Ethanolfixierung und DAPI-Färbung: Eine Methode zur Visualisierung von DNA in C. elegans

- Beginnen Sie mit einem Tropfen Pufferlösung auf einem Objektträger und übertragen Sie intakte Würmer auf das Tröpfchen. Sobald die Würmer an Ort und Stelle sind, verwende ein fusselfreies Taschentuch, um den Puffer aufzusaugen und zu entfernen. Fixieren Sie die Probe, indem Sie die Proben mehrmals mit 90%igem Ethanol baden, damit es nach jeder Anwendung verdampfen kann.

Sobald das Ethanol nach der letzten Spülung verdampft ist, fügen Sie der Probe eine Lösung hinzu, die den Nukleinsäurefarbstoff DAPI enthält. DAPI bindet bevorzugt an Adenin- und Thyminbasen in der kleinen Rille der DNA. Wenn der DAPI-DNA-Komplex gebunden ist, absorbiert er UV-Licht und emittiert sichtbares blaues Licht.

Fügen Sie anschließend ein Anti-Fade-Konservierungsmittel hinzu, um die Haltbarkeit der Probe zu verlängern. Bringen Sie ein Deckglas an und versiegeln Sie es mit dem Objektträger. Verwenden Sie dann ein Fluoreszenzmikroskop mit Blaufilter, um DAPI-Körper sichtbar zu machen, die je nach Zelle und ihrem Zyklusstatus einzelne Chromosomen, Schwesterchromatidenpaare oder ganze Zellkerne darstellen können. In diesem Experiment werden wir DAPI-gefärbte Schwesterchromatidenpaare in Eizellen zählen, um te