Development of a Quantitative Recombinase Polymerase Amplification Assay with an Internal Positive Control

Zachary A. Crannell; Brittany Rohrman; Rebecca Richards-Kortum

doi:10.3791/52620

JoVE Journal
Biology

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Development of a Quantitative Recombinase Polymerase Amplification Assay with an Internal Positive Control

一个定量聚合酶重组酶扩增法的发展与内部阳性对照

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08:37 min

March 30, 2015

DOI: 10.3791/52620-v

Zachary A. Crannell*¹, Brittany Rohrman*¹, Rebecca Richards-Kortum¹

¹Department of Bioengineering,Rice University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

提供是一种开发实时重组酶聚合酶扩增测定的方案，以使用热循环仪或显微镜和载物台加热器定量 DNA 样品的初始浓度。还描述了内部阳性对照的开发。提供了用于处理原始实时荧光数据的脚本。

以下实验的总体目标是使用定量重组酶聚合酶简化来定量未知样品的 DNA 浓度。这是通过首先向反应中加入靶 DNA 内部阳性对照、DNA 引物和荧光标记探针来实现的。作为第二步，将反应置于实时 PCR 机器中，该机器加热反应以激活酶并监测探针的荧光以检测靶标和对照扩增子的产生。

接下来，使用脚本分析荧光数据以生成标准曲线并验证分析。结果表明，基于用于定量 HIV 单靶 DNA 的验证实验，DNA 样品可以在正确浓度的一个数量级内准确定量。与实时定量 PCR 等现有方法相比，该技术的主要优点是 RPA 是等温的，因此不需要昂贵的热循环仪。

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