Pulldown Assay Coupled with Co-Expression in Bacteria Cells as a Time-Efficient Tool for Testing Challenging Protein-Protein Interactions

Artem Bonchuk; Nikolay Zolotarev; Konstantin Balagurov; Olga Arkova; Pavel Georgiev

doi:10.3791/64541

下拉测定与细菌细胞共表达相结合，作为测试具有挑战性的蛋白质-蛋白质相互作用的省时工具

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Biochemistry
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Pulldown Assay Coupled with Co-Expression in Bacteria Cells as a Time-Efficient Tool for Testing Challenging Protein-Protein Interactions

下拉测定与细菌细胞共表达相结合，作为测试具有挑战性的蛋白质-蛋白质相互作用的省时工具

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07:03 min

December 23, 2022

DOI: 10.3791/64541-v

Artem Bonchuk^1,2, Nikolay Zolotarev¹, Konstantin Balagurov^1,2, Olga Arkova², Pavel Georgiev¹

¹Department of the Control of Genetic Processes, Institute of Gene Biology,Russian Academy of Sciences, ²Center for Precision Genome Editing and Genetic Technologies for Biomedicine, Institute of Gene Biology,Russian Academy of Sciences

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在这里，我们描述了一种使用一组兼容载体对差异标记蛋白质进行细菌共表达的方法，然后使用传统的下拉技术来研究无法 在体外组装的蛋白质复合物。

该方法允许研究需要共表达的蛋白质复合物的形成，以实现有效的测试样品，例如异二聚体的形成。该方法的主要最终潜力是利用差异标记研究蛋白质的共表达，使用兼容载体的组合来促进高效的复杂组装，以及节省时间的工作流程和可扩展性，允许对多种相互作用进行快速斑贴测试。该方法还可用于快速筛选最佳蛋白表达和纯化条件。

可视化演示有助于正确执行实验方案的关键步骤，例如共表达设置、细胞破碎和后续下拉步骤。首先，在 37 摄氏度的 Luria-Bertani（LB）培养基中培养大肠杆菌 BL21（DE3）菌株，使其光密度或 OD 为 0.1 至 0.2。在4摄氏度下以9， 000g离心一毫升细菌悬浮液一分钟，弃去上清液。

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