Flere Bioluminescent og Positronic-utslipp tomografi/beregningsorientert tomografi avbilding av myelom benmarg Xenografts i NOG mus

Cancer Research

Your institution must subscribe to JoVE's Cancer Research section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Her bruker vi bioluminescent, røntgen, og fantes et positron-utslipp tomografi/beregnet tomografi tenkelig å studere hvordan hemme mTOR aktivitet påvirker benmargen-engrafted myelom svulster i en xenograft modell. Dette gir fysiologisk relevante, ikke-invasiv og flere analyser av anti-myelom effekten av terapier målretting benmarg-engrafted myelom svulster i vivo.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Gastelum, G., Chang, E. Y., Shackleford, D., Bernthal, N., Kraut, J., Francis, K., Smutko, V., Frost, P. Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice. J. Vis. Exp. (143), e58056, doi:10.3791/58056 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Myelom (MM) svulster engraft i beinmargen (BM) og deres overlevelse og progresjon er avhengig av komplekse mobilnettet og molekylære interaksjoner som finnes i denne microenvironment. Ennå kan ikke BM-microenvironment være lett replikert i vitro, som potensielt begrenser fysiologiske relevansen av mange i vitro og ex vivo eksperimentelle modeller. Disse problemene kan overvinnes ved å benytte en xenograft modell som luciferase (LUC)-transfekterte 8226 MM celler vil spesielt engraft i musen skjelettet. Når disse musene er gitt riktige underlaget, kan D-luciferin, effekter av terapi på tumor vekst og overlevelse analyseres ved å måle endringer i bioluminescent bilder (BLI) produsert av svulster i vivo. Opplysningene BLI kombinert med positronic-utslipp tomografi/beregningsorientert tomografi (PET/CT) analyse ved hjelp av metabolske markøren 2-deoxy - 2-(18F) fluoro-D-glukose (18F-FDG) brukes til å overvåke endringer i svulst metabolisme over tid. Disse tenkelig plattformene tillate flere noninvasive målinger i svulst/BM-microenvironment.

Introduction

MM er en uhelbredelig sykdom består av ondartet plasma B-celler som infiltrere BM og forårsake bein ødeleggelse, anemi, nedsatt nyrefunksjon og infeksjon. MM opp 10% - 15% av alle Hematologisk malignitet1 og er den vanligste kreften å involvere skjelett2. Utviklingen av MM stammer fra kreftfremkallende transformasjonen av lang levetid plasma celler som er etablert i germinal sentre i lymfoide vev før slutt homing til BM3. BM er preget av svært heterogen nisjene; inkludert varierte og kritiske cellulære komponenter, lav pO2 (hypoksi), omfattende endometrial blodkar, komplekse ekstracellulære matriser og cytokin og vekst faktor-nettverk, som bidrar til MM tumorgenesis4. Dermed vil utvikling av spres MM xenograft modell preget av svulster som er strengt engrafted i BM være en svært kraftig og klinisk relevante verktøy å studere MM patologi av vivo5,6. Men kan mange tekniske hindringer begrense effektiviteten av de fleste xenograft modeller, noe som gjør dem dyrt og vanskelig å bruke. Dette omfatter problemer forbundet med konsekvent og reproduserbar svulst engraftment innen BM nisje, lengre tid å tumor utvikling og begrensninger i muligheten til å direkte observere og måle endringer av tumor vekst/overlevelse uten å ofre mus i løpet av eksperimentet7,8.

Denne protokollen bruker en modifisert xenograft-modellen som opprinnelig ble utviklet av Miyakawa et al. 9, som gir en intravenøs (IV) utfordring med myelom celler "spredt" svulster som konsekvent og reproduserbar engraft i BM av NOD/SCID/IL-2γ(null) (NOG) mus10. I situ visualisering av disse svulstene oppnås ved den stabile transfection av 8226 menneskelige MM celle linje med en LUC allelet og serielt måler endringene i BLI produsert av disse engrafted tumor celler6. Viktigere, kan denne modellen utvides for å benytte ulike andre LUC-uttrykke menneskelige MM linjer (f.eksU266 og OPM2) med en lignende tilbøyelighet til å spesifikt engraft i skjelettet NOG mus. Identifikasjon av tumorer av bioluminescent bildebehandling av mus etterfølges av måle opptaket av radiopharmaceutical sonder (for eksempel 18F-FDG) av PET/CT sammen, gir dette ekstra karakteristikk av viktige biokjemiske veier (dvs., endringer i metabolisme og endringer i hypoksi induksjon av apoptose) i svulst/BM-microenvironment. De store styrkene til denne modellen kan bli markert av tilgjengeligheten av en rekke radiolabeled, bioluminescent og fluorescerende prober og dataindikatorer som kan brukes til å studere MM progresjon og patologi i vivo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle dyr fremgangsmåtene nedenfor ble godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC) av større Los Angeles VA helsetjenester og ble utført under sterile og patogen-gratis forhold.

1. forberedelse av Luciferase-uttrykke 8226 celler (8226-LUC)

  1. Opprettholde menneskelige MM celle linjen, 8226, RPMI-1640 medium med 10% fosterets bovin serum (FBS) og 1% penicillin-streptomycin på 37 ° C i en fuktet atmosfære som inneholder 95% luft og 5% karbondioksid (CO2).
  2. Generere stabil LUC-uttrykke reporter 8226 celler av transfecting 1 x 106 8226 celler med en luciferase reporter vektor etterfulgt av et utvalg med hygromycin (100-350 mg/mL) som tidligere beskrevet6.
  3. Opprettholde cellene i sterilt dyrking standardvilkår for 2-3 uker, endre mediet annenhver dag, før etableringen av et stabilt transfekterte 8226 celle linje har blitt generert.
  4. Bekrefte luciferase i vitro aktiviteten i 1 x 106 transfekterte celler/100 µL fosfat bufret saltoppløsning (PBS) ved å legge luciferase underlaget, D-luciferin (150 µg/mL fungerende løsning i prewarmed kultur medium), og den bioluminesens av cellene i et reagensrør eller 96-brønns tallerken med en luminometer6.

2. Orthotopic Xenograft modell

  1. Opprettholde NOG mus (4-6 uker gamle, mann eller kvinne) under sterilt patogen-fri forhold i en passende dyr pleie-anlegget.
  2. Forberede 8226 LUC-transfekterte cellene IV injeksjon i NOG mus (~ 5 x 106 celler/mus) på dagen av eksperimentet. Vask cellene 3 x i iskalde PBS, telle dem og resuspend dem i iskalde PBS (minus antibiotika og FBS) i en siste konsentrasjon av 5 x 106 celler/200 µL av PBS) i et sterilt reagensrør. Holde cellene på is og utfordre musene så snart som mulig (innen 30-120 min).
  3. Bedøve musen (med isoflurane, 1-3% i luften på 0,5 - 1 L/min) og plassere dyret i supine posisjon på en heten pute med hodet vendt bort. Kontrollere nivået av anesthetization ved pinching tåen. Bruke ophthalmica salve på øynene.
  4. Sette inn 8226-LUC cellene i musene gjennom halen venen (200 µL/injeksjon) ved hjelp av en 1 mL insulinsprøyte og en 26-G nål.
    Merk: En varmelampe kan brukes til å varme halen, og dermed strekke venen og øke effekten av injeksjoner.
  5. Returnere dyret til deres hjem bur og overvåke dyrene før de er helt friske.
  6. Bekrefte engraftment 8226-LUC celler i musen skjelettet ved å måle BLI i bedøvet mus (beskrevet nedenfor og vist i figur 1A).
    Merk: BM eksudater kan også være farget for menneskelig CD45 uttrykk med flowcytometri (figur 1B) eller av immunhistokjemi av høstet bein (figur 1 c).

3. måling av BLI i Vivo

Merk: Vanligvis målbare BLI fra engrafted svulster i mus kan observeres første mellom 10-20 dager postchallenge, men dette må bestemmes eksperimentelt.

  1. Bedøve musen (med isoflurane, 1-3% i luften på 0,5 - 1 L/min) og kontrollere nivået av anesthetization ved pinching tåen. Bruke ophthalmica salve på øynene.
  2. Gi dyret IP injeksjon (200 µL/injeksjon) av "i vivo-grade" D-luciferin substrat (30 mg/mL fortynnet i sterilt saltvann).
  3. Måle BLI innen 5-10 min, etter injeksjon av luciferin underlaget (selv om BLI aktiviteten kan være observerbare i mus i opp til 45-60 minutter), ved å plassere bedøvet dyret i supine posisjon i en liten-dyr tenkelig system (figur 2 ). Velg selvlysende og X-ray analyse og hente bilder (Figur 3).
    1. Måle den gjennomsnittlige utstråling (fotoner/s/cm2/steradian) i utvalgte regioner av interesse (ROIs) ved hjelp av bildebehandlingsprogramvare (Figur 4).
    2. Returnere dyret til buret sitt hjem og overvåke det før det er helt gjenopprettet (ca 15-20 min).

4. behandling av mus med målrettet terapi

  1. Måle grunnlinjen BLI og tilfeldig dyrene i behandlingsgrupper (4-8 mus/gruppe).
  2. Behandle mus med en IP-injeksjon (200 µL/injeksjon) av temsirolimus (0,2 - 40 mg/kg mus) bruker en diett av fem daglige IP injeksjoner etterfulgt av 2 dager med hvile og en ytterligere fem daglige injeksjoner11.
  3. Måle luciferase aktiviteten (fotoner/s/cm2/steradian) 2 x per uke som beskrevet i del 3 og plot endring av BLI over tid. Endringer i svulst BLI kan presenteres som serielle bilder av mus (figur 5B).
    Merk: Det anbefales at daglig overvåking av dyrene utføres før de presentere følgende symptomer (vanligvis innen 45-60 dager etter første utfordringen): vekt tap (tap av mer enn 10% i forhold til vekten før implantasjon) og/eller hind lem lammelse, da de burde være euthanized bruker en CO2 kammer etterfulgt av cervical forvridning.

5. PET/CT analyse med 18F-FDG å måle endringer i svulst metabolisme

  1. Rask dyr inne deres hjem bur ved å fjerne maten for 24 timer før å unngå overflødig uspesifisert opptak av 18F-FDG.
  2. Forberede 18F-radiolabeled FDG PET sonder (50-100 µCi/injeksjon i sterilt saltvann) på dagen av eksperimentet. Registrere tid og aktivitet av 18F-FDG sonde med en dose kalibrator.
    Merk: Siden 18F har en relativt kort halveringstid (~ 2 h), en forsiktig forberedelse og planlegging for bruk av disse sonder må opprettes.
  3. Bedøve dyret (med isoflurane, 1-3% i luften på 0,5 - 1 L/min) og plasser den i supine posisjon på en heten pute med hodet vendt bort. Kontrollere nivået av anesthetization ved pinching tåen. Bruke ophthalmica salve på øynene.
  4. Injisere sonde via hale venen (100 µL/injeksjon) bruker en skjermet 1 mL insulinsprøyte og en 26-G nål.
    Merk: En varmelampe kan brukes til å varme halen, og dermed strekke venen og øke effekten av injeksjoner.
  5. Måle den gjenværende radioaktiviteten i p/sprøyten i en dose kalibrator og Merk aktivitet og tid.
    Merk: Standardisering av musen inkubering, dosering og tidspunkt er avgjørende for å sikre data reproduserbarhet og sammenlignbarhet.
  6. Opprettholde musene under narkose og 37 ° C med en varmeputen i hele perioden av sonden opptak (~ 45-90 min).
    Merk: Det er viktig at mus forblir quiescent og 37 ° C å unngå ikke-spesifikk opptak av sonden.
  7. Rave injeksjoner av 18F-FDG sonden skal skje ved ca 20 til 30-minutters intervaller slik lignende merking tider i mus.
    Merk: Riktig arbeidsflyt og timing av sonden injeksjoner vil resultere i optimal og reproduserbar imaging forhold.
  8. Mål 18F-FDG aktiviteten i en PET/CT liten-dyr imaging system i utvalgte regioner av interesse som tilsvarer den engrafted svulst (figur 6).
    Merk: I utgangspunktet en 10-minutters statisk PET eksponering og en 2-min CT eksponering anbefales, men de nøyaktige eksponeringstider må bestemmes eksperimentelt.
  9. Returnere dyrene til burene sine hjem og overvåke dem før helt frisk. Huset musene i et dedikert retur rom for 24 timer mens i sonde henfall bakgrunn nivåer.
    Merk: På grunn av den korte halveringstiden 18F, flere mål med en frisk sonde gjøres så ofte som 2 x per uke.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I første pilotstudier utvikle IV injeksjoner av 8226-LUC celler i hilsen/SCID mus ikke BM-engrafted MM svulster, selv om squamous MM svulster ble lett dannet (100% suksessrate). Derimot generert IV utfordringer med 8226 celler i NOG mus (innen 15-25 dager) svulster i skjelettet (og bare sjelden dannet svulster i ikke-skjelett vev, som leveren og milten). Siden svulster i skjelettet ikke kan visuelt bekreftes ved fysisk å dyrene, måtte andre metoder anses å bekrefte vellykket svulst engraftment og plasseringen av tumorer i BM (figur 1). Tilsvarende rapporter fra Miyakawa et al. 9, menneskelige IgG, produsert av 8226 celler, ble oppdaget i serum utfordret NOG mus med ELISA (data ikke vist), selv om disse dataene bare bekreftet engraftment og ikke plassering eller omfanget av tumorer. Seriell imaging av flere dyr viser fordelingen av BM-engrafted MM svulster (Figur 4). BLI produsert av disse engrafted tumor celler kan deretter bli serielt og ikke-invasively målt for å vurdere endringer i tumor vekst og overlevelse i mus behandlet med mTOR hemmer temsirolimus (figur 5). Endelig ble PET/CT analyse for opptaket av 18F-FDG i tumorer brukt til å demonstrere temsirolimus-mediert endringer i glukose metabolisme og at dette korrelert med endringer i tumorveksten (figur 6). Imidlertid av stabilt transfecting 8226 celler med en luciferase allelet, sammen med en optisk tenkelig/X-ray analyse, kunne den nøyaktige plasseringen og distribusjon av MM svulster i mus skjelettet raskt og ikke-invasively bestemmes.

Figure 1
Figur 1: bekreftelse av engraftment av 8226-LUC celler i musen skjelettet. (A) NOG mus ble utfordret med 5 x 106 8226-LUC2 celler IV (mus til venstre) eller med saltvann (mus til høyre). Etter 15 dager, musene ble gitt en IP injeksjon av D-luciferin substrat og fotografert med en liten-dyr tenkelig system. (B) musene ble ofret, femurs var samlet og BM mobilnettet sårvæske ble slaktet. Uttrykk for menneskelige CD45 ble bestemt av flowcytometri bruker en PE-konjugerte anti-CD45 antistoff. (C) dette panelet viser en immunohistochemistry av seriell mus femurs farget for hypoksi pimonidazole (topp panel) eller menneskelig CD45 (nedre paneler) i mus utfordret med 8226 (høyre panel) eller saltvann (kontroll, venstre panel). Stjernen angir plasseringen av en stor blodåre i delene føljetong. Baren skala = 100 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: bedøvet NOG mus viser posisjonering i tenkelig system før måle BLI signal fra benmargen-engrafted MM svulster. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: oppsett av optisk avbilding og X-ray analyse av bioluminescent samlet fra NOG mus. Når dyrene har blitt vellykket utfordret og engraftment av svulster i BM er bekreftet, kan mus være randomisert til behandlingsgrupper. På ulike tidspunkter i løpet av eksperimentet, kan dyrene overvåkes for endringer i BLI. Prosedyren er noninvasive, kan hyppigheten av overvåking endres for å gjenspeile den forventede veksten av svulster, samt hvor raskt kreftcellene vil reagere på behandling. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4: seriell imaging av flere dyr viser fordelingen av benmarg-engrafted MM svulster. Regionene rundt (ROI) for hver musen identifiseres. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 5
Figur 5: endringer i BLI av engrafted svulster i NOG mus under en anti-MM terapeutiske diett. (A) dette panelet viser en endring i den gjennomsnittlige utstråling (p/s/cm2/ser) i temsirolimus (20 mg/kg mus)-behandlet NOG mus utfordret IV med 5 x 106 celler. Når mus ble observert for å være positivt for engrafted svulster, ble de randomisert til ulike behandlingsgrupper. Mus fikk fem IP injeksjoner daglig, etterfulgt av 2 dager med hvile, og deretter en ytterligere fem IP injeksjoner av temsirolimus (stolper på x-aksen angir dager behandling) eller kjøretøy kontroll. På ulike dager, musene ble gitt IP injeksjoner av "i vivo-grade" D-luciferin, og BLI ble målt ved hjelp av en optisk tenkelig plattform. Verdiene representerer den gjennomsnittlige utstråling (p/s/cm2/ser) ± et 95% konfidensintervall. (B) denne Kaplan-Meier plottet viser endringen i prosent av overlevende mus over tid. Musene som hadde nådd endepunktet vilkårene (dvs., > 10% kroppsvekt eller baklem lammelse) var humant euthanized. (C) dette panelet viser representant bilder av mus tatt på dager 28, 35 og 40, viser endringer i LUC aktiviteten. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 6
Figur 6: Seriell imaging og relativ endringer i 18F-FDG opptaket av PET/CT (A) dette panelet viser seriell imaging av samme musen for bioluminescens (optisk tenkelig/X-ray) bildebehandling og 18F-FDG opptak av PET/CT BLI ble målt i bedøvet mus, og PET/CT avbilding av samme musen ble utført 24 timer senere. Musen fastet over natten og dagen for studien, mottok en IV injeksjon av 50 µCi 18F-FDG. Mus ble opprettholdt under narkose under sonde opptak incubation (60 minutter) og deretter ble analysert for 18F-FDG opptak av PET/CT analyse. Svulster (T1 og T2) angis. H = hjerte, K = nyre og B = blæren. (B) dette panelet viser relativ endringer (i prosent av ubehandlet kontroll svulster) i 18F-FDG opptaket kontroll mus (ingen behandling) eller temsirolimus (20 mg/kg mus)-behandlet mus (målt dager 22, 35 og 40). Dataene er presentert som gjennomsnittet (n = 5 mus) ± 1 SD Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Til tross for en rekke prekliniske xenograft modeller MM,6,,9,,11,,12,,13forblir muligheten til å studere svulst/BM interaksjoner i BM microenvironment vanskelig 14. teknikkene her tillate den raske og reproduserbar engraftment av 8226-LUC svulst celler i skjelettet av NOG mus.

De avgjørende skritt i denne protokollen involvert etableringen av luciferase-uttrykke MM linjer og verifisering av en stabil uttrykk for luciferase i vitro15. Når cellen linjene er etablert NOG mus er utfordret av IV injeksjon og engraftment av svulster for skjelettet er bekreftet ved å måle den BLI aktivitet i vivo (vanligvis innen 10-20 dager postchallenge) (figur 1A). Bruk av NOG mus er viktig fordi andre immunodeficient belastninger (NIKKER/SCID) ikke typisk form BM-engrafted svulster. Relativt høy suksessrate på implantasjon (> 90%) og det korte intervallet å observere et positivt BLI signal gjør denne modellen ideelt for en høy gjennomstrømming og langsgående analyse av anti-MM terapeutiske modaliteter (Figur 4). En annen svært viktig aspekt av denne modellen er at BM-engrafted MM cellelinjer opprettholde sine morfologiske og immunologiske egenskaper overordnede cellen linjer (f.eks8226, U266); de har konsekvent og reproduserbar vekst mønstrene og vise egenskaper av pasienten sykdommer, for eksempel øke serum menneskelige IgG paraprotein nivåer og dannelse av bein lesjoner.

Fordelen med denne strategien er bruken av disse kraftige Bildeteknikker gjentatte ganger studere biokjemiske og molekylære komponenter av svulst/BM-microenvironment i løpet av sykdomsprogresjon og svar på anti-tumor terapier. I dette eksperimentet fant vi at målretting mTOR aktivitet i mus med BM-engrafted myelom svulster resulterte i en reduksjon i bioluminescent målinger som kan observeres over tid. Videre fant vi at endringer i opptaket av 18F-FDG sonden (figur 6B) i disse samme tumorer var korrelert til endringer i bioluminescent signalet (figur 5B). En annen komponent i denne fremgangsmåten er at flere biokjemiske variabler kan måles i svulsten over tid. Dette er spesielt viktig fordi svulst progresjon er en dynamisk prosess preget av endringer i svulst fysiologi og microenvironment egenskaper. Derfor gir denne prosedyren på grunn av sin ikke-invasiv Art og den relativt korte halveringstiden av sonder, flere langsgående analyser av endringer i tumor respons på behandling.

Etter mestring teknikken, presentere den fremtidige anvendelser av teknikken mye fleksibilitet. For eksempel kan bruk av andre bioluminescent eller fluorescerende koder (f.eks, fluorescently merket antistoffer) også utnyttes, kunne ulike andre 18F-merket sonder og radiopharmaceutical forbindelser å studere spesifikke biokjemiske veier eller prosesser i svulst/BM-microenvironment. På grunn av den korte halveringstiden av mange av disse radionucleotides, kan flere serielle målinger gjøres i løpet av et bestemt eksperiment å studere narkotika opptak, distribusjon, kinetics og forfall. Benytter denne xenograft modell, evne til MM å utnytte anaerob Glykolysen og andre metabolske veier (dvs., fettsyrer syntese) ved hjelp av andre sonder (f.eks,18F-fluoro-2deoxyglucose [18F-FDG] og 18 F-fluoro-4-Thia-palmitate [FTP])16,17, samt muligheten til å måle anti-proliferativ effekten av behandling bruker en mye brukt sonde (dvs.3-deoxy-3 "-[18F] fluorothymidine [ 18F-FLT]) kan inkluderes i eksperimentell design. I tillegg kan det være mulig å måle direkte celledød ved 18F-Annexin B1 til å måle apoptose i vivo18. Mange av disse forbindelsene er kommersielt tilgjengelig.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatteren Kevin Francis er ansatt i Perkin finne.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av en VA fortjeneste grant1I01BX001532 fra USA Institutt for Veteraner saker biomedisinsk laboratorium forskning og utvikling Service (BLRDS) til PF og EC anerkjenner støtte fra VA klinisk Science R & D Service ( Merit Award I01CX001388) og VA rehabilitering R & D Service (Merit Award I01RX002604). Ytterligere støtte kom fra UCLA fakultetet frø stipend til JK Disse innholdet representerer ikke nødvendigvis synspunktene til oss Institutt for Veteraner saker eller amerikanske myndigheter.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
8226 human myeloma cell line ATCC CCL-155
NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) Jackson Labs 5557
VivoGlo Luciferin substrate Promega P1041
Hypoxyprobe-1Kit HPL HP1-100
PE-CD45 (clone H130) BD Biosciences 555483 Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate
rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) Cell Signaling Technology 70527 Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone
Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) ABCAM ab205718 Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone
Dual-Luciferase Reporter Assay System Promega E1910
pGL4.5 Luciferase Reporter Vector Promega E1310
IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System Perkin Elmer
Sofie G8 PET/CT Imaging System Perkin Elmer

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Raab, M. S., Podar, K., Breitkreutz, I., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Multiple Myeloma. The Lancet. 374, (9686), 324-339 (2009).
  2. Galson, D. L., Silbermann, R., Roodman, G. D. Mechanisms of Multiple Myeloma Bone Disease. BoneKEy Reports. 1, 135 (2012).
  3. Anderson, K. C., Carrasco, R. D. Pathogenesis of Myeloma. Annual Review of Pathology. 6, 249-274 (2011).
  4. Reagan, M. R., Rosen, C. J. Navigating the Bone Marrow Niche: Translational Insights and Cancer-Driven Dysfunction. Nature Reviews Rheumatology. 12, (3), 154-168 (2016).
  5. Frost, P., et al. Mammalian Target of Rapamycin Inhibitors Induce Tumor Cell Apoptosis in Vivo Primarily by Inhibiting Vegf Expression and Angiogenesis. Journal of Oncology. 2013, 897025 (2013).
  6. Mysore, V. S., Szablowski, J., Dervan, P. B., Frost, P. J. A DNA-Binding Molecule Targeting the Adaptive Hypoxic Response in Multiple Myeloma Has Potent Antitumor Activity. Molecular Cancer Research. 14, (3), 253-266 (2016).
  7. Podar, K., Chauhan, D., Anderson, K. C. Bone Marrow Microenvironment and the Identification of New Targets for Myeloma Therapy. Leukemia. 23, (1), 10-24 (2009).
  8. Campbell, R. A., et al. Laglambda-1: A Clinically Relevant Drug Resistant Human Multiple Myeloma Tumor Murine Model That Enables Rapid Evaluation of Treatments for Multiple Myeloma. International Journal of Oncology. 28, (6), 1409-1417 (2006).
  9. Miyakawa, Y., et al. Establishment of a New Model of Human Multiple Myeloma Using Nod/Scid/Gammac(Null) (Nog) Mice. Biochemical and Biophysical Research Communications. 313, (2), 258-262 (2004).
  10. Ito, M., et al. Nod/Scid/Gamma(C)(Null) Mouse: An Excellent Recipient Mouse Model for Engraftment of Human Cells. Blood. 100, (9), 3175-3182 (2002).
  11. Frost, P., et al. In Vivo Antitumor Effects of the Mtor Inhibitor Cci-779 against Human Multiple Myeloma Cells in a Xenograft Model. Blood. 104, (13), 4181-4187 (2004).
  12. Asosingh, K., et al. Role of the Hypoxic Bone Marrow Microenvironment in 5t2mm Murine Myeloma Tumor Progression. Haematologica. 90, (6), 810-817 (2005).
  13. Storti, P., et al. Hypoxia-Inducible Factor (Hif)-1alpha Suppression in Myeloma Cells Blocks Tumoral Growth in Vivo Inhibiting Angiogenesis and Bone Destruction. Leukemia. 27, (8), 1697-1706 (2013).
  14. Fryer, R. A., et al. Characterization of a Novel Mouse Model of Multiple Myeloma and Its Use in Preclinical Therapeutic Assessment. PLoS One. 8, (2), e57641 (2013).
  15. Gould, S. J., Subramani, S. Firefly Luciferase as a Tool in Molecular and Cell Biology. Analytical Biochemistry. 175, (1), 5-13 (1988).
  16. Czernin, J., Phelps, M. E. Positron Emission Tomography Scanning: Current and Future Applications. Annual Review Medicine. 53, 89-112 (2002).
  17. Pandey, M. K., Bhattacharyya, F., Belanger, A. P., Wang, S. Y., DeGrado, T. R. Pet Imaging of Fatty Acid Oxidation and Glucose Uptake in Heart and Skeletal Muscle of Rats: Effects of Cpt-1 Inhibition. Circulation. 122, (21), (2010).
  18. Wang, M. W., et al. An in Vivo Molecular Imaging Probe (18)F-Annexin B1 for Apoptosis Detection by Pet/Ct: Preparation and Preliminary Evaluation. Apoptosis. 18, (2), 238-247 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics