Summary
鼠标颌下唾液腺通过沃顿商学院的导管插管协议描述。在这个实验中，台盼蓝溶液作为一个代尔，证明这种技术如何有效地注入到有针对性的腺，并建议作为一个潜在的临床药物/唾液腺的再生细胞治疗这种新方法的可靠性。
Abstract
在干燥综合征，并接受他们的头部和颈部区域，用于治疗癌症的治疗照射患者经常发现严重唾液腺功能减退症。两组患者出现症状，如口干（口干），吞咽困难（咀嚼和吞咽障），严重龋齿，味觉改变，口咽感染（念珠菌），口腔粘膜炎，疼痛和不适。
在RS雷德曼，2009年发送Mezey等再生医学的一个创新的方法治疗的唾液腺低功能推测：中，干细胞可以直接存入腺体由插管在恢复受损的功能的有力方法器官。据推测，移居国外的干细胞会分化成腺细胞作为主机唾液腺的一部分功能。此外，这种插管技术是一种快捷和有效地用于临床的基因转移中的应用的传递方法。
在这里，我们说明了沃顿商学院的管（ 图1）通过对小鼠颌下腺唾液腺在执行插管过程中所涉及的步骤。 C3H鼠（查尔斯河，蒙特利尔，QC，加拿大）用于本实验中，已清洁常规条件下保持在麦吉尔大学动物资源中心。所有的实验已经大学动物保健委员会批准，并按照加拿大动物保健委员会的指引。
在这个实验中，台盼蓝溶液注入腺体内，通过使用胰岛素注射器与一个29号针头包裹聚乙烯管内一个开放的沃顿商学院的管。随后，鼠标解剖显示，输注成功迁移进入腺体。
Protocol
1。程序说明
- 皮下注射每只小鼠注入1μL/ g体重0.5毫克/毫升硫酸阿托品水合物（＃11330猫，Fluka公司，美国），以防止破坏输注的运动唾液腺分泌物。
- 麻醉注射1μL/ g的体重为100毫克/毫升氯胺酮和20毫克/毫升甲苯噻嗪（凤凰科学，AR，美国）解决方案的每鼠腹腔（知识产权）
- 在腹侧的位置上放置定做的塑料平台的鼠标被锁定在一个金属丝，上颌切牙和下颌切牙迷上弹性字符串，以保持口开放。
- 使用胰岛素注射器内放置一个直径为0.58毫米的聚乙烯管（＃427410，猫，医学博士， 美国碧迪图2）（猫＃600145，泰科医疗，马萨诸塞州，美国）一个29号针头。聚乙烯管插入超过了29号针头的针尖5毫米。针是用来作为一个刚性的导轨移动到沃顿商学院的管聚乙烯管。聚乙烯管插入导管内3-5毫米。请注意，只有聚乙烯管进入唾液腺管，而针外管仍然。通过过滤0.4％台盼蓝染色解决方案（猫＃15250，GIBCO，美国）的沃顿商学院的管，这是位于下方的舌头50ul注入颌下腺。输液交付稳步正压注射器活塞，活塞上的手指仍然即使所有的输液后已交付的腺体，以防止回流输液，口服内。台盼蓝溶液是用于视频展示技术作为一种染料。
- 后注射台盼蓝溶液，鼠标安乐死之前剥离。唾液腺手术暴露，以确定有多少的注入实际上仍然在腺体。
2。代表性的成果：
后分别注射输液，鼠标解剖手术暴露后空心唾液腺。图像2所示，沃顿商学院的管暗着色提供的证据表明，台盼蓝溶液注入成功。
图1小鼠颌下腺的管子。
图2。聚乙烯管了29号针头的针尖周围包裹。作为一个刚性的导轨移动到沃顿商学院的管聚乙烯管注射器针头。聚乙烯管插入管道内（空心）3-5毫米。请注意，只有聚乙烯管进入唾液腺管，而针外管仍然。
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Discussion
使用此插管方法是一个困难的注入解决方案，以防止回流。台盼蓝溶液，即使暂时成功地迁移到唾液腺，唾液分泌可能会干扰与输液，造成回流的台盼蓝溶液腺体。作为一项预防措施，除使用阿托品抑制唾液的分泌，聚乙烯套管应保持在沃顿商学院的管道和60秒后举行的注入已存入的注射器活塞。这将使大部分的注入的解决方案保持腺体内。
按照惯例，全身应用，即静脉注射药物/细胞（四），已被用来作为唾液腺再生的临床方法。静脉注射输液，将穿越整个循环系统，使只有一些药物/细胞迁移到有针对性的腺体。这种传统的方法相比，本地应用程序，即通过插管过程中的药物/细胞的注射，可能被视为一个更直接，更有效的方式，在复苏的腮腺，颌下腺和舌下唾液腺功能。因此，这插管技术可以被用来作为一个可靠的模型小鼠唾液腺的再生医学;并作为未来发展前景，这个过程可能是一个权宜的方法，为临床应用。
它会为这种视觉的文章很高兴能够作为一个有效的工具，在唾液腺的再生医学的进一步研究有兴趣的学生和研究人员使用。
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Disclosures
所有的实验已经大学动物保健委员会批准，并按照加拿大动物保健委员会的指引。
Acknowledgments
作者感谢技术咨询安娜Cotrim博士和博士Monzur设备Murshed。这项工作是由加拿大卫生研究院资助部分。
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare, Covidien | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | GIBCO, by Life Technologies | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
