Name: 定向细胞自我组装制造，为生物力学分析与组织工程细胞衍生的组织环 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: 了解定向细胞自我组装制造技术，利用平滑肌细胞在琼脂糖孔中聚集收缩形成三维组织环，用于生物力学分析与组织工程研究。该方法可在七天内快速构建完全由细胞及其细胞外基质组成的组织环。

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作者衷心感谢 Neil Whitehouse（WPI，Higgins 机械车间）在数控加工方面的协助。此外，我们还要感谢 Adriana Hera（WPI 计算与通信中心）在 MATLAB 编程方面的帮助，以及 Kate Beverage 和 Joseph Cotnoir（WPI 学术技术中心）在 Camtasia 使用方面的支持。Sophie Burke 和 Jacleen Becker（WPI 学术技术中心）提供了补充视频素材。本研究由美国国立卫生研究院（R15 HL097332）、马萨诸塞大学医学院—WPI 试点研究计划、美国心脏协会（J.Z.H. 本科生研究奖学金）、伍斯特理工学院（J.Z.H. 暑期本科生研究奖学金以及 M.W.R. 的机构启动资金）资助。

1. 细胞接种模具的制备
首先将一块厚度为1/2英寸的聚碳酸酯材料进行铣削，加工出15个圆底环形孔，中心柱直径为2 mm。铣削出的通道深度为6 mm，宽度为3.75 mm。清洁并干燥聚碳酸酯模具，以去除铣削过程中产生的任何塑料碎屑。
按10:1（质量比）将聚二甲基硅氧烷（PDMS）的基料与固化剂混合，脱气以去除所有气泡，然后倒入聚碳酸酯模具中。再次脱气以去除任何残留气泡，并在60°C烘箱中固化4小时。
固化后，小心地将PDMS模板从聚碳酸酯表面缓慢剥离，用肥皂和水清洗，并进行高压灭菌。同时，将含有2%琼脂糖（w/v）溶于杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）的溶液一同进行高压灭菌。
将PDMS模板置于水平表面上，先用移液器将熔化的琼脂糖加入每个中心柱模具中，然后再注入其周围的空隙。让琼脂糖凝固（约15分钟），然后将模具倒置，使琼脂糖从PDMS上脱模。切除每个孔周围多余的琼脂糖，并将琼脂糖孔放入12孔板中。
2. 细胞培养与环形接种
在琼脂糖模具外周加入细胞培养基（含10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM），注意不要覆盖模具顶部。将培养板放入培养箱中，平衡约15分钟，同时准备细胞。
当细胞融合度达到90%时，用胰蛋白酶消化大鼠主动脉平滑肌细胞（rSMCs），并重悬于浓度为5×10⁵个细胞/mL的培养基中。6 细胞/毫升。用移液器 100 μL 将细胞悬液加入每个环形琼脂糖小孔中，采用环形运动方式将细胞均匀涂布于各孔内。
确保培养箱的隔板水平，然后将培养板放入培养箱中，静置24小时，期间避免扰动。此后每两天更换一次培养基，通过吸去孔周围培养基的方式换液，并重新加入培养基，直至琼脂糖孔完全浸没。
3. 组织环采集与厚度测量
培养结束时，通过将环从中心柱顶部滑动取下，将其从琼脂糖模具中取出。
将环置于含有磷酸盐缓冲液（PBS）的小型培养皿中，使样本居中，并使用数字成像系统采集图像。
使用图像分析程序进行边缘检测，并在圆环周长的4个位置（上、下、左、右）测量其环壁厚度。计算每个独立圆环的平均厚度值（t），并利用该值计算横截面积（2π(t/2)2）。
4. 环形试样的力学测试
将拉伸试验机（Instron EPS 1000）设置为水平位置。安装量程为1N ±1mN的载荷传感器，并使用定制的细金属丝夹具（通过弯曲不锈钢丝制成）。
将环形样品安装在两根细金属丝夹具上。拉伸夹具，直至样品承受 5 mN 的预载荷。输入横截面积（根据厚度测量值计算）并记录标距长度。
在去皮载荷和50 kPa应力之间以10 mm/min的速率对环形试样进行8次预循环。第八次预循环后，以10 mm/min的速率拉伸至失效。失效定义为相邻两次测量之间载荷下降40%。对于每个环形试样，测量其极限抗拉强度（UTS）和断裂应变，并根据采集的数据计算最大切线模量（MTM）。
5. 组织环组装以构建组织管
使用直径为5 cm的圆形聚碳酸酯圆盘加工定制试管架，圆盘上设有矩形切口（2 cm × 3 cm）。在这些圆盘上钻出带螺纹的孔，以便将两个支架旋紧固定在一起。将定制试管架进行高压灭菌，然后转移至生物安全柜中，放入一个空的培养皿内。
使用手术剪将直径为1.9 mm的硅胶管两端斜向剪切，形成斜面边缘，然后对硅胶管进行高压灭菌。在硅胶管灭菌的同时，向培养皿中加入培养基。
从琼脂糖孔中取出环状物，并将其放入含有培养基的培养皿中。将经高压灭菌的硅胶管也放入同一培养皿中，以润湿备用。
使用镊子将硅胶管的斜面端插入环的中心，并轻轻将环沿硅胶管滑入。根据需要重复此步骤以安装多个环。沿管子轻轻依次向两个方向推动环，使其相互接触。该方法适用于仅培养一天后收获的环。
安装环固定后，将硅胶管在聚碳酸酯支架内对齐，并将支架的两部分拧紧。将支架放入100 mm的培养皿中，加入55 mL培养基。在整个培养期间，每隔3天更换一次培养基。
取出组织管时，先将硅胶管从聚碳酸酯支架上松开，然后用镊子将组织管从硅胶管上滑下，放入盛有磷酸盐缓冲液（PBS）的培养皿中。
6. 代表性结果：
当正确执行该方案时，细胞会在24小时内聚集形成组织环，其内径等于相应模具柱的直径。组织环边缘通常外观光滑，且（若在水平表面上培养）在整个圆周上厚度均匀。组织环易于操作，可从培养孔中取出，用于后续的力学和组织学分析（参见 Gwyther et al., 20118）。组织环的形态、基质组成以及力学性能会因接种细胞的数量和类型不同而有所差异。
表1展示了由不同细胞类型、接种条件和培养时间制备的组织环的代表性结果。由5×105个rSMCs形成的内径为2 mm的组织环，其极限抗张强度（UTS）高于我们先前报道的由6.6×105个rSMCs制备的2 mm组织环8。与大鼠细胞类似，人源平滑肌细胞（hSMC）可迅速聚集形成组织环，在培养仅14天后即含有大量胶原（数据未显示）。人源间充质干细胞（hMSC）也能聚集并形成结构完整的环状组织，但缺乏足够的机械强度，在单轴拉伸测试的初始预循环阶段即发生断裂。
<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td> </td>
			<td>n</td>
			<td>细胞数量</td>
			<td>厚度（mm）</td>
			<td>培养时长（天）</td>
			<td>UTS（kPa）</td>
			<td>MTM（kPa）</td>
			<td>断裂应变（mm/mm）</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rSMC rings</td>
			<td>6</td>
			<td>660,000</td>
			<td>0.94±0.12</td>
			<td>14</td>
			<td>97±30</td>
			<td>497±91</td>
			<td>0.50±0.08</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rSMC rings</td>
			<td>4</td>
			<td>500,000</td>
			<td>0.53±0.02</td>
			<td>7</td>
			<td>113±8</td>
			<td>189±15</td>
			<td>0.88±0.05</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hSMC rings</td>
			<td>3</td>
			<td>750,000</td>
			<td>0.51±0.05</td>
			<td>14</td>
			<td>160±30</td>
			<td>270±20</td>
			<td>0.92±0.08</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hMSC rings</td>
			<td>3</td>
			<td>750,000</td>
			<td>0.40±0.07</td>
			<td>14</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1。显示由不同细胞类型、接种浓度和培养时间生成的2 mm环的培养参数和机械性能的表格。
<img alt="细胞培养过程；从PDMS模具形成的组织环；实验装置示意图。" src="/files/ftp_upload/3366/3366fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. （A）组织环生成过程的示意图。（B）定制的聚碳酸酯模具，带有铣削出的环形孔，中心柱直径为2 mm。（C）从聚碳酸酯模具上剥离后的PDMS模板。（D）在带有2 mm中心柱的琼脂糖模具中培养的聚集性组织环。（E）直径为2 mm的组织环置于PBS中。比例尺 = 6 mm（B、C）和2 mm（D、E）。
<img alt="应力与应变图；力学分析；抗拉强度；应力测量；材料性能图。" src="/files/ftp_upload/3366/3366fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 2"> 
图 2. 由单轴拉伸试验获得的典型应力-应变曲线图。

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<li>Rowe, S. L., Stegemann, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpenetrating+collagen-fibrin+composite+matrices+with+varying+protein+contents+and+ratios%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Interpenetrating collagen-fibrin composite matrices with varying protein contents and ratios.</a> Biomacromolecules. 7, 2942-2948 (2006).</li>
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</ol>

无利益冲突声明。

近年来，人们对基于细胞或“无支架”的组织工程技术产生了日益增长的兴趣，以解决基于支架的组织工程方法存在的一些局限性。由于细胞来源的组织由细胞及其产生的基质构成，因此其本身具有更高的细胞密度，不含外源性材料，并且可以完全由人源细胞和蛋白质制成。由人源细胞制备的血管移植物在无外源性支架的情况下即可获得显著的机械强度（例如，爆破压力可达3400 mmHg，而人隐静脉为1600 mmHg）12。尽管基于细胞的血管组织在细胞密度和机械强度方面表现更优，但目前大多数制备方法（如“基于片层的工程化”3,4,12 或“生物打印”5,13）需要漫长的培养周期（&gt;3个月）或用于构建三维组织的专用设备。本文所述的细胞来源组织环方法能够在短时间内无需专用设备的情况下，实现细胞快速自组装，形成坚固的三维组织结构。
本方案详细描述了我们开发的用于制备内径为2 mm的大鼠平滑肌细胞来源组织环的方法。在本示例中，组织环培养了7天（随后再额外培养7天以实现环融合和管状结构形成）。然而，大鼠（以及人类）平滑肌细胞形成的2 mm组织环在接种细胞后仅一天即可从孔中取出，且已具备足够的结构完整性，可用于操作（例如转移至硅胶管上）。此外，通过简单改变原始聚碳酸酯模具中柱体的直径，利用该方法还可制备具有不同内径（2、4和6 mm）的结构完整的组织环8。我们最近还改进了聚碳酸酯模具的设计，使单个多孔琼脂糖腔室中可一次性浇铸五个2 mm的接种孔，该设计减少了聚二甲基硅氧烷（PDMS）和琼脂糖的用量，并可完全容纳于6孔板中的一个孔内（数据未显示）。通过修改聚碳酸酯模具的计算机辅助设计（CAD）文件参数，可轻松调整柱体直径、接种孔宽度、圆底曲率半径、接种孔数量或接种孔深度等各项参数。最后，单个聚碳酸酯模具可用于制备数量不受限制的PDMS模板，每个PDMS模板均可清洗、高压灭菌并重复使用数十次。
除了改变组织环的大小外，我们还利用多种不同类型的细胞制备了组织环，包括：原代大鼠平滑肌细胞（Cell Applications，R354-05）、原代人冠状动脉平滑肌细胞（Lonza，CC-2583）、原代人皮肤成纤维细胞11（由伍斯特理工学院生物医学工程系George Pins博士慷慨提供）、大鼠肺成纤维细胞（RFL-6，ATCC CCL-192）以及间充质干细胞（Lonza，PT-2501）。上述每种细胞类型均能围绕中心支柱聚集并收缩，形成组织环；但不同细胞类型所形成的构建物在细胞排列方式、细胞外基质（ECM）组成及力学性能方面存在差异。每种细胞类型的接种参数需根据细胞大小及其聚集能力通过实验经验确定。因此，尽管这种细胞来源的组织环制备系统具有极高的通用性，但在使用不同细胞类型时，该方案可能需要进行轻微调整，以实现最佳的组织形成效果。
组织环几何结构便于通过单轴拉伸试验轻松加载并评估组织材料的力学特性，如上所述。此外，使用血管环段测量血管收缩及生理功能已有大量先例。初步研究表明，细胞来源的组织环可安装于丝状肌动描记装置上，用于测定其药理反应性及收缩力生成能力（数据未显示）。总体而言，快速制备自组装细胞环以进行组织学、力学、生理学和生物化学分析的能力，提示这一技术可能成为研究健康与疾病状态下血管组织结构与功能的有力新工具。

<table><tbody><tr><td>聚二甲基硅氧烷（PDMS）</td><td>道康宁公司</td><td>Sylgard 184</td><td></td></tr><tr><td>琼脂糖</td><td>龙沙公司</td><td>50000</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 培养基</td><td>美迪泰克公司</td><td>15-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>PAA 实验室</td><td>A05-201</td><td></td></tr><tr><td>青霉素/链霉素</td><td>美迪泰克公司</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>数字成像系统</td><td>DVT 公司</td><td>Model 630</td><td></td></tr><tr><td>单轴测试仪</td><td>Instron 公司</td><td>ElectroPuls E1000</td><td></td></tr><tr><td>边缘检测软件</td><td>DVT 公司</td><td>Framework 2.4.6</td><td></td></tr></tbody></table>

定向细胞自组装构建细胞来源组织环用于生物力学分析与组织工程

Directed Cellular Self-Assembly to Fabricate Cell-Derived Tissue Rings for Biomechanical Analysis and Tissue Engineering

每年，数十万患者在美国接受冠状动脉旁路移植手术。1 其中约三分之一的患者由于疾病进展或既往已取材，缺乏合适的自体供体血管。血管组织工程的目标是为这些旁路移植物开发出合适的替代来源。此外，工程化血管组织还可作为活体血管模型，用于研究心血管疾病，具有重要价值。目前已探索多种有前景的血管组织工程方法，近年来许多研究集中于细胞为基础的方法的开发与分析。2-5 本文中，我们介绍一种可使细胞快速自组装形成三维组织环的方法，该组织环可用于体外模拟血管组织。
为此，将平滑肌细胞悬液接种到圆底环形琼脂糖孔中。琼脂糖的非黏附特性可使细胞沉降、聚集并围绕孔中心的支柱收缩，从而形成一个完整的组织环6,7。这些组织环可在收获前培养数天，用于力学、生理学、生物化学或组织学分析。我们已证明，这些由细胞衍生的组织环的极限抗张强度可达100–500 kPa8，高于类似培养周期下其他组织工程血管结构所报道的数值（&lt;30 kPa）9,10。我们的结果表明，可在较短时间内高效生成由细胞衍生的血管组织环，并为直接定量评估细胞及其分泌的细胞外基质（CDM）对血管组织结构与功能的贡献提供了可能。

本文概述了一种通过细胞自组装构建细胞来源组织环的多功能方法。将平滑肌细胞接种至环形琼脂糖孔中，细胞可在7天内聚集并收缩，形成坚固的三维（3D）组织。毫米尺度的组织环适用于力学测试，并可作为组织组装的基本单元。

每年，美国有数十万患者接受冠状动脉旁路移植术。1 其中约三分之一的患者会……

本实验的总体目标是利用聚集的细胞及其分泌的细胞外基质构建三维组织结构，用于功能分析。首先通过铣削聚碳酸酯模具制备具有圆底环形孔的模板；随后将聚二甲基硅氧烷（PDMS）浇注到聚碳酸酯模具上，形成复制模板。然后使用PDMS模板制备aROS微孔。最后一步是将细胞接种到aROS微孔中，使其聚集并形成具有凝聚力的组织环。最终，该方法可用于利用不同类型的细胞实现细胞自组装和组织工程，并能够分析细胞及其分泌的细胞外基质对组织结构与功能的贡献。与其它组织工程方法相比，该技术的主要优势在于，我们能够完全由细胞及其分泌的细胞外基质快速构建组织，其速度较以往报道更快，且构建形式适合进行力学分析。首先，将一块厚度为半英寸的聚碳酸酯材料进行铣削，加工出15个圆底环形孔，其中心柱直径为2毫米。清洁聚碳酸酯模具，以去除铣削过程中产生的任何塑料碎屑，并让模具自然晾干。随后，按10:1的比例混合聚二甲基硅氧烷（PDMS）基础剂与固化剂，对混合液进行脱气处理以去除所有气泡，然后将其倒入聚碳酸酯模具中。然后再次将混合物置于模具上脱气，以去除残留的气泡，并将PDMS在60摄氏度的烘箱中固化4小时。在PDMS固化的同时，将2% AROS溶解于DMEM中。固化完成后，小心地从聚碳酸酯膜上缓慢剥离PDMS模板，随后用肥皂和水清洗PDMS，并将其与DMEM AROS溶液一同进行高压灭菌。现在将高压灭菌后的PDMS模板放置于水平表面上，先用移液器将熔融的AROS注入每个中心柱状模具的中心，再将AROS注入其周围的空隙中。让 aros 固化约 15 分钟。然后将模具倒置，使 aros 从 PDMS 上脱模。剪去每个孔周围多余的 aros，再将一个 aros 孔放入 12 孔板的每个孔中。现在。在Aros小室的外周加入细胞培养基，注意不要覆盖小室的顶部。随后将培养板放入培养箱中，使小室在细胞准备期间达到平衡。当细胞融合度达到90%时，用胰蛋白酶消化大鼠主动脉平滑肌细胞并重悬。将细胞重悬于浓度为每毫升5 × 10⁶个细胞的溶液中。然后用移液器将100 µL重悬的细胞悬液加入每个已平衡的aROS孔中。采用环形运动方式将细胞均匀加入各孔中。将培养板放入培养箱中，静置培养24小时。每两天更换一次培养基，通过吸出孔周围培养基，然后重新添加培养基至每个孔，使aeros模具完全浸没。培养结束时，用PBS填充一个小的培养皿。将每个环从其 aros 模具中取出，通过将其从中心柱顶部滑出。将环放置在含有 PBS 的培养皿中，并置于数字成像系统下方。使用边缘检测软件测量环周四个位置（上、下、左、右）的环厚度。进行单轴拉伸测试。将环形样品安装在两根细金属丝夹具上，拉伸夹具直至环形样品受到5 mN的撕裂载荷。然后输入根据厚度测量值计算得到的横截面积，并记录标距长度。在撕裂载荷与50千帕之间对环形试样进行八次预循环。第八次预循环后，以10毫米/分钟的速率进行应力加载，直至试样破坏。针对每个环状结构，测量其极限拉伸应力和断裂应变，并根据所获得的数据计算最大切线模量。除了功能性体外研究外，这些活细胞环还可融合形成组织管。使用手术剪刀以一定角度剪切硅胶管的末端，以形成斜面边缘，然后在硅胶管进行高压灭菌时对其进行高压灭菌处理。在生物安全柜中，将装有培养基的培养皿与经灭菌处理的定制硅胶管支架一起放入，然后将支架置于空的培养皿中。接着，从 aros 培养孔中取出环状结构，并将其放入盛有培养基的培养皿中。将硅胶管放入同一培养皿的培养基中，以润湿备用。使用镊子将硅胶管的末端插入环的中心，然后轻轻将环沿硅胶管滑入。通过沿管子两个方向依次轻推，使各环相互接触。环安装完毕后，将硅胶管对齐放入聚碳酸酯支架内，并将支架的两部分拧紧固定。 向培养皿中加入 55 毫升培养基。在培养期间每三天更换一次培养基，以去除组织管。首先，用 PBS 填充培养皿。然后从聚碳酸酯支架上取下硅胶管，用镊子将组织管从硅胶管上滑脱并移入培养皿中。操作正确时，细胞会在Agarro板孔底部沉积，并在接种后24小时内收缩，围绕中心柱形成组织环。此图为代表性曲线，显示了由大鼠平滑肌细胞生成的2毫米组织环在单轴拉伸试验中获得的应力-应变曲线。随后利用该曲线得出的极限抗拉强度、最大抗拉模量和断裂应变值，用于比较在不同培养条件下生长的组织环样本的力学性能。通过改变培养参数（包括细胞接种数量、培养时间、培养基以及所使用的细胞类型），可以调控组织环的力学性能。除了大鼠平滑肌细胞外，人原代平滑肌细胞也能形成具有相似抗张强度的组织环。人间充质干细胞也会聚集形成环状结构，但其强度不足以进行力学测试。我们的系统通过将细胞接种到定制的 aros 孔中，即可完全由细胞构建工程化组织。一旦初始的聚碳酸酯模具加工完成，我们便能制备出无限数量的 PDMS 模板，进而用于制作模具，因此无需额外设备。该系统具有多功能性，我们已在该系统中使用了多种不同类型的细胞来制备组织环，因此该系统可能既可用于组织工程应用，也可用于体外研究细胞和细胞外基质对组织结构与功能的贡献。

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

定向细胞自我组装制造，为生物力学分析与组织工程细胞衍生的组织环

为了构建高度有序的复杂组织结构，必须将多种材料和细胞类型组装成一个整体复合物。这种组合设计结合了器官特异性的分层细胞片，以及两种不同的生物来源材料，后者包含强韧的纤维基质基础和内皮细胞，以促进新生血管的形成。...

组织工程：构建用于递送分层细胞片的多细胞三维支架

本研究介绍了一种通过直接培养胶原蛋白、平滑肌细胞和内皮细胞来快速制备活体血管组织的技术。此外，还描述了一种用于工程化血管组织力学表征的新方案。...

用于血管组织再生的三维细胞化胶原凝胶的构建

本论文描述了利用表面标志物表达和细胞分选技术构建明确组成的工程化心肌组织的方法。这些明确组成的心肌组织随后可用于多组织生物反应器，以研究心脏细胞治疗的机制，从而提供一个具有功能性且可控的人类心脏模型系统。...

构建定义明确的人源工程化心肌组织以研究心肌细胞治疗机制

本方案描述了一种使用自动化机器人沉积系统的生物打印方法，该方法结合了刻蚀的拓扑引导线索与承载细胞的水凝胶生物墨水的精确沉积。打印的细胞被直接递送至刻蚀结构中，并能够感知并沿其定向排列。...

用于细胞表面引导与生物打印的自动化机器人分配技术

可扩展的工程化血管将提升其临床应用价值。通过使用易于调节尺寸的3D打印导模，可形成血管平滑肌环并将其堆叠成管状结构，从而构建出血管移植物。通过简单更换3D打印导模的尺寸，即可调节移植物的大小，以满足人类冠状动脉各种尺寸范围的需求。...

使用3D打印导板和环堆叠法制备可缩放的工程化血管移植物

本方案描述了一种利用定制的3D打印塑料模具制备不同尺寸自组装组织环的平台。将PDMS倒入3D打印模具中固化形成阴模，然后将琼脂糖注入固化的PDMS阴模中成型。将细胞接种至所得的琼脂糖孔中，细胞在其中聚集形成组织环。...

使用3D打印模具制备定制琼脂糖孔用于细胞接种和组织环自组装

本文介绍了一种快速、简便且低成本的方法，用于制备定制的聚二甲基硅氧烷模具，该模具可用于制造具有复杂几何结构的基于水凝胶的工程化组织。我们还描述了采用该技术制备的工程化心肌组织的力学性能和组织学评估结果。...

基于激光蚀刻母模定制的组织培养模具

我们展示了一种无需人工支架构建基于单细胞的三维（3D）组装的新方法。...

无需人工支架操控活细胞构建稳定的三维细胞组装

本文介绍了一种用于在具有双极的多孔板中平行培养48个组织的工程化结缔组织的制备方案，适用于机制研究、疾病建模和筛选应用。该方案适用于来自不同器官和物种的成纤维细胞，并以人原代心肌成纤维细胞为例进行了演示。...

用于筛选应用的成纤维细胞来源人源化工程化结缔组织

本文展示了一种三步法类器官模型（二维[2D]扩增、二维[2D]刺激、三维[3D]成熟），该模型为肌腱基础研究提供了一种有前景的工具，也为肌腱组织工程提供了一种潜在的无支架方法。...

利用人皮肤成纤维细胞展示自组装细胞片培养及手动构建类肌腱/韧带三维类器官

关键词：自组装细胞片，三维类器官，人皮肤成纤维细胞，肌腱样组织，韧带样组织

了解定向细胞自我组装制造技术，利用平滑肌细胞在琼脂糖孔中聚集收缩形成三维组织环，用于生物力学分析与组织工程研究。该方法可在七天内快速构建完全由细胞及其细胞外基质组成的组织环。

定向细胞自组装构建细胞来源组织环用于生物力学分析与组织工程

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