प्लास्टिक के समान सेल गतिविधि दिखाया। Genipin Crosslinked एल पीआरएफ उनकी संरचना को बनाए रखा और मजबूत सेल अस्तित्व का समर्थन किया। सही तीन प्रतिकृति के साथ स्वतंत्र प्रयोगों से मात्रा निर्धारित डेटा (+ एसडी) है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

ऑटोलॉगस प्लेटलेट केंद्रित है, क्योंकि विकास के कारकों की बहुतायत के पुनर्योजी दवा 18 के क्षेत्र में वादा कर रहे हैं। हालांकि, इन तैयारियों अक्सर सर्जिकल हेरफेर बहुत कठिन बना देता है कि एक परिभाषित संरचना का अभाव है। कई बार, निलंबन और जैल अप्रत्याशित परिणामों में जिसके परिणामस्वरूप, प्रसव के स्थल पर प्रभावी ढंग से नहीं रखे हैं। एल पीआरएफ प्लेटलेट के विकास में एक बड़ी अग्रिम यह अनिवार्य रूप से फँस प्लेटलेट्स के साथ एक फर्म आतंच झिल्ली है कि में केंद्रित प्रतिनिधित्व करता है। ये ठोस झिल्ली उत्कृष्ट हैंडलिंग विशेषताओं के अधिकारी, और सुरक्षित रूप से खुला सर्जरी के दौरान एक anatomically इच्छित स्थान पर sutured जा सकता है। हालांकि, इसकी शारीरिक और जैविक गुणों अपेक्षाकृत अनजान हैं।

ऊपर वर्णित चरणों का कड़ाई (चित्रा 1) का पालन कर रहे हैं जब एल पीआरएफ लगातार बनेगी। एक अच्छा एल पीआरएफ झिल्ली पैदा करने में महत्वपूर्ण कारणों में से एक ती हैतुम मुझे खून ड्रॉ और centrifugation के बीच में देरी। एल पीआरएफ तकनीक की सफलता पूरी तरह से आम तौर पर एक मिनट के भीतर, सेंट्रीफ्यूज से 19 रक्त संग्रह और तत्काल हस्तांतरण की गति पर निर्भर करता है। यह रक्त कटाई लंबे समय तक और समरूप नहीं है, तो (अपने विशेष सेल सामग्री, मैट्रिक्स वास्तुकला और विकास के कारक रिहाई प्रोफाइल के साथ) एक अच्छी तरह से संरचित एल पीआरएफ थक्का उत्पन्न करने के लिए असंभव है; अज्ञात सामग्री के साथ आतंच के एक छोटे से बेतुका, नाज़ुक बड़े पैमाने पर करने के बजाय का गठन किया है।

यह कोशिकाओं और बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के बीच mechanobiological बातचीत प्रवास, प्रसार और भेदभाव 20,21 सहित सेल व्यवहार के सभी पहलुओं में एक महत्वपूर्ण प्रभाव है कि स्वीकार किया गया है। एल पीआरएफ, खून का थक्का का एक अनूठा प्रकार, विशेष परिस्थितियों के तहत गठित किया गया है और आतंच की जटिल, शाखायुक्त नेटवर्क के शामिल है। उपचार के दौरान कार्यात्मक ऊतकों में खत्म कर दिया गया है कि एक अनंतिम ईसीएम के रूप में एल पीआरएफ कार्य करता है। मीटर के लिए किए जाechanical बलों, सफल उपचार के परिणामों एल पीआरएफ और इसलिए उनके भौतिक गुणों का वर्णन के संरचनात्मक अखंडता पर निर्भर कर रहे हैं महत्वपूर्ण है। हम एक अक्षीय तन्यता परीक्षण (आंतरिक गुण सामग्री की पहचान करने के लिए) और ताजा एल पीआरएफ पर सीवन प्रतिधारण परीक्षण (विफलता विशेषताओं की पहचान करने के लिए) का प्रदर्शन किया। पीआरपी जेल या एक परिभाषित संरचनाओं के पास नहीं है कि पका हुआ खून के विपरीत, एल पीआरएफ बेहतर हैंडलिंग विशेषताओं के साथ घने संयोजी ऊतक जैसा दिखता है। हम एल पीआरएफ झिल्ली के लिए 0.470 एमपीए (एसडी = 0.107) की एक लोचदार मापांक रिपोर्ट और विफलता (215% का तनाव) से पहले दो बार अपनी प्रारंभिक लंबाई खिंचाव। तोड़ने से पहले कम कठोरता (1-10 एमपीए) और (150% तक) के उच्च तनाव जो रिपोर्ट प्रकाशित साहित्य 22,23 के साथ इन आंकड़ों मैच। मूल्यों में अंतर ऊपर उल्लेख अध्ययन में एकल आतंच फाइबर की AFM के विश्लेषण के उपयोग की तुलना में आतंच नेटवर्क के उपयोग के कारण हो सकता है।

सिवनी प्रतिधारण ताकत एक शल्य चिकित्सा हैमहत्वपूर्ण भ्रष्टाचार सामग्री के पैरामीटर और यह भ्रष्टाचार से सिवनी खींच या भ्रष्टाचार की दीवार के कारण विफल करने के लिए आवश्यक शक्ति के रूप में परिभाषित किया गया है। हमारे प्रयोगों सीधे-पार प्रक्रिया (एएनएसआई 24 द्वारा परिभाषित के रूप में) का इस्तेमाल किया। के लिए आवश्यक बल 3.23 N.mm (एसडी = 0.329) के एल पीआरएफ के माध्यम से संयुक्ताक्षर तार खींच। कुल मिलाकर, हम एल पीआरएफ भार और तनाव पर ज्यादा के रूप में दो बार खिंचाव करने की क्षमता का समर्थन करने में सक्षम है, यंत्रवत् मुश्किल हो पाया है और काफी अच्छी तरह से टांके बरकरार रखे हुए है (फाड़ से पहले काफी विकृत)।

स्थिरता और जैविक वातावरण में एल पीआरएफ की संरचनात्मक अखंडता की कमी ऊतक इंजीनियरिंग में इसके उपयोग में एक प्रमुख सीमा है। हम रासायनिक genipin का उपयोग कर एल पीआरएफ crosslinking द्वारा इस मुद्दे के समाधान की मांग की। विषाक्तता के साथ जुड़ा हुआ है जो gluteraldehyde के विपरीत, genipin कम cytotoxicity के साथ एक स्वाभाविक रूप से biodegradable अणु है। Genipin उपचार के बाद, झिल्ली ट्रिप्सिन और suppo में काफी स्थिर थे4 दिनों में सेल प्रसार rted। हालांकि, एल पीआरएफ का केवल 20% genipin साथ crosslinked गया था (ninhydrin परख द्वारा निर्धारित)। इस डेटा रासायनिक crosslinking एक व्यवहार्य रणनीति है, जबकि अन्य विकल्पों का पता लगाया जा करने की जरूरत है कि पता चलता है।

ऑटोलॉगस रक्त से उम्मीद के मुताबिक तैयारी, प्रोटोकॉल की सादगी, परिभाषित वास्तुकला, प्रभावशाली यांत्रिक गुणों और सक्रिय प्लेटलेट्स से वृद्धि कारकों की बहुतायत: इन निष्कर्षों के आधार पर यह एल पीआरएफ अद्वितीय विशेषताओं के साथ एक उपन्यास biomaterial है कि स्पष्ट है। रक्त विरोधी coagulants, बहिर्जात थ्रोम्बिन और कैल्शियम क्लोराइड के लिए कोई जोखिम के साथ शारीरिक शर्तों के तहत थक्का करने के लिए अनुमति दी है। इन विशेषताओं के सभी एल पीआरएफ पुनर्योजी चिकित्सा में अनुप्रयोगों के लिए biomaterial का वादा करते हैं।

एल पीआरएफ के आवेदन में से निपटने के लिए नैदानिक ​​मुद्दों में से एक प्लेटलेट्स और रक्त घटकों की गुणवत्ता में विविधता है। वर्तमान में, बहुत कम के बारे में समझा जाता हैएल पीआरएफ रक्त के थक्के (हेपरिन, warfarin या प्लेटलेट अवरोधकों) को प्रभावित करने वाली दवाओं पर जमावट विकारों या मरीजों के साथ रोगियों से उत्पन्न। इन सवालों के जवाब निस्संदेह चिकित्सा के बारे में हमारी समझ में सुधार के साथ-साथ व्यक्तिगत चिकित्सा के क्षेत्र को आगे बढ़ाने के लिए योगदान देगा।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है और इस प्रकाशन के साथ जुड़े हित का कोई ज्ञात संघर्ष कर रहे हैं कि इस बात की पुष्टि।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle 19G BD 305186
Needle Disposal Container Fisherbrand 14-827-122
Red-Topped Glass Collection Tube BD 8020129
Gauze Pads Tyco 5750
Bandage Johnson & Johnson 5005989
Surshield Terumo SV*S19BL Safety winged infusion set
Blood Collection Assembly BD 303380
Tourniquets BD 367203
Brand Luer Adapter Vacutainer L42179
Intra-Spin System  Intra-Lock International ISS110 Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit 
Pipettes (Serological & Micro) Corning
Scalpel Exelint 29552
MTS Bionix 200 MTS Systems Corporation Material testing systems
MTS Test Works 4 MTS Systems Corporation
Whatman Filter Paper Whatman 1004 070
SS Orthodontic ligature wire Patterson Dental 628-4228
200 Proof Ethanol Koptec V1001
Hexamethyldisilazane (HMDS) Aldrich 440191
Aluminium Mounting Stubs Ted Pella 16324
Double Sided Carbon Tape PELCO Tabs 16084-1
Scanning Electron Microscope JEOL LV 5610
Trypsin HyClone SH30042.01
Cell Culture Incubator Thermo Fisher Scientific Inc 51026282
Antibiotic-Antimicotic Gibco 15240-062
Genipin Wako 078-03021
Cell Culture Media Gibco 12000-022 Minimum Essential Medium-Alpha
MTS Reagent Promega G1118
PMS Reagent Sigma P9625
Spectrophotometer BioTek Epoch Spectrophotometer
10mm Glass Cloning Rings Corning 3166-10
T-75 Flask Corning 430641
DPBS Corning 55-031-PB
Ninhydrin 98% Aldrich 454044
24 Well Plate Corning 3987
Biopsy Punch Acu Punch P1025
Digital Micrometer Pittsburgh 68305
Glutaraldehyde Sigma G6257
12 Well Plate Corning 3336
96 Well Plate Corning 3596

DOWNLOAD MATERIALS LIST

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