Name: E15小鼠胚胎在子宫内侧脑室注射和电穿孔 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: 学习E15小鼠胚胎子宫内脑室注射与电穿孔技术，用于发育神经科学研究。该方法结合微量注射和电穿孔，实现基因靶向调控，为研究大脑发育和基因功能提供可靠工具。

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作者无任何利益冲突需要披露。

e15小鼠胚胎的子宫内脑室内注射与电穿孔技术

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

子宫内活体注射与电穿孔技术用于胚胎小鼠新皮质，为操控侧脑室壁上单个前体细胞提供了有力工具。该技术现已被广泛用于研究皮质发生过程，通过基因过表达或敲低，观察其对细胞增殖、迁移和分化的影响。与传统基因敲除策略相比，子宫内电穿孔可在特定时间窗口内快速操控一群细胞。本视频方案中，我们概述了实验操作流程：小鼠术前准备、经剖腹手术暴露子宫角、向发育中胚胎的侧脑室注射DNA、将DNA电穿孔导入侧壁排列的前体细胞，以及术后动物护理。本实验室通常在胚胎第13至16天（E13–E16）的小鼠上进行该手术，但最常用时间为E15，本视频即以E15为例展示。

E15小鼠胚胎的子宫内脑室内注射与电穿孔技术

子宫内活体注射与电穿孔转染胚胎小鼠新皮层是一种强大的技术，可用于操控单个神经前体细胞……

大家好，我是来自Krete实验室的William Tis。今天，我和同事们将向大家展示如何对E15小鼠胚胎进行子宫内注射。大家好，我叫Laura Elias。今天我将向您展示如何制备显微注射移液管，并为即将进行的脑室内注射和电穿孔操作装载移液管。我叫David Castaneda，今天我将协助完成小鼠胚胎的活体子宫内注射。我们将把质粒DNA注射到发育中小鼠胚胎的侧脑室中。我们以这些胚胎的CE皮层为靶区，以便获得胶质细胞表达的不同分子，并在后续发育过程中转变为神经元。进行子宫内注射时，需要使用几项重要工具，现在我将向您展示。我们使用的是持针器和几把显微镊子。一种，一对带锯齿的，另一对末端带有一个小齿。我们使用一把止血钳。这是一把剪刀。然后使用这两把吻合器。这是用于大鼠的较大型号，这是用于小鼠的较小型号。使用7号订书钉，而这个使用9号订书钉，它们均为弹簧加载。我们在此处用于辅助手术的一些器械，仅包括一个带有双头的简易光纤光源。我们还使用加热垫，通过循环温水来维持温度。工作台面，我们使用 BTX 公司生产的电穿孔系统。根据胚胎的大小，我们采用几种不同尺寸的电极板。蓝色一侧为正极。对于小鼠，我们使用异氟烷蒸气麻醉机。我们发现，这能提高母鼠和胚胎的存活率。同时，它还能够让我们以非常快速且可控的方式使动物进入和脱离意识状态。因此，我们发现这一步非常有用。好了，现在我们要对注射移液管进行切削打磨。这一步非常关键，因为移液管的开口必须足够大，以便能够装载DNA，同时尖端又必须非常锋利，以避免在注射时损伤胚胎。如果在注射过程中损伤了胚胎，胚胎的死亡率会显著升高，因此这种情况是不利的。所以，这实际上是该手术中一个非常重要的环节。首先，我们将一些水滴加到正在旋转的研磨石上。然后，我们取一根玻璃棒，用胶带将刚刚拉制好的移液管固定在玻璃棒上。我们将使用其中一个显微操作器来固定移液管的斜面，并使其在此处形成斜面。然后将其放置到位，并使用显微镜观察移液管的尖端。我们将它直接放入斜面上方的水中，使其受到轻微的压力。你可以看到尖端正抵住这里的结石。让其研磨一段时间，至少15分钟。我喜欢让其研磨更长时间，比如一小时。有时情况就是这样，它们会变得非常、非常尖锐，但具体磨边时间的长短确实因人而异。好的，现在我们来看，如上图所示，顶部这支移液管已经拉制完成但尚未进行磨边处理。因此，尽管它很尖锐，但还没有形成可用于加载DNA的开口。现在移液管的底部已被削成斜面，你可以看到这个漂亮的倾斜开口，它能够让你加载DNA，同时仍保留尖锐的尖端，以便在注射时不会造成任何损伤。好的，接下来我们将用DNA填充注射用移液管。需要注意的是，你必须以无内毒素的方式制备DNA，以确保在注射DNA时不会同时注入脂多糖。因此，我们将取用我们的 DNA，并在此准备好封口膜。您需要在此处制作封口膜，收集您的 DNA，并将其以微小液滴

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E15小鼠胚胎在子宫内侧脑室注射和电穿孔

子宫内活体注射与电穿孔技术应用于胚胎大鼠新皮质，为操控单个前体细胞提供了强大工具……...

E16 大鼠胚胎的宫内脑室内注射与电穿孔

超声引导下小鼠前脑微注射 子宫内 在E9.5时

高效基因递送至中枢神经系统多个区域 在子宫内 电穿孔

本文介绍了一种利用独特手术方法和特殊形状电极将基因转入发育中 小鼠大脑...

小鼠 在子宫内 电穿孔：可控时空基因转染

控制体细胞干细胞的扩增是阻碍其研究和治疗应用的主要因素。本文介绍了一种可在发育期和成年期时序性调控神经干细胞扩增的系统，该系统可用于增加小鼠大脑中生成的神经元数量。...

胚胎和成体神经干细胞的扩增 子宫内 电穿孔或病毒立体定位注射

本视频展示了利用子宫内电穿孔技术将质粒DNA递送至小鼠胚胎小脑神经元细胞的方法。该技术有助于理解基因在正常脑发育过程中的体内功能，以及神经元细胞在肿瘤进展过程中基因表达的变化。...

基于子宫内电穿孔的基因递送技术：向小鼠胚胎小脑细胞注射质粒DNA的方法

尽管下丘脑在功能和医学上具有重要意义， 在子宫内 其发育过程的遗传操作鲜有尝试。本文展示了一种详细的实验流程 在子宫内...

通过遗传操作调控小鼠发育期下丘脑 在子宫内 电穿孔

本方案详细描述了如何通过特定方法转染C57BL/6中枢神经系统的不同区域 in utero...

大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、外侧隔核和纹状体特异性 子宫内 C57BL/6小鼠中的电穿孔技术

子宫内双次电穿孔技术可用于靶向空间和时间上分离的细胞群体。该技术可用于在正常条件下通过荧光蛋白观察这些细胞群体之间的相互作用，也可在功能实验干扰目的基因后进行观察。...

双子宫内电穿孔技术用于时空分离的细胞群体靶向

在本实验方案中，我们描述了如何在E7.5时期向小鼠羊膜腔注射慢病毒，从而实现整个神经板的均匀转导，同时对胚胎存活率或发育过程造成极小的不利影响。...

小鼠胚胎7.5天在体纳米注射靶向神经板（NEPTUNE）技术

学习E15小鼠胚胎子宫内脑室注射与电穿孔技术，用于发育神经科学研究。该方法结合微量注射和电穿孔，实现基因靶向调控，为研究大脑发育和基因功能提供可靠工具。

E15小鼠胚胎的子宫内脑室内注射与电穿孔技术

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