与非侵入性检测荧光染料标记的干细胞与光学成像

该视频显示技术，人类胚胎干细胞和骨髓基质干细胞与荧光染料标签。这种技术可以用于移植的干细胞在体内追踪与光学成像和荧光显微镜观察组织病理学的相关性。

欢迎来到 Dr.Hiku Alge Blink 的实验室。我们要感谢加州再生医学研究所资助这个项目。用荧光造影剂标记干细胞可以在体内追踪移植的干细胞。

随后对标记的干细胞进行光学成像，允许进行纵向研究，其中能够无创地监测体内细胞的迁移。本视频将向您展示如何使用荧光染料标记人胚胎干细胞和人间充质干细胞。大家好，我是来自加州大学旧金山分校放射学系造影剂研究小组的 Sophie Boddington。

今天，我想向您展示两种用荧光造影剂标记干细胞的不同技术。一个用于用荧光染料 DID 标记间充质干细胞，另一个用于用 endign ingra 标记人胚胎干细胞。那么，让我首先向您展示我们用 DID 标记人间充质干细胞的技术。

要开始标记间充质干细胞的程序，我们必须尝试茴香并计数它们以获得具有确定细胞数量的悬液。由于这是标准的组织培养技术，因此我们不会详细展示。我们希望将要标记的细胞以每毫升 100 万个细胞的密度悬浮在无血清培养基中。

首先，我们在每毫升细胞悬液中添加 5 微升 DID 造影剂。现在，我们通过轻轻移液将细胞与标记溶液在 37 摄氏度的六孔低贴壁培养皿中孵育 20 分钟。简单孵育完成后，我们现在必须将细胞溶液转移到 15 mL 离心管中。

我们将其在 400 RCF 下离心 5 分钟。接下来，我们吸出标记介质，确保不会干扰沉淀。我们现在用 PBS 洗涤细胞。

我们上下移液细胞，确保分解细胞调色板。后两个步骤。我们再重复两次，这样我们总共有三个洗涤步骤。

现在我们对细胞进行计数并进行 trip 和 blue 测试以确定细胞活力。确定细胞活力后，您的细胞现在可以在光学成像仪中进行成像。要开始标记人类胚胎干细胞的程序，我们必须首先准备称为吲哚菁绿的造影剂。

然后，我们将其与称为鱼精蛋白的转染试剂混合。首先，我们量出 1 毫克吲哚菁绿粉末，并将其溶解在 100 微升 DMSO 中。我们在混合物中加入 400 微升含有 10% FCS 的 DMEM，并充分摇匀，得到每毫升吲哚菁绿 2 毫克的浓度。

接下来，我们添加转染试剂鱼精蛋白，它充当造影剂的穿梭剂，使其能够更有效地进入细胞。现在我们将 5 微升硫酸鱼精蛋白（每毫升 10 毫克）与 300 微升 ICG 和 300 微升无血清 DMEM 混合。现在，我们将新的转染溶液摇动 5 分钟，以形成复合物。

接下来，我们吸出旧培养基并向细胞中加入 10 毫升 PREWARM DMEM。我们将先前制备的鱼精蛋白 ICG 溶液添加到细胞中，并将培养皿放入 37 摄氏度的培养箱中开始一小时的孵育。孵育完成后，我们从培养箱中取出培养皿，吸出标记溶液，然后用 5 毫升 PBS 冲洗培养皿来洗涤细胞。

然后将细胞在 37 摄氏度下胰蛋白酶浸泡 5 分钟。摇动培养皿有助于将细胞提升到悬浮状态。现在我们轻轻地上下移液以分解剩余的菌落。

我们通过向培养皿中加入等量的含有 10% FCS 的 DMEM 来中和胰蛋白酶。接下来，我们将细胞溶液转移到 15 mL 试管中，并以 400 RCF 离心溶液 5 分钟。我们将细胞重悬于完全培养基中。

我们现在可以通过让细胞通过 40 微米的细胞过滤器来去除残留的团块或复合物。一旦我们得到无团块的细胞溶液，我们吸出旧培养基并将沉淀重悬于预先蠕虫的全人胚胎干细胞培养基中。此时，我们需要将小鼠饲养层细胞与人类胚胎干细胞分开。

这样做是为了确保以后我们只对干细胞进行成像。为此，我们将细胞溶液转移到明胶涂层的 10 厘米培养皿中。我们将培养皿放入 37 度的培养箱中，静置 45 分钟。

在此期间，请确保不要打扰这道菜。现在饲养者会粘附在培养皿上，而干细胞不会。我们将溶液从培养皿中转移出来，现在我们得到了标记的人胚胎干细胞单细胞溶液。

我们现在可以对细胞进行计数并对它们进行蓝色旅行测试。确认活力后，我们的细胞就可以进行成像了。该幻灯片显示了一个例子，说明干细胞在用荧光造影剂标记并通过 IP 注射给药后如何在小鼠体内可视化。

连续光学成像扫描显示细胞最初在肺部积累，然后在肝脏、四肢骨髓和甲状腺中重新分布。荧光标记也可用于用荧光显微镜直接描绘组织病理学标本中移植的干细胞。我们刚刚向您展示了在进行细胞标记时如何使用荧光造影剂标记干细胞。

记住标准化每个步骤。我们这样做是为了确保一致的标记效率和细胞活力，以便比较不同实验的结果。就是这样。

感谢您的观看，祝您的细胞标记好运。