Summary
यह पांडुलिपि औषधीय एजेंटों या तंत्रिका उत्तेजना के जवाब में चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना के मूल्यांकन के लिए इन विट्रो विधि में, एक सरल, अभी तक शक्तिशाली प्रस्तुत करता है. मुख्य आवेदन दवा स्क्रीनिंग और समझ ऊतक शरीर विज्ञान, औषधि, और पैथोलॉजी हैं.
Abstract
हम इन विट्रो मूत्राशय चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना को मापने के लिए विधि, और शारीरिक और औषधीय चिकनी पेशी के गुणों के साथ ही पैथोलॉजी द्वारा प्रेरित परिवर्तन की जांच के लिए इसके उपयोग का वर्णन. इस विधि में इस तरह की शल्य चिकित्सा और औषधीय तैयारी की स्थिरता और अस्तित्व को प्रभावित है कि जोड़तोड़, मानव ऊतक का उपयोग करते हैं, और / या महंगी रसायनों के उपयोग के रूप में विवो प्रयोगों में सामना में प्रमुख पद्धति कठिनाइयों पर काबू पाने, जबकि मूत्राशय समारोह को समझने के लिए महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करता है. यह भी स्वस्थ और रोग की स्थिति में प्रत्येक मूत्राशय घटक (यानी चिकनी पेशी, म्यूकोसा, नसों) की संपत्तियों की जांच के लिए एक तरीका प्रदान करता है.
मूत्राशय एक anesthetized पशु, क्रेब्स समाधान में रखा और स्ट्रिप्स में कटौती से हटा दिया जाता है. स्ट्रिप्स गर्म क्रेब्स समाधान के साथ भरा एक कक्ष में रखा जाता है. एक सिरा एक isometric tensio से जुड़ा हुआ हैसंकुचन बल को मापने के लिए एन ट्रांसड्यूसर, दूसरे छोर पर एक निश्चित रॉड से जुड़ा हुआ है. ऊतक सीधे स्नान करने के लिए या विवो में मूत्राशय संकुचन को ट्रिगर करने के लिए इसी तरह की नसों को सक्रिय कि बिजली के क्षेत्र उत्तेजना इलेक्ट्रोड से यौगिकों जोड़कर प्रेरित है. हम इस पद्धति का उपयोग विकास के दौरान और एक प्रयोगात्मक रीढ़ की हड्डी में चोट के बाद सहज चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना मूल्यांकन करने के लिए प्रदर्शन, neurotransmission (शामिल ट्रांसमीटरों और रिसेप्टर्स), चिकनी पेशी गतिविधि के मॉडुलन में शामिल कारकों की प्रकृति, व्यक्तिगत मूत्राशय घटकों की भूमिका, और प्रजातियों और औषधीय एजेंटों के जवाब में अंग मतभेद. इसके अतिरिक्त, यह ट्रांसमीटर रिहाई के संकुचन और / या चिकनी पेशी की छूट, दवा संरचना गतिविधि रिश्तों और मूल्यांकन में शामिल intracellular रास्ते की जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
इन विट्रो चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना विधि बड़े पैमाने के लिए इस्तेमाल किया गया है50 साल से अधिक अनुसंधान, और काफी मूत्राशय समारोह के बारे में हमारी समझ के लिए और साथ ही वर्तमान में मूत्राशय प्रबंधन के लिए नैदानिक इस्तेमाल यौगिकों की दवा के विकास के लिए योगदान दिया है कि डेटा उपलब्ध कराया गया है.
Introduction
मूत्राशय चिकनी पेशी मूत्र उन्मूलन बटोर मूत्र भंडारण की अनुमति के लिए आराम, और अनुबंध. विश्राम आंतरिक चिकनी पेशी गुणों से और निस्सारिका में बीटा एड्रीनर्जिक रिसेप्टर्स (β मानव में 3 एआर) को सक्रिय करता है जो सहानुभूति नसों से norepinephrine (पूर्वोत्तर) का टॉनिक रिहाई, द्वारा मध्यस्थता है. Voiding सहानुभूति इनपुट बाधा और ACH / एटीपी मूत्राशय चिकनी मांसपेशी 1 अनुबंध करने के लिए जारी है कि parasympathetic नसों को सक्रिय करके हासिल की है. मस्तिष्क और / या रीढ़ की हड्डी में चोट, neurodegenerative रोगों, मधुमेह, मूत्राशय दुकान बाधा या मध्य cystitis सहित कई रोग की स्थिति, गहराई से जीवन 2 के मरीज की गुणवत्ता पर गंभीर प्रभाव के साथ, मूत्राशय समारोह बदल सकते हैं. चिकनी पेशी, अभिवाही या अपवाही नसों और / या: इन स्थितियों में एक या मूत्राशय के अधिक घटकों को प्रभावित करने से चिकनी मांसपेशियों के संकुचन में परिवर्तनम्यूकोसा.
विवो में और मूत्राशय समारोह का अध्ययन करने के लिए इन विट्रो विधियों में कई विकसित किया गया है. में विवो, cystometry मूत्राशय समारोह का प्राथमिक माप है. इस शारीरिक स्थितियों के करीब के तहत जानकारी के संग्रह की अनुमति देता है कि एक अक्षुण्ण तैयारी है, चिकनी पेशी स्ट्रिप्स का उपयोग पसंद किया जाता है जो परिस्थितियों के एक नंबर रहे हैं. ये शल्य चिकित्सा और / या औषधीय जोड़तोड़ अस्तित्व और इन विवो तैयारी की स्थिरता, या प्रभावित करती है जब स्थितियों में शामिल पढ़ाई मानव ऊतक या महंगी रसायनों के उपयोग की आवश्यकता है. इस पद्धति का भी मूत्राशय के प्रत्येक घटक पर दवाओं, उम्र और पैथोलॉजी के प्रभाव की एक परीक्षा की सुविधा, चिकनी पेशी, म्यूकोसा, अभिवाही और अपवाही नसों अर्थात्.
मूत्राशय स्ट्रिप्स वैज्ञानिक कई सवाल जवाब देने के लिए कई समूहों द्वारा वर्षों में नियोजित किया गया है. वे ईवा के लिए इस्तेमाल किया गयाmyogenic सहज गतिविधि में luate परिवर्तन पैथोलॉजी द्वारा प्रेरित. यह क्रिया अति मूत्राशय (OAB) की तात्कालिकता और आवृत्ति के लक्षणों में योगदान माना है, और इसलिए OAB 3-9 के लिए विकसित किया जा रहा दवाओं के लिए एक लक्ष्य है. मूत्राशय स्ट्रिप्स भी छूट या चिकनी मांसपेशियों के संकुचन या तो प्रेरित करने के लिए लक्षित किया जा सकता है कि आयन चैनल और / या रिसेप्टर्स और / या intracellular रास्ते की खोज के उद्देश्य से चिकनी मांसपेशियों टोन मिलाना कि myogenic और neuronal कारकों की जांच के लिए इस्तेमाल किया गया 3,10- 13. अन्य अध्ययनों पैथोलॉजी 14,15 से प्रेरित ट्रांसमीटरों और शामिल रिसेप्टर्स और परिवर्तन सहित neurotransmission की प्रकृति पर ध्यान केंद्रित किया है. इसके अलावा, विधि अंगों 19-21, और दवा संरचना गतिविधि रिश्तों 22-24 के मूल्यांकन के बीच, विभिन्न प्रजातियों के 16 18 से ऊतकों के बीच तुलना के लिए इस्तेमाल किया गया है. इस पद्धति का ही विस्तार measur के लिए इस्तेमाल किया गया हैअपवाही नसों 25 से ट्रांसमीटर रिहाई पर दवाओं के प्रभाव ई. इसके अलावा, ऊतकों (मूत्राशय, मूत्रमार्ग, जठरांत्र संबंधी मार्ग, सैनिक) (अनुसंधान के लिए मंजूरी दे दी सर्जरी या अंग दाता ऊतक से) जानवरों या मनुष्यों से काटा और रीढ़ की हड्डी में चोट (एससीआई), मूत्राशय दुकान बाधा सहित पशु मॉडल की एक किस्म से की एक किस्म (बू), या मध्य cystitis (आईसी) इस तकनीक का उपयोग कर जांच की जा सकती है.
इस पत्र में हम ऊपर उल्लेख कई वैज्ञानिक सवालों का पता करने के लिए आवश्यक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के साथ इस विधि का उपयोग करते हैं, उदाहरण देकर स्पष्ट करना.
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Protocol
यहाँ वर्णित सभी प्रक्रियाओं पिट्सबर्ग विश्वविद्यालय में IACUC समिति द्वारा अनुमोदित कर रहे हैं.
1 समाधान
- नुस्खा के अनुसार क्रेब्स समाधान तैयार है. NaCl 118, KCl 4.7, 2 CaCl 1.9, 4 MgSO 1.2, 3 NaHCO 24.9, के.एच. 2 4 पीओ 1.2, डेक्सट्रोज 11.7: mm में संगठन.
- 95% 2 हे, 5% सीओ 2 के साथ क्रेब्स aerate और प्रयोग भर में इस्तेमाल किया जा करने के लिए एक 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में जगह है. एक तरफ रखें ~ कमरे के तापमान पर वातित क्रेब्स समाधान की 200 मिलीलीटर ऊतक विच्छेदन के लिए इस्तेमाल किया जाएगा.
- वातित क्रेब्स के पीएच (~ 7.4) और परासारिता (~ 300 mOsm) उपाय.
2 प्रयोगात्मक सेट अप (योजनाबद्ध चित्रा 1 ए)
- (95% ओ 2, 5% सीओ 2) 10 मिलीलीटर क्रेब्स के साथ कक्षों वातित भरें.
- 37 डिग्री सेल्सियस तक कक्षों गर्मी के लिए घूम पानी पंप शुरू; आवश्यक उपकरणों पर बारी: एम्पलीफायर (एस), उत्तेजक (एस) और रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर.
- एक 1 ग्राम वजन के साथ transducers जांचना.
3 ऊतक (चित्रा 1 बी)
: इन चरणों का पालन, (~ 10-12 सप्ताह पुरानी 200-250 ग्राम) एक वयस्क भोले महिला Sprague Dawley चूहे से मूत्राशय निकालें
- विच्छेदन क्षेत्र और आवश्यक उपकरणों को तैयार: बिजली छुरा, दांत के साथ संदंश, स्केलपेल ब्लेड, विदारक कैंची, microscissors, दो विदारक संदंश, ऊतक क्लिप्स (या रेशम सिवनी), क्रेब्स और साथ एक Sylgard लेपित विच्छेदन पकवान (लेखकों Dumont संदंश # 3 पसंद करते हैं) ऊतक विच्छेदन पिंस.
- प्रेरण कक्ष में isoflurane साँस लेना (ओ 2 में 4%) के साथ पशु anesthetize. संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर पशु चिकित्सा मरहम का प्रयोग करें. लगातार श्वसन दर, बाहरी उत्तेजनाओं के जवाब, और पलटा वापस लेने के पीछे अंग के नुकसान को देख कर संज्ञाहरण के स्तर की निगरानी.
- पशु दाढ़ी पेट के निचले भाग एक anesthetized है जबइसकी वजह. एक midline पेट चीरा के माध्यम से पेल्विक अंगों बेनकाब. मूत्राशय और मूत्रमार्ग पहचानें. समीपस्थ मूत्रमार्ग के करीब मूत्राशय गर्दन पर काटने से मूत्राशय निकालें. वातित क्रेब्स समाधान के साथ भरा Sylgard लेपित पकवान में तुरंत ऊतक रखें.
- यदि आवश्यक हो, इस समय अतिरिक्त ऊतक को दूर: मूत्रमार्ग, जठरांत्र (सैनिक) पथ और / या प्रोस्टेट के टुकड़े, आदि
- IACUC अनुमोदित विधियों (जैसे, संवेदनाहारी जरूरत से ज्यादा या एक माध्यमिक विधि द्वारा पीछा सीओ 2 asphyxiation) का उपयोग कर पशु बलि.
- आगे विच्छेदन के लिए ऊतक को स्थिर करने के लिए, मूत्राशय गुंबद, गर्दन, और मूत्रवाहिनी के माध्यम से ऊतक विदारक पिन डालें. ऊतक खिंचाव न करें. वसा, संयोजी ऊतक, समीपस्थ मूत्रमार्ग, और मूत्रवाहिनी अगर वर्तमान निकालें.
- एक फ्लैट शीट बनाने के गुंबद को आधार से मूत्राशय खोलें, serosa ओर नीचे / luminal पक्ष अप (चित्रा 1 बी). ऊतक के प्रत्येक कोने पर विदारक पिंस रखें. मूत्राशय डोम निकालेंई और गर्दन ऊतक.
- प्रयोग का उद्देश्य म्यूकोसा (urothelium और लामिना propria - चित्र चित्रा 1C देखें) के योगदान का निर्धारण करने के लिए है, तो चिकनी मांसपेशी संकुचन के लिए, के साथ और संलग्न म्यूकोसा बिना निस्सारिका स्ट्रिप्स के गुणों की तुलना करें. इस के लिए, स्ट्रिप्स में ऊतक काटने से पहले, ध्यान से परितारिका एक विदारक खुर्दबीन के नीचे कैंची और ठीक संदंश वसंत का उपयोग mucosal परत को हटा दें. प्रयोग के अंत में, म्यूकोसा की पूरी तरह हटाने की पुष्टि करने के लिए एच ई धुंधला के लिए स्ट्रिप्स तय. इस प्रक्रिया चूहे मूत्राशय में से माउस मूत्राशय में आसान है कि ध्यान दें.
- ~ 2 x 8 मिमी (चित्रा 1 बी) के स्ट्रिप्स में गुंबद को आधार से लंबाई में ऊतक में कटौती. टाई या प्रत्येक पट्टी के दोनों सिरों को एक ऊतक क्लिप देते हैं.
ध्यान दें: एक चूहे मूत्राशय आमतौर पर 4 स्ट्रिप्स में कटौती की जा सकती है लेकिन स्ट्रिप्स की संख्या में वृद्धि कर सकते हैं या कमी पशु / मूत्राशय आकार पर निर्भर करता है. - अनुभव करने के लिए स्ट्रिप्स हस्तांतरणimental कक्षों. एक ऊतक संकुचन जो उपाय एक बल transducer, के लिए प्रत्येक पट्टी के अंत में, और एक तय गिलास / धातु की छड़ को अन्य संलग्न.
नोट: ऊतक कक्षों आकार में (20 मिलीलीटर या बड़ा करने के लिए 0.2 मिलीलीटर) बदलती हैं. कृंतक मूत्राशय के लिए विशिष्ट कक्षों स्ट्रिप्स पूरी तरह से समाधान में पानी में डुबोया जा करने के लिए पर्याप्त ऊंचाई प्रदान जो 5-20 मिलीलीटर, कर रहे हैं. कुछ कक्षों में निर्मित उत्तेजना इलेक्ट्रोड, दूसरों के साथ नहीं आते हैं. केयर अन्यथा बिजली के क्षेत्र उत्तेजना विश्वसनीय नहीं है, इलेक्ट्रोड के सभी कनेक्शन अच्छी स्थिति में हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए लिया जाना चाहिए. - आधारभूत तनाव 1 ग्राम (~ 10 करोड़) तक पहुँच जाता है जब तक धीरे ऊतक खींच द्वारा प्रत्येक पट्टी करने के लिए बल का एक परिभाषित राशि लागू करें. प्रारंभ में ऊतक आधारभूत तनाव में कमी के रूप में दर्ज की गई है जो आराम करने के लिए जाता है. धो ऊतक लगभग और गर्म वातित क्रेब्स का उपयोग हर 15 मिनट प्रत्येक धोने के बाद 1 ग्राम के लिए आधारभूत तनाव को समायोजित. (आधारभूत तनाव स्थिर है ऊतक ~ के लिए 1-2 घंटे या जब तक संतुलित करने की अनुमति देंयानी आगे नहीं ऊतक छूट).
- ~ 5 मिनट के लिए, या एक पठार प्रतिक्रिया जब तक स्नान करने के लिए सीधे KCl (80 मिमी) जोड़कर टेस्ट ऊतक व्यवहार्यता पर पहुंच गया है. KCl की उच्च सांद्रता के लिए प्रतिक्रियाएँ भी प्रयोग के दौरान या प्रयोग के अंत में दोहराया और (डेटा विश्लेषण अनुभाग के तहत सामान्य बनाने देखें) स्ट्रिप्स अन्य दवाओं के लिए प्रतिक्रियाओं को सामान्य बनाने के लिए या बीच में इस्तेमाल किया जा सकता है.
- गर्म वातित क्रेब्स के साथ धो ऊतक कई बार (3-5x) ऊतक पूर्व उपचार की स्थिति में लौटने की अनुमति देने के लिए.
4 उत्तेजना प्रोटोकॉल
- ऐसे एससीआई, बू, या नवजात शिशुओं के रूप में विभिन्न पशु मॉडल से चिकनी मांसपेशियों स्ट्रिप्स का उपयोग, सहज myogenic गतिविधि या चिकनी मांसपेशियों टोन पर विकृति के प्रभाव की जांच करने के लिए. 2 चित्रा विकास के दौरान मूत्राशय सहज गतिविधि में परिवर्तन की जांच करने के लिए इस विधि का उपयोग दिखाता है और एससीआई के बाद. इसके अलावा, औषधीय एजेंटों सपा मिलाना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैontaneous गतिविधि. चित्रा 3 सहज गतिविधि और चिकनी मांसपेशियों टोन पर KCNQ चैनल modulators, flupirtine और XE991, के प्रभाव दिखाता है.
- सीधे निर्धारित समय अंतराल पर स्नान करने के लिए केंद्रित शेयर समाधान से यौगिकों जोड़कर औषधीय चिकनी मांसपेशियों उत्तेजना का निर्माण एकाग्रता प्रतिक्रिया घटता के लिए. वाहन और समय प्रभाव के लिए खाते में समानांतर स्ट्रिप्स में दवा और वाहन का प्रयोग करें.
- 1000x अंतिम काम एकाग्रता में वांछित परीक्षण यौगिकों के शेयर समाधान करें. 10 -5 एम, 3 एक्स 10 -5 एम, 10 -4 एम, 3 एक्स 10 -4 एम, 10 -3 एम, 3 एक्स 10 -3 एम: carbachol (सीसीएच), एक मुस्कारिनिक रिसेप्टर agonist के लिए निम्न शेयरों तैयार , 10 -2 एम स्नान में अंतिम सांद्रता 10 -5 एम (आंकड़े 4C, डी) के लिए 10 -8 मीटर है. 10 -8 एम, 10 -7: neuromedin बी (कैलेंडर), एक bombesin रिसेप्टर उप प्रकार 1 एगोनिस्ट के लिए निम्न शेयरों तैयारएम, 10 -6 एम, 10 -5 एम, 10 -4 एम, 10 -3 एम और स्नान में अंतिम सांद्रता हैं 10 -11 एम के लिए 10 -6 एम सीसीएच और NMB दोनों ऊतक सिकुड़ना वृद्धि की उम्मीद कर रहे हैं.
- प्रतिक्रिया एक पठार (चित्रा 4C, डी) तक पहुँच जाता है के रूप में एक 10 मिलीलीटर ऊतक स्नान के लिए, के रूप में जल्द ही प्रत्येक सीसीएच स्टॉक समाधान के 10 μl जोड़ें. समानांतर स्ट्रिप्स में वाहन (पानी) के बराबर मात्रा में जोड़ें. इसी प्रकार प्रत्येक neuromedin बी स्टॉक समाधान के 10 μl हर ~ 5 मिनट जोड़ने.
नोट: चित्रा 4 में विभिन्न प्रजातियों से स्ट्रिप्स में चिकनी मांसपेशियों टोन पर NMB और सीसीएच के उत्तेजक प्रभाव को ध्यान से देखें. - एक उत्तेजक एजेंट, आमतौर पर सीसीएच या KCl के साथ पहले से अनुबंधित ऊतक में चिकनी मांसपेशियों को आराम गुणों की जांच.
- एक agonist प्रतिक्रिया ब्लॉक करने के लिए, उत्तेजना agonist से पहले ऊतक पैठ, अनुमति देने के लिए प्रतिपक्षी के साथ 10-20 मिनट के लिए ऊतक pretreat.
- तंत्रिका STIM के लिएचिकनी मांसपेशियों की आबादी, भी कहा जाता है बिजली के क्षेत्र उत्तेजना (EFS) 3.13 करने के लिए कदम 1 का पालन करें और नीचे वर्णित के रूप में जारी है. EFS चुनिंदा चिकनी पेशी बनाम नसों को सक्रिय करने का इरादा है. उत्तेजना के लिए मापदंडों को ध्यान से प्रत्यक्ष चिकनी मांसपेशियों उत्तेजना से बचने के लिए चुना जाना चाहिए.
- उत्तेजना मापदंडों की स्थापना: नीचे चरणों में वर्णित है और आंकड़े 5 ए, बी में सचित्र के रूप में प्रोत्साहन (एकल दालों या गाड़ियों), अवधि (स्पंद अवधि और ट्रेन की अवधि), आवृत्ति और तीव्रता के प्रकार.
- एकल पल्स उत्तेजना, सेट स्पंद अवधि, अंतर प्रोत्साहन अंतराल और वांछित उत्तेजनाओं की संख्या के लिए. सामान्य उत्तेजना अवधि मापदंडों वांछित अंतराल (चित्रा 5A) में दिया 0.05-0.3 मिसे की अवधि का एकल दालों हैं. उत्तेजना तीव्रता के लिए कदम 4.3.1.4 का पालन करें.
- ट्रेन उत्तेजना के लिए, ट्रेन अवधि और अंतर ट्रेन अंतराल सेट. मूत्राशय ऊतक के लिए विशिष्ट मूल्यों 3-10 सेकंड कम से कम 1 मीटर वितरित कर रहे हैंअलग में (चित्रा 5 ब). ऊतक थकान (यानी EFS संकुचन नियंत्रण अवधि के दौरान कमी) होता है, अंतर ट्रेन अंतराल में वृद्धि.
- एक ट्रेन में दालों की ट्रेन उत्तेजनाओं की आवृत्ति (संख्या की स्थापना - चित्रा 5 ब). 0.5-50 हर्ट्ज से लेकर एक आवृत्ति प्रतिक्रिया वक्र चलाएँ. मूत्राशय के लिए विशिष्ट आवृत्तियों एटीपी और ACH द्वारा मध्यस्थता प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और स्थिर संकुचन दे जो 10-20 हर्ट्ज, कर रहे हैं. इस विधि कोलिनर्जिक और neurotransmission को purinergic तंत्र के योगदान का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है प्रदर्शन कैसे चित्रा 5 में माउस मूत्राशय स्ट्रिप्स में EFS उत्तेजना आवृत्ति निर्भर प्रतिक्रियाओं पर गौर करें.
- उत्तेजना की तीव्रता की स्थापना: संकुचन के आयाम एक पठार तक पहुँच जाता है जब तक (का उपयोग गाड़ियों आवृत्ति स्थिर रखने अगर) व्यवस्थित उत्तेजना की तीव्रता (वोल्टेज) में वृद्धि.
- के आधार पर प्रोत्साहन की तीव्रता सेटप्रयोग का उद्देश्य. उद्देश्य neurally पैदा संकुचन को बढ़ाने के लिए है, तो संकुचन के आयाम ~ अधिकतम संकुचन का 50% है कि इस तरह के submaximal तीव्रता का उपयोग करें. उद्देश्य neurally पैदा संकुचन कम करने के लिए है, तो ~ अधिक से अधिक आयाम के 80% ऊतक थकान से बचने के लिए तीव्रता सेट.
- उत्तेजना मानकों (अवधि, आवृत्ति और तीव्रता) स्थापित हो जाने के बाद, EFS-के लिए 20-30 मिनट दवा परीक्षण से पहले स्थिर करने में संकुचन पैदा की ~ अनुमति देते हैं.
नोट: (; 0.5-1 माइक्रोन TTX) तंत्रिका संचरण, ना + चैनल ब्लॉकर, tetrodotoxin साथ ब्लॉक तंत्रिका संचरण के लिए EFS के चयनात्मकता सत्यापित करने के लिए. TTX अपेक्षाकृत आसान बंद washes के रूप में प्रयोग की शुरुआत में इस चरण को पूरा. इसके अलावा, (कदम 4.3.5 देखें. नीचे) प्रयोग के अंत में यह प्रदर्शन करते हैं. - अंतिम काम कर सांद्रता के लिए 1,000x पर स्टॉक समाधान तैयार: अल्फा, बीटा methylene एटीपी (ABMA, एक purinergic रिसेप्टर उत्प्रेरकऔर desensitizer) 10 -2 एम, atropine (एक मुस्कारिनिक रिसेप्टर प्रतिपक्षी) 10 -3 एम (चित्रा 5C). चित्रा 6 में अन्य उदाहरण पर गौर करें. 5HT4 रिसेप्टर agonist, cisapride (3 एक्स 10 -6 एम, 10 -6 एम, 3 एक्स 10 -5 एम, 10 -5 एम, 3 एक्स 10 -4 एम, 10 -4 एम, 3 एक्स 10 -3 एम, 10 -3 एम), ऊतक सिकुड़ना और एस.बी.-203186 (3 x 10 -3 एम), एक 5HT4 रिसेप्टर प्रतिपक्षी बढ़ जाती cisapride के प्रभाव उलट जाती है.
- EFS (चित्रा 5C) पर ABMA के प्रभाव और atropine परीक्षण करने के लिए, दो नियंत्रण आवृत्ति प्रतिक्रिया घटता प्रदर्शन करते हैं. 10 माइक्रोन के अंतिम एकाग्रता के लिए स्नान के लिए 10 -2 एम ABMA के 10 μl जोड़ें. इस वजह से चिकनी मांसपेशियों में purinergic रिसेप्टर्स की प्रत्यक्ष उत्तेजना के ऊतक अनुबंध होगा. आधारभूत के जवाब रिटर्न के बाद, आवृत्ति प्रतिक्रिया घटता दोहराएँ. एक अंतिम concentrat के लिए 10 -3 एम atropine के 10 μl जोड़ें1 माइक्रोन के आयन. (मुस्कारिनिक रिसेप्टर्स ब्लॉक करने के लिए atropine के लिए आवश्यक) ~ 10 मिनट, दोहराने आवृत्ति प्रतिक्रिया घटता के बाद. समानांतर स्ट्रिप्स में हर कदम पर, वाहन, पानी के 10 μl जोड़ें.
नोट: चित्रा 6 में अन्य उदाहरण के लिए, निर्धारित समय अंतराल (~ हर 15 मिनट; चर्चा देखें) पर प्रत्येक cisapride स्टॉक समाधान के 10 μl जोड़ने सीधे स्नान करने एस.बी.-203186 शेयर समाधान के 10 μl द्वारा पीछा किया, और पर उनके प्रभाव की निगरानी संकुचन EFS प्रेरित. समानांतर स्ट्रिप्स में वाहन, DMSO के 10 μl जोड़ें. Cisapride के प्रभाव का पालन, चित्रा 6 में मानव मूत्राशय और लघ्वान्त्र ऊतकों में EFS पैदा संकुचन पर एक 5HT4 रिसेप्टर agonist,. साथ ही, मानव मूत्राशय और लघ्वान्त्र ऊतकों में EFS पैदा संकुचन पर DMSO के प्रभाव, cisapride के लिए वाहन, निरीक्षण . - EFS प्रोटोकॉल के अंत में ना + चैनल ब्लॉकर, tetrodotoxin (TTX साथ तंत्रिका संचरण अवरुद्ध करके EFS के चयनात्मकता सत्यापित; 0.5-1 और# 181, एम). TTX प्रतिरोधी संकुचन अभी भी मौजूद हैं, यह बाद के प्रयोगों में उत्तेजना की अवधि और तीव्रता को समायोजित करने के लिए सिफारिश की है.
- उत्तेजना मापदंडों की स्थापना: नीचे चरणों में वर्णित है और आंकड़े 5 ए, बी में सचित्र के रूप में प्रोत्साहन (एकल दालों या गाड़ियों), अवधि (स्पंद अवधि और ट्रेन की अवधि), आवृत्ति और तीव्रता के प्रकार.
- पूर्व या बाद synaptic साइटों पर (चित्रा 7A) दवाओं के प्रभाव का निर्धारण करने के लिए 4.3.2 करने के लिए कदम 1 का पालन करें. Carbachol के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रतिक्रियाओं की स्थापना और EFS, तो दवा एक्स जोड़ना
- प्रयोग के अंत में, unclip या स्ट्रिप्स खोल, अतिरिक्त तरल पदार्थ को खत्म करने और एक संतुलन का उपयोग कर प्रत्येक पट्टी के वजन को मापने के लिए टिशू पेपर के एक टुकड़े पर उन्हें धीरे दाग. इसके अलावा क्रॉस अनुभागीय क्षेत्र निर्धारित करने के लिए एक कैलीपर का उपयोग ऊतक लंबाई मापने. यह जानकारी डेटा को सामान्य बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है (धारा 5.4 देखें).
5 डेटा विश्लेषण
पर्याप्त सॉफ्टवेयर का उपयोग कर डेटा का विश्लेषण (जैसे, Windaq, LabChart).
- सहज गतिविधि के लिए, पहले और दवा प्रेरित प्रतिक्रिया और मुझे के चरम पर कम से कम 30 सेकंड की एक खिड़की का चयनAsure आयाम और myogenic गतिविधि की आवृत्ति (चित्रा 3).
- मूत्राशय के विभिन्न भागों के बीच मतभेद हैं प्रतिक्रियाओं सिकुड़ा और कि क्या योगदान आवृत्तियों के स्पेक्ट्रम का निर्धारण करने के लिए तेजी से फूरियर परिवर्तन विश्लेषण का प्रयोग करें (जैसे, गर्दन बनाम गुंबद) या विकास, पैथोलॉजी, और दवाओं के साथ 8.
- चिकनी मांसपेशियों टोन पर प्रभाव के लिए पहले और दवा प्रेरित प्रतिक्रिया के चरम पर कम से कम 10-30 सेकंड की एक खिड़की का चयन करें और संकुचन के आयाम को मापने.
- Neurally पैदा संकुचन पर प्रभाव के लिए पहले और दवा प्रेरित प्रतिक्रिया के चरम पर संकुचन की वक्र (कम से कम 3) के तहत आयाम, अवधि और क्षेत्र को मापने.
नोट: यह purinergic और कोलिनर्जिक घटक अलग कैनेटीक्स है क्योंकि EFS प्रेरित संकुचन की वक्र के तहत आयाम और क्षेत्र दोनों को मापने के लिए आवश्यक है. purinergic घटक तेजी से और क्षणिक है (एटीपी purinergi को सक्रियकैल्शियम की तेजी से बाढ़ की अनुमति है कि इस तरह के P2X1 के रूप में सी ionotropic चैनलों, तो वे इस प्रकार वक्र के तहत क्षेत्र के शिखर आयाम प्रतिक्रिया करने के लिए और अधिक और कम योगदान) असंवेदनशील बनाना. कोलिनर्जिक घटक (ACH अंततः एक संकुचन प्रेरित करने के लिए चिकनी पेशी बिगाड़ना कि आयन चैनल को सक्रिय करता है intracellular रास्ते को सक्रिय करने के लिए और अधिक समय की आवश्यकता होती है जो metabotropic मुस्कारिनिक रिसेप्टर्स सक्रिय) धीमी और निरंतर है. इस प्रकार, मुस्कारिनिक घटक वक्र के तहत क्षेत्र को मापने के द्वारा बेहतर कब्जा कर लिया है. - स्ट्रिप्स और औषधीय उपचार के पार परिणामों की तुलना करने के लिए सक्षम होने के लिए डेटा मानक के अनुसार. सामान्य बनाने के लिए चुना पैरामीटर रोग की स्थिति का अध्ययन या प्रयोगात्मक डिजाइन, परीक्षण यौगिकों से प्रभावित नहीं होना चाहिए. इन मानकों, उपयोग पट्टी वजन, क्रॉस अनुभागीय क्षेत्र, KCl प्रतिक्रियाओं (चित्रा 4 बी), एक और सिकुड़ा एजेंट को अधिक से अधिक प्रतिक्रिया का अधिक से अधिक प्रतिक्रिया (चित्रा 7B) या% की% के बीच(जैसे, सीसीएच) या आराम एजेंट (जैसे, papaverine).
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Representative Results
सहज myogenic गतिविधि
सहज myogenic गतिविधि प्रसव के बाद विकास 6-9 और पैथोलॉजी (जैसे, एससीआई, बू) 3-5 से परिवर्तन आए कि एक महत्वपूर्ण चिकनी पेशी विशेषता है. इस गतिविधि अति मूत्राशय (OAB) 2 के लक्षणों में योगदान माना जाता है, यह मिलाना कि रिसेप्टर्स, intracellular रास्ते और औषधीय एजेंटों की एक मूल्यांकन, OAB और अन्य चिकनी पेशी रोग के लिए प्रभावी उपचार विकसित करने के लिए उच्च ब्याज की है. . यहाँ प्रस्तुत विधि आसानी से, किशोर इन सवालों की जांच 2 नवजात (मैं) में विकास के दौरान myogenic सहज गतिविधि के विभिन्न पैटर्न दिखाता समझ सकते हैं (द्वितीय) वयस्क (तीन) और रीढ़ की हड्डी घायल चूहों (एससीआई, चतुर्थ). नवजात चूहों से स्ट्रिप्स बड़े आयाम, कम आवृत्ति लयबद्ध संकुचन (चित्रा 2Ai), प्रदर्शन, जबकि वयस्क चूहे से स्ट्रिप्सछोटे आयाम, उच्च आवृत्ति गतिविधि (चित्रा 2Aii, III) दिखा रहे हैं. एससीआई के बाद नवजात पैटर्न (चित्रा 2Aiv) फिर से उभर रहे हैं. पशु मॉडल से स्ट्रिप्स का उपयोग करने के अलावा, विभिन्न औषधीय एजेंटों सहज संकुचन अंतर्निहित तंत्र को समझने के उद्देश्य से, भोले जानवरों से स्ट्रिप्स में सहज संकुचन को उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. उपयुक्त औषधीय एजेंटों के उदाहरण मुस्कारिनिक रिसेप्टर एगोनिस्ट (carbachol; सीसीएच) शामिल हैं., (जैसे acetylcholine esterase अवरोधकों के रूप में) ACH स्तर में वृद्धि यौगिकों कि, KCl (जैसे, 20 मिमी) या अन्य प्रयोगात्मक दवाओं की कम सांद्रता आंकड़े 3 ए बी, मॉडुलन को वर्णन चिकनी पेशी पर स्थित KCNQ चैनलों पर कार्रवाई कि औषधीय एजेंटों द्वारा सहज गतिविधि की. KCNQ चैनल खोल, flupirtine, एक एकाग्रता पर निर्भर ढंग से आयाम और सहज गतिविधि की आवृत्ति कम हो जाती है (चित्रा 3Ai-III), जबकिKCNQ चैनल ब्लॉकर, XE991, आयाम कम हो जाती है लेकिन सहज गतिविधि की आवृत्ति बढ़ जाती है (चित्रा 3Bi-III).
चिकनी मांसपेशियों टोन
चिकनी मांसपेशियों टोन और सिकुड़ना गुण भंडारण और voiding दौरान मूत्राशय के समुचित कार्य के लिए महत्वपूर्ण कारक हैं. इस विधि चिकनी मांसपेशियों टोन पर औषधीय एजेंटों के प्रभाव स्क्रीन आसानी से कर सकते हैं. आंकड़े 3Aiv और 3Biv flupirtine, चिकनी मांसपेशी छूट के साथ संगत बेसल टोन, कम हो जाती है पता चलता है कि XE991 बढ़ जाती चिकनी मांसपेशियों टोन है. 4 चिकनी मांसपेशियों टोन में एकाग्रता निर्भर बढ़ जाती है दिखाता है चित्रा neuromedin बी के साथ रिसेप्टर्स bombesin सक्रिय द्वारा (कैलेंडर, चित्रा -4 ए, बी) या मुस्कारिनिक रिसेप्टर्स carbachol साथ (सीसीएच, आंकड़े 4C, डी). इसके अलावा, इन चिकनी पेशी प्रतिक्रियाओं मध्यस्थता intracellular रास्ते यू की जांच की जा सकती हैविशिष्ट modulators गाना (नहीं दिखाया डेटा).
Neurally की मध्यस्थता प्रतिक्रियाएँ और neurotransmission की Modulation
मूत्राशय संकुचन परानुकंपी अपवाही नसों से ach / एटीपी की विज्ञप्ति जारी करके हासिल की है. मूत्राशय संकुचन को मुस्कारिनिक और purinergic प्रणालियों का योगदान इस तरह मध्य cystitis, आंशिक आउटलेट बाधा, और अति मूत्राशय 26 के रूप में विकृतियों में purinergic योगदान में प्रमुख वृद्धि के साथ, प्रजातियों और रोग की स्थिति के बीच बदलता है. चित्रा 5C निर्धारित करने के लिए इस विधि का उपयोग दर्शाता है मुस्कारिनिक और purinergic घटकों का योगदान माउस से मूत्राशय स्ट्रिप्स में neurotransmission के लिए. कोलिनर्जिक घटक के योगदान, atropine मुस्कारिनिक रिसेप्टर प्रतिपक्षी का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया था. purinergic प्रणाली का योगदान purinergic रिसेप्टर उत्प्रेरक और desensitizer, अल्फा का उपयोग कर मूल्यांकन किया गया था, बीटा मिथाइलपश्चिम एटीपी (ABMA). इसके अतिरिक्त, प्रत्येक घटक की आवृत्ति निर्भर योगदान कम से उच्च आवृत्तियों (2-50 हर्ट्ज) को उत्तेजना आवृत्ति अलग से मूल्यांकन किया गया था.
मूत्राशय संकुचन की शक्ति कुशलता voiding में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. इस विधि का प्रयोग, तंत्रिका संचरण मिलाना कि रिसेप्टर्स और रास्ते रोग voiding के लिए दवा लक्ष्य के रूप में जांच की जा सकती है. 5HT4 रिसेप्टर्स परानुकंपी न्यूरॉन्स में पूर्व junctionally व्यक्त कर रहे हैं और उनके सक्रियण ACH स्तर 27 से बढ़ जाती है. 6 मानव मूत्राशय और लघ्वान्त्र स्ट्रिप्स में 5HT4 रिसेप्टर agonist, cisapride, के उत्तेजक प्रभाव दिखाता है चित्रा.
विभिन्न प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल एक परीक्षण परिसर की कार्रवाई की साइट का निर्धारण करने के लिए नियोजित किया जा सकता है. चित्रा 7A में आरेख पूर्व बनाम के बाद junctional साइटों का आकलन करने के लिए इस्तेमाल एक प्रोटोकॉल को दिखाता है. दवा एक्स कम कर देता है (या बढ़ता है) EFS प्रतिक्रिया लेकिन कोई effec है तोसीसीएच प्रतिक्रिया पर टी, कार्रवाई की सबसे अधिक संभावना साइट पूर्व junctional है. दवा एक्स बदल दोनों EFS और सीसीएच प्रतिक्रिया है, तो यह पोस्ट junctionally या दोनों से पहले और बाद junctionally स्थित रिसेप्टर्स पर कार्य कर सकते हैं.
प्रत्येक घटक की भूमिका: चिकनी पेशी, mucosa, और neuronal
विभिन्न रोग की स्थिति मूत्राशय के विभिन्न घटकों को प्रभावित कर सकते हैं. OAB बदल चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना में हो सकता है, जबकि उदाहरण के लिए मध्य cystitis (आईसी), मुख्य रूप से urothelium को प्रभावित करता है. इसके अलावा, विभिन्न रिसेप्टर्स प्रत्येक मूत्राशय घटक में व्यक्त किया जा सकता है और इस प्रकार विशेष रूप से एक निश्चित पैथोलॉजी में लक्षित किया जा सकता है. सभी मूत्राशय घटकों का शुद्ध प्रभाव को मापने के जो इन विवो तरीकों, के लिए विरोध के रूप में, यह इन विट्रो विधि शल्य चिकित्सा और औषधीय प्रक्रियाओं का एक संयोजन का उपयोग करके विशेष घटक की जांच की अनुमति देता है. न्यूरोनल के अभाव में चिकनी मांसपेशी संकुचन / छूट का परीक्षण करने के लिएट्रांसमिशन, TTX (0.5-1 माइक्रोन) स्नान करने के लिए जोड़ा जा सकता है. चित्रा 4 में, कैलेंडर और सीसीएच TTX की उपस्थिति में परीक्षण किया गया. चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना को म्यूकोसा (urothelium और लामिना propria) के योगदान का परीक्षण करने के लिए, के साथ और mucosal परत बिना स्ट्रिप्स. तुलना चित्रा 7B सीसीएच प्रतिक्रियाओं सुअर 28 में म्यूकोसा की उपस्थिति में कम कर रहे हैं पता चलता है कि कर रहे हैं. इसी तरह के परिणाम मानव मूत्राशय स्ट्रिप्स 29 में सूचित किया गया है. तंत्रिका तंतुओं की भूमिका का परीक्षण करने के लिए, कई दृष्टिकोण लिया जा सकता है. एक सक्रिय या औषधीय एजेंटों का उपयोग करते हुए विशिष्ट तंतुओं को बाधित करने के लिए है. उदाहरण के लिए, capsaicin अभिवाही नसों की एक विशिष्ट जनसंख्या सक्रिय है और प्रजातियों निर्भर चिकनी मांसपेशी संकुचन या विश्राम 17,18 का कारण बनता है. Guanethidine इस प्रकार इन तंतुओं के योगदान को नष्ट करने, सहानुभूति फाइबर से norepinephrine के रिलीज को रोकता है. एक और दृष्टिकोण / असंवेदनशील विवो में विशिष्ट तंतुओं को खत्म करने के लिए हैप्रयोग करने से पहले. उदाहरण के लिए, capsaicin के साथ पशुओं के प्रणालीगत उपचार capsaicin संवेदनशील अभिवाही नसों desensitizes. इस तैयारी में अध्ययन किया जा सकता है कि अन्य मूत्राशय घटकों को सक्रिय या विशिष्ट एजेंटों के साथ उन्हें रोकने के द्वारा बीचवाला कोशिकाओं या अंतराल जंक्शनों हैं.
प्रजातियों मतभेद
सबसे नशीली दवाओं के विकास मानव विकारों के उपचार के लिए करना है, वहीं बुनियादी शोध मुख्य रूप से पशु ऊतक में किया जाता है. प्रजाति मतभेद रिसेप्टर्स की संख्या में मौजूद हैं. उदाहरण के लिए, 5HT4 रिसेप्टर एगोनिस्ट मानव मूत्राशय में neurally पैदा संकुचन बढ़ाने पर चूहे मूत्राशय 19,30 में, EFS प्रेरित संकुचन स्थिर मूत्राशय 31 से मानव और पुरानी दुनिया बंदर निस्सारिका में लगभग विशेष atropine के प्रति संवेदनशील है, लेकिन आंशिक रूप से बन रहे हैं नहीं atropine प्रतिरोधी मानव निस्सारिका में अस्थिर मूत्राशय की स्थिति (जैसे, तंत्रिकाजन्य, obstructe साथ रोगियों सेडी मूत्राशय) 15,32,33, capsaicin चूहे और मानव मूत्राशय स्ट्रिप्स में एक उत्तेजक प्रतिक्रिया, सुअर मूत्राशय स्ट्रिप्स और गिनी पिग मूत्राशय स्ट्रिप्स 17,18 में निरोधात्मक प्रतिक्रिया में कोई प्रतिक्रिया elicits. रिसेप्टर एगोनिस्ट bombesin पर उत्तेजक प्रभाव है कि 4 से पता चलता है चूहे मूत्राशय और माउस और सुअर मूत्राशय स्ट्रिप्स 16 पर कोई प्रभाव. यह जानकारी एक विशिष्ट रिसेप्टर के अध्ययन के लिए उपयुक्त पशु मॉडल के चयन के लिए महत्वपूर्ण है.
अंग भर में संवेदनशीलता की तुलना करें
मूत्राशय विकारों के उपचार के लिए इरादा ड्रग्स भी इस पद्धति की ओर से विभिन्न ऊतकों पक्ष तुलना द्वारा एक औषधीय एजेंट को अंग चयनात्मकता और संवेदनशीलता के आकलन की अनुमति देता है जैसे जठरांत्र संबंधी मार्ग, मूत्रमार्ग, पित्ताशय की थैली, के रूप में अन्य अंगों से चिकनी मांसपेशियों को प्रभावित कर सकता है. Cisapride चित्रा 6, 5HT4 रिसेप्टर agonist, में सचित्र के रूप में, अलग किया गया हैलघ्वान्त्र ऊतक बनाम मानव मूत्राशय में ईएनटी प्रभावकारिता और शक्ति.
प्रयोगात्मक सेट अप के चित्रा 1 प्रयोगात्मक सेट अप और मूत्राशय पट्टी तैयारी. ए) योजनाबद्ध. मूत्राशय स्ट्रिप्स 37 में वातित क्रेब्स समाधान के साथ भरा ऊतक कक्षों में रखा पानी में डुबोया रहे एक परिसंचारी पानी पंप के माध्यम से सी °. पट्टी के एक छोर पर एक निश्चित रॉड करने, अन्य ऊतक सिकुड़ना को मापने के लिए एक isometric बल transducer से जुड़ा हुआ है. बल ट्रांसड्यूसर डेटा रिकॉर्डिंग के लिए एक एम्पलीफायर और कंप्यूटर से जुड़ा है. एक उत्तेजक से जुड़े बिजली के क्षेत्र उत्तेजना इलेक्ट्रोड कक्ष में रखा और neurally की मध्यस्थता मूत्राशय संकुचन evoking के लिए उपयोग किया जाता है. ऊतक स्ट्रिप्स के बी) तैयार करना. मूत्राशय एक डिश में नीचे टिकी है और निम्नलिखित प्रक्रियाओं प्रदर्शन कर रहे हैं: # 1 ऊर्ध्वाधर कटौती वेंमूत्रमार्ग से गुंबद को मूत्राशय की ough उदर आधा एक फ्लैट शीट में मूत्राशय खोलने के लिए. # मूत्राशय / समीपस्थ मूत्रमार्ग के गुंबद और आधार को हटाने 2 क्षैतिज कटौती. . पट्टी घटकों के # बराबर स्ट्रिप्स में मध्य मूत्राशय विभाजित 3 ऊर्ध्वाधर कटौती (एक चूहे मूत्राशय से 4 स्ट्रिप्स) सी) योजनाबद्ध: चिकनी मांसपेशियों और म्यूकोसा, दोनों युक्त अभिवाही (नीला) और अपवाही (हरा) तंत्रिकाओं. म्यूकोसा urothelium और लामिना propria के होते हैं. लामिना propria रक्त वाहिकाओं [1], [2] बीचवाला सेल शामिल हैं, और mucosae पेशीय [3]. # 2 बी लेबल बिंदीदार रेखा म्यूकोसा परत को हटाने के लिए प्रक्रिया को इंगित करता है. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
विकास के दौरान और बाद 2 myogenic सहज गतिविधि चित्रापैथोलॉजी. ए) नवजात (मैं में सहज गतिविधि के उदाहरण), घायल किशोर (द्वितीय), रीढ़ की हड्डी बरकरार वयस्क (तीन) और रीढ़ की हड्डी (एससीआई) वयस्क (चतुर्थ) चूहा मूत्राशय स्ट्रिप्स. एससीआई चूहे की जांच की चार समूहों में आयाम (बी) और सहज संकुचन की आवृत्ति (सी) की सर्जरी. बी, सी) सारांश के बाद 4 सप्ताह में इस्तेमाल किया गया था. (Artim डे, Kullmann एफए, Daugherty SL, Bupp ई, एडवर्ड्स सीएल, डी ग्रोट WC से अनुमति के साथ Reproduced Neurourol Urodyn 2011 नवम्बर, 30 (8):.. 1666-1674.) इस का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें आंकड़ा.
Myogenic सहज गतिविधि और चिकनी मांसपेशियों टोन की चित्रा 3 Modulation. ए) KCNQ चैनल खोलने का प्रभाव, flupirtine, सहज गतिविधि और वयस्क चूहे मूत्राशय स्ट्रिप्स में आधारभूत टोन पर. (मैं) Flupirtine तीर द्वारा संकेत समय पर सांद्रता (संचयी) बढ़ाने में जोड़ा गया है. नियंत्रण के दौरान और 10 माइक्रोन और 50 माइक्रोन flupirtine के आवेदन के बाद पट्टी गतिविधि का पता लगाने के शो 4 मिनट के तहत enlargements. आयाम पर (II-IV) flupirtine के प्रभाव का सारांश (4 चूहों से 7 स्ट्रिप्स) (ख) और (iv), नियंत्रण (पूर्व दवा) मूल्यों से% परिवर्तन के रूप में व्यक्त (iii) सहज गतिविधि और आधारभूत स्वर की आवृत्ति , जो) 100%. बी को सहज गतिविधि और वयस्क चूहे मूत्राशय स्ट्रिप्स में आधारभूत स्वर पर KCNQ चैनल ब्लॉकर, XE991, के प्रभाव स्थापित किए गए थे. (मैं) XE991 तीर द्वारा संकेत समय पर सांद्रता (संचयी) बढ़ाने में जोड़ा गया है. ट्रेस के तहत enlargements नियंत्रण के दौरान और 10 माइक्रोन और 50 माइक्रोन XE991 के आवेदन के बाद पट्टी गतिविधि के 2 मिनट दिखा. पर (II-IV) XE991 के प्रभाव का सारांश (4 चूहों से 9 स्ट्रिप्स)आयाम (द्वितीय) और आवृत्ति (iii) (चतुर्थ), 100% करने के लिए निर्धारित किया गया है जो नियंत्रण (पूर्व दवा) मूल्यों से% परिवर्तन के रूप में व्यक्त सहज गतिविधि और आधारभूत स्वर की. यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चूहे मूत्राशय स्ट्रिप्स में बी (कैलेंडर) neuromedin bombesin रिसेप्टर agonist के जवाब में चित्रा 4 प्रजाति मतभेद. ए) एकाग्रता निर्भर चिकनी मांसपेशी संकुचन,,. बी) चूहा मूत्राशय स्ट्रिप्स में चिकनी मांसपेशी संकुचन पर कैलेंडर के प्रभाव का सारांश. डाटा KCl के लिए सामान्यीकृत कर रहे हैं (80 मिमी) प्रतिक्रिया. सी, डी) माउस (सी) और सुअर (डी) मूत्राशय स्ट्रिप्स में कैलेंडर के लिए प्रतिक्रियाओं का अभाव. Carbachol (सीसीएच) मजबूत एकाग्रता निर्भर चोर elicitsस्ट्रिप्स उत्तेजनाओं पर प्रतिक्रिया कर सकते यह दर्शाता है कि दोनों माउस और सुअर स्ट्रिप्स में tractions,. TTX (0.5 माइक्रोन) सभी स्ट्रिप्स में स्नान में उपस्थित थे. (. Kullmann एफए, McKenna डी, वेल्स सैनिक, थोर KB neuropeptides 2013 अक्टूबर से अनुमति के साथ Reproduced, 47 (5):. 305-13) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
एकल पल्स उत्तेजना मापदंडों के 5 चित्रा बिजली क्षेत्र उत्तेजना. ए) योजनाबद्ध. लघुरूप: डी = नाड़ी, मैं की अवधि = नाड़ी की तीव्रता, आईपीआई = अंतर नाड़ी अंतराल बी) योजनाबद्ध ट्रेन उत्तेजना मापदंडों की.. लघुरूप: टीडी = ट्रेन अवधि, मैं = नाड़ी की तीव्रता, आईटीआई इंटर ट्रेन अंतराल =. इनसेट एक ट्रेन में दालों की संख्या और अंतराल betw से पता चलता हैएक साथ सफर अवधि के साथ ट्रेन में उत्तेजना की आवृत्ति निर्धारित है, जो उन्हें een. सी) Purinegic और कोलिनर्जिक घटकों का योगदान मूत्राशय संकुचन neurally पैदा करने के लिए. EFS-एफआर उत्तेजना आवृत्तियों, 2, 5, 10, 20, 50 हर्ट्ज का प्रतिनिधित्व करते हैं. हर 90 सेकंड वितरित तीन उत्तेजनाओं प्रत्येक आवृत्ति के लिए परीक्षण किया गया है और प्रत्येक आवृत्ति श्रृंखला में दो बार नियंत्रण में और दो बार प्रत्येक यौगिक जोड़ने के बाद दोहराया गया था. अल्फा, बीटा methylene एटीपी, ABMA (पट्टी 1), purinergic रिसेप्टर्स और atropine (पट्टी 2) मुस्कारिनिक रिसेप्टर्स ब्लॉक करने के लिए इस्तेमाल किया गया था असंवेदनशील करने के लिए इस्तेमाल किया गया था संक्षिप्त. पट्टी 3 नियंत्रण के रूप में सेवा की है और वाहन, पानी के साथ इलाज किया गया था. प्रत्येक यौगिक प्रत्येक पट्टी करने के लिए जोड़ा गया था जब तीर समय का संकेत मिलता है. वाहन से प्रभावित नहीं हैं, जबकि EFS पैदा संकुचन दृढ़ता, ABMA और atropine से कम कर रहे हैं कि ध्यान दें. EFS 20 हर्ट्ज पर दिया गया था, जबकि TTX प्रयोग के अंत में जोड़ा गया है. नियंत्रण में मनाया कि शेष संकुचन नोटपट्टी 3 (अंदर नसों से ट्रांसमीटर रिहाई द्वारा शुरू IE) उनके तंत्रिका स्वभाव का प्रदर्शन, TTX द्वारा समाप्त कर दिया गया. # EFS के अभाव में ABMA को चिकनी पेशी प्रतिक्रियाओं को इंगित करता है. स्केल सलाखों एक्स अक्ष के लिए 5 मिनट और वाई अक्ष के लिए 2 जी रहे हैं. यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
चित्रा neurally पैदा मूत्राशय संकुचन की 6 Modulation. ए, बी) 5HT4 रिसेप्टर agonist द्वारा neurally पैदा संकुचन की वृद्धि के उदाहरण, मानव मूत्राशय (ए) और लघ्वान्त्र स्ट्रिप्स (बी) में cisapride. Cisapride (काला रिकॉर्ड) या DMSO (ग्रे रिकॉर्ड) तीर द्वारा संकेत टाइम्स में एक एकाग्रता निर्भर ढंग से जोड़ा गया है. प्रत्येक पैनल में रिकॉर्ड नीचे काले सलाखों20 हर्ट्ज हर 120 सेकंड में दिया 10 सेकंड गाड़ियों के शामिल जो EFS का प्रतिनिधित्व करते हैं. कार्यक्षेत्र स्केल सलाखों सभी उदाहरण के लिए 1 ग्राम हैं. TTX एकाग्रता 0.5 माइक्रोन मूत्राशय स्ट्रिप्स (सी, डी) और लघ्वान्त्र स्ट्रिप्स में cisapride (काली सलाखों) या DMSO (धूसर बार) के जवाब में वक्र EFS पैदा संकुचन की (नीलामी) के तहत क्षेत्र की. सीएफ) सारांश (ई था , एफ). सीएफ में, एस.बी. 5HT4 रिसेप्टर प्रतिपक्षी के अलावा के बाद प्राप्त आंकड़ों का सारांश का प्रतिनिधित्व, एस.बी.-203186 के लिए खड़ा है. बिंदीदार लाइनों 100% के लिए सेट और नियंत्रण का प्रतिनिधित्व कर रहे हैं. (Kullmann एफए, Kurihara आर, सुनो एल, वेल्स सैनिक, McKenna महानिदेशक, Burgard चुनाव आयोग, थोर KB से अनुमति के साथ Reproduced Auton नयूरोस्की 2013 जून, 176 (1-2):... 70-7) एक देखने के लिए यहां क्लिक करें इस आंकड़े का बड़ा संस्करण.
फाईएक दवा की कार्रवाई की साइट की पहचान करने के लिए gure दवाओं और मूत्राशय. एक के विभिन्न घटकों की भूमिका की कार्रवाई की 7 साइटें) प्रोटोकॉल के योजनाबद्ध. स्ट्रिप्स ESF और carbachol (सीसीएच) के साथ प्रेरित कर रहे हैं. मैं दवा एक्स में कार्रवाई की एक पूर्व junctional साइट का संकेत है, EFS प्रतिक्रिया नहीं बल्कि सीसीएच प्रतिक्रिया कम कर देता है. द्वितीय में, दवा एक्स के बाद junctional या दोनों से पहले और बाद junctional रिसेप्टर्स पर एक कार्रवाई का संकेत, दोनों प्रतिक्रियाओं बदल. बी चिकनी मांसपेशी संकुचन पर म्यूकोसा के) प्रभाव. Carbachol के प्रभाव (denuded) हटा म्यूकोसा साथ स्ट्रिप्स की तुलना म्यूकोसा वर्तमान (बरकरार) के साथ स्ट्रिप्स में कम हो रहे हैं. (. बी नागफनी महाराष्ट्र, चप्पले सीआर, मुर्गा एम, शतरंज विलियम्स आर Br जम्मू Pharmacol 2000 फरवरी से अनुमति के साथ reproduced है, 129 (3): 416-9). इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
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Discussion
इस पत्र में हम मूत्राशय फिजियोलॉजी और पैथोलॉजी, साथ ही मूत्राशय रोग के इलाज के लिए नई दवाओं की खोज में सहायता करने के लिए संबंधित महत्वपूर्ण वैज्ञानिक सवालों का एक नंबर का पता करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि इन विट्रो चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना विधि में एक सरल वर्णन किया. हम मूत्राशय चिकनी मांसपेशियों सिकुड़ना की, विकास, रोग और औषधीय गुणों (आंकड़े 2-4), neurotransmission मॉडुलन (आंकड़े 5-7A), प्रजातियों मतभेद (चित्रा 4), अंग मतभेद का आकलन करने के लिए इस विधि का उपयोग सचित्र है (चित्रा 6) और विशिष्ट मूत्राशय घटकों की प्रासंगिकता (उदाहरण के लिए, म्यूकोसा, चित्रा 7B). यहाँ सचित्र नहीं अतिरिक्त अनुप्रयोगों औषधीय एजेंटों 3,10,11, विभिन्न दवाओं 22-24, या मूल्यांकन / ट्रांसमीटर rele की मात्रा का ठहराव की संरचना गतिविधि रिश्तों का उपयोग intracellular रास्ते के मूल्यांकन में शामिलतंत्रिका उत्तेजना 25 के बाद ase.
मूत्राशय समारोह अंततः vivo में मूल्यांकन किया जा सकता है, यह इन विट्रो विधि विवो में समस्याग्रस्त हैं कि कई स्थितियों पर काबू पा. ये शल्य चिकित्सा और औषधीय जोड़तोड़ व्यवहार्यता और / या अंग या पशु, मानव ऊतक के उपयोग के अस्तित्व को कम करेगा जब स्थितियों में शामिल हैं, जरूरत की पहचान और विशिष्ट घटकों (नसों बनाम उपकला बनाम जैसे, चिकनी पेशी से प्रतिक्रियाओं की विशेषताएँ ) या महंगी रसायनों के उपयोग. विधि चिकनी मांसपेशियों की सिकुड़ा गतिविधि पर और एक अच्छी तरह से नियंत्रित फैशन और वातावरण में व्यवस्थित विभिन्न औषधीय एजेंटों के प्रभाव की जांच के साथ ही पैथोलॉजी की अनुमति देता है.
विधि जानकारी के ढेर सारे प्रदान करता है; व्याख्या और इस जानकारी extrapolating हालांकि, जब ध्यान रखा जाना चाहिए. यह एक कम तैयारी की इन विट्रो विधि, जिले हैअपनी सामान्य वातावरण और तंत्रिका नियंत्रण से जुड़ा हुआ है. प्रयोगात्मक शर्तों इस प्रकार डेटा पूरी तरह विवो शारीरिक स्थितियों में शामिल न हो, शारीरिक नहीं कर रहे हैं. उदाहरण के लिए, विधि रक्त प्रवाह, हार्मोन, humoral पदार्थ, बाह्य यांत्रिक बलों, या बाह्य तंत्रिका नियंत्रण में बदलाव के लिए खाते में नहीं कर सकते हैं. ऊतक तीव्रता से इस प्रकार की चोट और ischemia संबंधी प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन और ध्यान में रखा जाना चाहिए, विकेन्द्रीकृत है. वे पहले से ही अभिवाही, चिकनी पेशी, म्यूकोसा या अंदर का तंत्रिका समारोह (यानी सेलुलर प्लास्टिसिटी) बदल दिया है जब तक कि मस्तिष्क या रीढ़ की हड्डी में होने वाली रोग परिवर्तन इस विधि का उपयोग कर परीक्षण नहीं किया जा सकता. बिजली के क्षेत्र उत्तेजना (EFS) neurally मध्यस्थता प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन की अनुमति देता है. Micturition पलटा केवल विशेष pathw सक्रिय है जहां इन विवो स्थिति के लिए विरोध के रूप में हालांकि, यह पट्टी (जैसे, सहानुभूति, parasympathetic, afferents) में अंधाधुंध सभी तंत्रिकाओं को उत्तेजितays. इस स्थिति पर काबू पाने के लिए एक तरह से चुनिंदा अलग रास्ते ब्लॉक कि विशिष्ट विरोधी के साथ EFS गठबंधन है. उदाहरण के लिए, guanethidine संकुचन गुणों का अध्ययन करते norepinephrine रिहाई ब्लॉक करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, या atropine छूट गुणों का अध्ययन करते मूत्राशय संकुचन को रोकने के लिए मुस्कारिनिक रिसेप्टर्स ब्लॉक करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. अंत में, ऊतक की व्यवहार्यता घंटे की एक निश्चित संख्या तक सीमित है. सामान्य में, मूत्राशय ऊतक के सबसे घटकों 6-8h या उससे अधिक समय की अवधि में (बिगड़ती प्रतिक्रियाओं के बिना EFS का जवाब देने यानी) व्यवहार्य और स्थिर हैं. हालांकि, अन्य ऊतकों अधिक संवेदनशील हो सकता है (; लेखक का व्यक्तिगत अनुभव जैसे, लघ्वान्त्र ~ 6 घंटे या उससे कम समय तक रहता है).
विधि तकनीकी रूप से संभव है और अच्छा reproducibility के साथ है, इसकी सफलता सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक कई महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं. सबसे पहले, ऊतक तैयारी आवश्यक परिवर्तन करके व्यवहार्यता सुनिश्चित करने के लिए सावधानी से किया जाना चाहिएविच्छेदन की प्रक्रिया के लिए विभिन्न प्रकार के ऊतकों या प्रजातियों के लिए यदि आवश्यक हो तो और / या मीडिया (स्ट्रिप्स तैयार करते समय ऊतक खींच से बचने). एक और महत्वपूर्ण कदम सेटिंग अप छत प्रभाव परहेज कर रहे हैं कि इस तरह के neuronal उत्तेजना मापदंडों. विधि अनुभाग में वर्णित है, इस परीक्षण परिसर की कार्रवाई का प्रयोग किया है और उम्मीद तंत्र के प्रकार पर निर्भर करता है. उदाहरण के लिए, मूत्राशय स्ट्रिप्स पर, चित्रा (6) cisapride, एक 5HT4 रिसेप्टर agonist के प्रभाव के परीक्षण के लिए, हम अधिक से अधिक की ~ 50% करने के लिए EFS पैदा संकुचन के आयाम निर्धारित किया है. इस अर्थात् बारी में EFS पैदा संकुचन वृद्धि की संभावना है, जो पूर्व junctional parasympathetic नसों 27 से ACH रिहाई बढ़ाने 5HT4 रिसेप्टर एगोनिस्ट, की कार्रवाई की जाना जाता तंत्र पर आधारित थी. नसों बनाम मांसपेशियों की उत्तेजना EFS पैदा संकुचन को रोकना चाहिए, इस प्रकार तंत्रिका संचरण को रोकता है और जो TTX, का उपयोग कर परीक्षण किया जाना चाहिए. वाहन और टिम के लिए पर्याप्त नियंत्रणई समय के साथ ऊतक की गिरावट के लिए खाते में दवा परीक्षण के दौरान और वाहन के किसी भी संभावित प्रभावों के लिए किया जाना चाहिए. उदाहरण के लिए, कई दवाओं DMSO या इथेनॉल में भंग कर रहे हैं. हमारे डेटा (चित्रा 6) DMSO (0.1% और अधिक), परीक्षण दवा के प्रभाव से घटाया जा करने की जरूरत है जो एक प्रभाव neurally पैदा संकुचन बढ़ा सकते हैं. इसी तरह, इथेनॉल (1%) के लिए सहज चिकनी मांसपेशी संकुचन कम कर देता है लेकिन neurally पैदा संकुचन 34,35 पर कोई प्रभाव नहीं है. अनुवांशिक इंजीनियर जानवरों या शल्य मॉडल (जैसे, रीढ़ की हड्डी में चोट या ovariectomy) का उपयोग करते हैं, तो नियंत्रण क्रमशः उपयुक्त पृष्ठभूमि माउस तनाव या दिखावा संचालित जानवरों से ऊतक को शामिल करना चाहिए. इसके अलावा, इस तरह के मानव, माउस और गिनी पिग मूत्राशय के रूप में कुछ ऊतकों, अंदर का गैन्ग्लिया होते हैं. इन ऊतकों के साथ काम करते हैं, प्रोटोकॉल चयन और डेटा व्याख्या अंदर का पूर्वोत्तर पर दवाओं या EFS के कारण प्रभाव में रखना चाहिएआगे चिकनी मांसपेशियों को प्रोत्साहित कि urons.
, प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल डिजाइनिंग का परीक्षण किया जा करने के लिए (दवा उत्तेजना के लिए, EFS के लिए) सही मापदंडों को चुनने और सांद्रता सार्थक डेटा सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं. मापदंडों व्यक्तिगत ऊतकों और दवाओं, सामान्य सिद्धांतों के लिए समायोजित किया जाना चाहिए जबकि / नीचे दिये दिशा निर्देशों के लागू होते हैं. संचयी एकाग्रता प्रतिक्रिया घटता हालांकि इस सब यौगिकों के लिए संभव नहीं है, वांछित हैं. ऐसे ऊतक (उदाहरण ACH) में जल्दी metabolized हैं कि purineric ionotropic रिसेप्टर्स (P2X), या दवाओं के रूप में असंवेदनशील है कि रिसेप्टर्स को लक्षित ड्रग्स, मज़बूती से एक ही ऊतक में संचयी एकाग्रता प्रतिक्रिया घटता का उपयोग कर परीक्षण नहीं किया जा सकता. इन मामलों में, एक सांद्रता ऊतक के विभिन्न समूहों में जांच की जाती है. Desensitization का मूल्यांकन करने के लिए, यह एक संचयी एकाग्रता के अंत में हासिल की है कि करने के लिए एक एकल सर्वोच्च एकाग्रता से हासिल प्रतिक्रिया की भयावहता तुलना करने के लिए सिफारिश की हैप्रतिक्रिया वक्र.
एकाग्रता प्रतिक्रिया घटता से प्राप्त आंकड़ों की सटीक फिटिंग के लिए, यह आधा लॉग सांद्रता (चित्रा 6 में उदाहरण सीसीएच) का परीक्षण करने के लिए वांछनीय है. ऊतक व्यवहार्यता सीमित किया जा सकता है या अन्य बाधाओं जगह में हो सकता है लेकिन, जब लॉग सांद्रता (चित्रा -4 ए में उदाहरण NMB) स्वीकार्य हैं.
एक उपन्यास परिसर के लिए एक एकाग्रता श्रेणी का चयन करने के लिए, प्रारंभिक प्रयोगों में, यह 10 के दो शक्ति है कि एकाग्रता से ऊपर और नीचे यौगिक और परीक्षण के बंधन आत्मीयता विचार करने के लिए उपयोगी है. बाद के प्रयोगों में, प्रोटोकॉल दवा का कोई असर नहीं देखा गया है, जहां एक प्रारंभिक बिंदु और प्रतिक्रिया अधिक से अधिक है या परीक्षण किया एकाग्रता नहीं रह इच्छित लक्ष्य के लिए विशिष्ट है जहां या तो एक अंत बिंदु निर्धारित करने के लिए परिष्कृत किया जाता है.
एक) समय एक के लिए: एक दवा को लागू करने के लिए समय अंतराल विचार कई कारकों को ध्यान में रखकर चुना जाना चाहिएदवा एक प्रभाव है. (- 3 घंटा 30 मिनट) झिल्ली रिसेप्टर्स को लक्षित सामान्य दवाओं में intracellular लक्ष्यों के लिए दवाओं जबकि (जैसे, forskolin और अन्य एंजाइम inhibitors 36, बोटुलिनम विष 37) अतिरिक्त ऊष्मायन समय की आवश्यकता होती है, एक अपेक्षाकृत तेजी से प्रतिक्रिया (सेकंड मिनट) है. साथ ही, ऊतक मोटाई एक भूमिका निभा सकते हैं. ख) अवधि और दवा की कार्रवाई की व्यवस्था. मामलों के लिए दवा प्रभाव चित्रा 6 में एक ऐसी चित्रा -4 ए में कैलेंडर के रूप में निरंतर है कि पठार, और cisapride पहुँचता है, दवा अनुप्रयोगों के बीच 5-15 मिनट का समय अंतराल पर्याप्त डेटा इकट्ठा करने के लिए पर्याप्त हैं. यह दवाओं कार्रवाई या कार्रवाई के विभिन्न तंत्र (एटीपी, सीसीएच) की एक बहुत छोटी अवधि होने के साथ संभव नहीं है. उदाहरण के लिए चित्रा 4C या 4D में सीसीएच के प्रभाव, तेजी से एक पठार तक पहुँच जाता है, लेकिन ऊतक तनाव आधारभूत पर लौटने के लिए जाता है. इस मामले में, समय अंतराल के अनुसार समायोजित करने की आवश्यकतापहली प्रतिक्रिया एक अधिकतम तक पहुँच जाता है जब ly, आमतौर पर अगले एकाग्रता जोड़ने.
डेटा विश्लेषण, स्ट्रिप्स के बीच तुलना की अनुमति के लिए डेटा की विशेष रूप से सामान्य बनाने के लिए एक बहुत ही महत्वपूर्ण कदम है. विभिन्न अध्ययनों एक और सिकुड़ा एजेंट (जैसे, सीसीएच 38) को अधिक से अधिक प्रतिक्रिया का अधिक से अधिक प्रतिक्रिया 28 या% की पट्टी वजन 38, पट्टी पार अनुभागीय क्षेत्र 39, KCl प्रतिक्रिया 12% सहित सामान्य बनाने के लिए विभिन्न मापदंडों का उपयोग करें. सामान्य बनाने पैरामीटर प्रयोग के उद्देश्य के आधार पर चुना जाना चाहिए, पैरामीटर परीक्षण यौगिकों, पैथोलॉजी या प्रयोगात्मक डिजाइन से प्रभावित नहीं है कि इस तरह के. उदाहरण के लिए, KCl प्रतिक्रिया को सामान्य बनाने के लिए वजन और स्ट्रिप्स के अन्य आयामों को समाप्त, और इस प्रकार रोग की स्थिति स्ट्रिप्स (जैसे, मधुमेह मूत्राशय जन बढ़ जाती है) का वजन बढ़ सकता है जहां ऊतकों में प्रतिक्रियाओं की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, पुनःKCl को sponse म्यूकोसा / urothelium 29 के हटाने से प्रभावित नहीं है, इस प्रकार मूत्राशय (जैसे, म्यूकोसा बनाम चिकनी मांसपेशियों) के विभिन्न घटकों के मूल्यांकन के प्रयोगों में इस्तेमाल किया जा सकता है.
संक्षेप में, इस सिकुड़ना विधि मूत्राशय (और अन्य अंग) फिजियोलॉजी और औषध विज्ञान का आकलन करने के लिए एक तेज, आसान और बहुत शक्तिशाली तरीका प्रदान करता है. ठीक से इस्तेमाल किया जाता है, यह एक कम है और अच्छी तरह से नियंत्रित वातावरण में ऊतक हेरफेर करने की क्षमता प्रदान करता है. मूत्राशय समारोह के अध्ययन में, इस विधि ऐसे antimuscarinics के रूप में वर्तमान में OAB प्रबंधन के लिए इस्तेमाल यौगिकों की खोज और परीक्षण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई और नव 3 एआर एगोनिस्ट β विकसित किया गया.
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Disclosures
लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषणा.
Acknowledgments
इस अध्ययन पौंड के लिए एनआईएच R37 DK54824 और R01 DK57284 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Tissue Bath System with Reservoir | Radnoti, LLC | 159920 | isolated tissue baths |
| Warm water recirculator pump | Kent Scientific Corporation | TPZ-749 | to keep tissue baths to 37 °C |
| Computer | |||
| Data Acquisiton System | DataQ Instruments | DI-710-UH | To view, record and analyze data |
| Transbridge Transducer Amplifier | World Precision Instruments | SYS-TBM4M | Transducer amplifier |
| Grass stimulator | Grass Technologies | Model S88 | Stimulator |
| Anesthesia System | Kent Scientific Corporation | ACV-1205S | To anesthetesize the animal |
| Anesthetizing Box | Harvard Apparatus | 500116 | To anesthetesize the animal |
| Anesthesia Masks | Kent Scientific Corporation | AC-09508 | To anesthetesize the animal |
| Materials and Surgical Instruments | |||
| Sylgard | Dow Corning Corp | 184 SIL ELAST KIT | To pin, dissect, & cut tissue |
| Petri Dish | Corning | 3160-152 | To dissect/cut tissue |
| Insect Pins | ENTOMORAVIA Austerlitz Insect Pins | Size 5 | To pin tissue |
| Bench Pad | VWR International | 56617-014 | Absorbent bench underpads |
| Rat surgical Kit | Kent Scientific Corporation | INSRATKIT | To remove and dissect tissue |
| 2 Dumont #3 Forceps | Kent Scientific Corporation | INS500064 | To remove and dissect tissue |
| Tissue Forceps | Kent Scientific Corporation | INS500092 | To remove and dissect tissue |
| Scalpel | Kent Scientific Corporation | INS500236 | To remove and dissect tissue |
| Scalpel blade | Kent Scientific Corporation | INS500239 | To remove and dissect tissue |
| Professional Clipper | Braintree Scientific, Inc. | CLP-223 45 | To remove fur |
| Suture Thread | Fine Science Tools | 18020-50 | Tie tissue |
| Tissue Clips | Radnoti, LLC | 158802 | Attach tissue to rod/transducer |
| 1 g weight | Mettler Toledo | 11119525 | For transducer calibration |
| Chemicals | |||
| Krebs Solution: Sodium chloride Potassium chloride Monobasic potassium phosphate Magnesium sulfate Dextrose Sodium bicarbonate Calcium chloride Magnesium chloride |
Sigma Fisher Fisher Fisher Fisher Sigma EMD Baker |
S7653 P217-500 P285-3 M65-500 D16-500 S5761 CX0130-2 2444 |
To prepare Krebs solution |
| Isoflurane | Henry Schein | 029405 | To anesthetesize the animal |
| Oxygen tank | Matheson Tri Gas | ox251 | To use with anesthesia system |
| Carbogen Tank (95% Oxygen; 5% Carbon Dioxide) | Matheson Tri Gas | Moxn00hn36D | To aerate Krebs solutions |
References
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