Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

Courtney Reeks; Robert A. Screaton

doi:10.3791/53152

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

激酶底物对鉴定使用高通量筛选

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11:13 min

August 29, 2015

DOI: 10.3791/53152-v

Courtney Reeks¹, Robert A. Screaton^2,3

¹Children's Hospital of Eastern Ontario Research Institute, ²Sunnybrook Research Institute,University of Toronto, ³Department of Biochemistry,University of Toronto

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

蛋白质磷酸化是细胞如何解释和响应其细胞外环境中信息的核心特征。在这里，我们提出了一种高通量筛选方案，使用从哺乳动物细胞中纯化的激酶来快速识别磷酸化目标底物的激酶。

该程序的总体目标是使用高通量筛选方法鉴定磷酸化目标底物的激酶。这是通过首先用表达激酶 FU 的质粒横切细胞来实现的，这些激酶 FU 作为转移酶或 GST 转化为谷胱甘肽。第二步是执行 A GST 激酶下拉。

接下来，将样品加载到凝胶中，然后进行电泳并用 kumasi 亮蓝染料染色。最后一步是干燥凝胶并将它们暴露在自动射线照相胶片中。最终，通过显影和解释所得的薄膜，人们能够识别激酶底物对，因为每个泳道都代表不同的激酶测定。

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