茶叶样品中吡咯里西啶生物碱污染的来源与途径

建立一种在杂草、土壤、鲜茶叶和干茶叶样品中检测15种吡咯里西啶生物碱的方法，可为探究茶叶中吡咯里西啶生物碱污染来源提供技术支持。与固相萃取法相比，采用吸附剂方法处理土壤样品在吡咯里西啶生物碱分析中具有节省时间、降低成本和更高回收率的优势。开始对预热干燥的茶叶产品、鲜茶叶或杂草进行提取时，称取1克样品置于50毫升离心管中，并向管中加入10毫升0.1摩尔/升的硫酸溶液。

接下来，如果样品将采用固相萃取进行分析，则涡旋振荡两分钟；如果采用吸附剂净化进行分析，则涡旋振荡一分钟。然后将样品进行超声提取15分钟，随后在室温下以9,390 G离心10分钟。接着使用塑料尖滴管，将上清液转移至50毫升离心管中。

进行两次提取后，将上清液合并至同一离心管中。开始对预处理的土壤进行提取时，称取1克样品置于50毫升离心管中。加入0.1毫升0.1摩尔/升的柠檬酸三钠溶液，调节土壤pH至6.0，并静置2分钟。

然后向试管中加入10毫升0.1摩尔每升的硫酸甲醇溶液，涡旋混匀样品2分钟，再振荡30分钟。接着，按照之前的方法进行30分钟的超声提取。然后在9,390 G条件下离心样品10分钟。

使用塑料尖端的滴管，将上清液转移至一个 50 毫升离心管中。完成提取操作两次后，合并上清液。先用 5 毫升甲醇，再用 5 毫升去离子水活化固相萃取（SPE）柱。

活化后，将样品提取物的上清液10毫升加入预活化的小柱中。当样品溶液液面降至小柱上层时，用5毫升1%甲酸溶液淋洗样品基质，随后用5毫升甲醇淋洗，并弃去洗脱液。接着，用5毫升含0.5%氨水的甲醇溶液洗脱目标分析物。

将洗脱液通过0.22微米膜过滤器过滤，用于UPLC-MS/MS分析。为利用吸附剂进行样品净化，准备一个10毫升离心管，其中加入吸附剂，组成为GCB、PSA和C18，比例为10:20:15毫克。然后加入2毫升样品处理后获得的上清液。

接下来，将样品与吸附剂混合物涡旋振荡一分钟，并在室温下以 9,390 G 离心八分钟。取一毫升上清液，经 0.22 微米膜过滤器过滤至样品瓶中，随后进行 UPLC-MS/MS 分析。在该研究中，与固相萃取小柱方法相比，采用吸附剂纯化技术从新鲜茶叶、干茶样品及杂草中回收的 15 种吡咯里西啶生物碱的回收率更高。

采用吸附剂纯化法从土壤中提取生物碱的回收率为79%至111%。在来自五个采样点的新鲜茶叶中，检测到的介米定N-氧化物含量高于倒千里光碱。在采样点一和采样点二的成熟叶片中未检测到倒千里光碱。在11种吡咯里西啶生物碱中，仅在土壤中检测到介米定N-氧化物，而在茶树的不同部位则检测到了倒千里光碱和介米定N-氧化物。

此外，发现一芽两叶中千里光宁-N-氧化物的含量最高。首次操作时，最重要的是加入0.1毫升0.1摩尔/升的柠檬酸三钠溶液，以调节土壤pH至6.0。该方法可应用于其他可食用植物中生物碱的分析，同时也为探索这些植物中生物碱的来源提供了天然的技术手段。