DOI: 10.3791/55708-v
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肽竞争测定广泛用于各种分子和免疫学实验。本文描述了体外寡肽竞争激酶测定的详细方法和相关的验证程序，其可用于发现特定的磷酸化位点。
该程序的总体目标是同时评估多个潜在的磷酸化位点，并确定位点，以便通过磷酸化位点突变体进行后续验证。这种方法可以帮助回答生物化学和细胞生物学领域关于翻译后修饰在细胞信号传导中的作用的关键问题。该技术可轻松、经济、友好地对磷酸化位点和目标蛋白进行初步筛选。
该技术的含义扩展到包括炎症和癌症在内的疾病的诊断和治疗，因为磷酸化是人类疾病信号通路中的重要生化事件。协助演示的是我实验室的研究生 Sol-Bi Shin，他在进行定点诱变时。首先在冰上混合 50 ng 血浆 pGEX JST NRF2、125 ng 正向引物、125 ng反向引物、1 μL DNTP 混合物、2.5 单位的 PFU DNA 聚合酶和 10x 反应缓冲液。
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