Separação eletroforética de proteínas

Biology

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Summary

Neste vídeo, demonstramos um método para separação eletroforética de proteínas usando poli-acrylimide eletroforese em gel (PAGE).

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Chakavarti, B., Chakavarti, D. Electrophoretic Separation of Proteins. J. Vis. Exp. (16), e758, doi:10.3791/758 (2008).

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Abstract

Eletroforese é usada para separar misturas complexas de proteínas (por exemplo, a partir de células, frações subcelulares, frações da coluna, ou imunoprecipitados), para investigar composições subunidade, e para verificar a homogeneidade das amostras de proteína. Ele também pode servir para purificar proteínas para uso em outras aplicações. Eletroforese em gel de poliacrilamida, as proteínas migram em resposta a um campo elétrico através de poros em uma matriz de gel de poliacrilamida; tamanho dos poros diminui com a concentração de acrilamida crescente. A combinação de tamanho dos poros e carga de proteína, tamanho e forma determina a taxa de migração da proteína. Nesta unidade, o método de Laemmli padrão é descrito por eletroforese em gel descontínua em condições de desnaturação, ou seja, na presença de dodecil sulfato de sódio (SDS).

Protocol

O protocolo de texto completo para essa abordagem experimental está disponível em protocolos atuais em Biologia Molecular .

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Comments

10 Comments

  1. Hi nice demo but I did not understand why the presenters kept on showing an agarose gel electrophoresed DNA gel in between as a representation instead of a protein gel.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 15, 2008 - 1:11 PM
  2. SYPROorange and SYPROruby staining - two fluorescent-based protein detection methods - can appear like ethidium bromide stained DNA gels.  So those gels you are speaking of may actually be protein gels. 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2008 - 9:34 AM
  3. Yeah possible,  but then why do we see only a single band.I guess SYPRO detection methods would detect the entire protein panel and not specific bands. unless otherwise they are detecting some specific enzyme activity using flourescent detection methods.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2008 - 9:52 AM
  4. We loaded BSA.

    Thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2008 - 2:12 AM
  5. Please not that we showed polyacrylamide gel electrophoresis and not agarose gel electrophoresis.

    Thanks.

    Bulbul Chakravarti

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2008 - 2:08 AM
  6. why cannot i see the video...? pls help me..

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2008 - 3:35 AM
  7. i can see it now..thanks...

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2008 - 4:50 AM
  8. my network is poor, I can not enjoy the video

    Reply
    Posted by: Huang C.
    March 15, 2009 - 6:30 AM
  9. Hello, Please shoot me an email at nikitab@jove.com and we'll figure something out for you. Cheers, Nikita

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 22, 2009 - 10:26 PM
  10. Hi, thanks what can I download your video ? please help me

    Reply
    Posted by: violet s.
    January 14, 2012 - 10:35 AM

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